Анализ: Лактазная недостаточность (ПЦР) буккальный эпителий в Луганске

Краткая История:
Лактазная недостаточность (ЛН) – неспособность переваривать молочный сахар лактозу – известна давно, но ее генетическая природа стала понятна относительно недавно. У большинства млекопитающих активность фермента лактазы, расщепляющей лактозу, снижается после прекращения молочного вскармливания. Однако у части человеческой популяции, преимущественно в регионах с давней историей молочного животноводства, возникла и закрепилась генетическая мутация (полиморфизм), обеспечивающая сохранение высокой активности лактазы во взрослом возрасте (лактазная персистенция). В конце XX века ученые идентифицировали ключевой однонуклеотидный полиморфизм (SNP) C/T(-13910) в регуляторной области гена MCM6, расположенного рядом с геном лактазы (LCT) на 2-й хросомосоме. Генотип СС(-13910) ассоциирован с первичной взрослой гиполактазией, а генотипы CT(-13910) и TT(-13910) – с лактазной персистенцией. Разработка ПЦР-методов позволила надежно и быстро определять этот полиморфизм, ставший основным генетическим маркером первичной ЛН у взрослых.

Материал, используемый для исследования:

• Основной материал: Буккальный эпителий (соскоб клеток со слизистой оболочки внутренней поверхности щеки). Собирается специальной стерильной цитощеткой или зондом.

Как подготовиться к анализу:
Подготовка к забору буккального эпителия проста и неинвазивна:

1. Не есть, не пить, не жевать жвачку, не курить минимум за 1 час до процедуры. Это необходимо для предотвращения загрязнения образца остатками пищи, напитков или слюны.
2. Не чистить зубы и не использовать ополаскиватель для рта минимум за 1 час до забора материала. Компоненты зубной пасты и ополаскивателей могут ингибировать ПЦР.
3. Перед процедурой: Можно прополоскать рот чистой водой за 10-15 минут до забора (если не было приема пищи), но тщательно сплюнуть воду. Непосредственно перед забором материал должен быть сухим.
4. Забор материала: Медицинский работник аккуратно проведет цитощеткой или зондом по внутренней поверхности щеки несколько раз, слегка надавливая, чтобы собрать достаточное количество слущенных эпителиальных клеток. Процедура безболезненна, может вызвать легкий дискомфорт или рвотный рефлекс у чувствительных людей.
5. После забора: Щетка/зонд помещается в специальный контейнер со стабилизирующим раствором для транспортировки в лабораторию. Непосредственно после забора можно есть и пить.

Описание данного вещества (Ген LCT / Полиморфизм C/T(-13910)):

• Ген LCT: Расположен на длинном плече 2-й хромосомы (2q21). Кодирует фермент лактазу-флоризингидролазу, который вырабатывается в энтероцитах (клетках слизистой) тонкого кишечника. Его основная функция – расщепление дисахарида лактозы (молочного сахара) на моносахариды глюкозу и галактозу, которые затем всасываются в кровь.
• Полиморфизм C/T(-13910): Это замена одного нуклеотида (цитозина (С) на тимин (Т)) в позиции -13910 относительно стартового сайта транскрипции гена LCT. На самом деле этот полиморфизм находится не в самом гене LCT, а в интроне 13 соседнего гена MCM6, но он играет ключевую роль в регуляции экспрессии гена LCT.
  • Аллель С(-13910): Ассоциирован со снижением экспрессии гена LCT после периода грудного вскармливания. У гомозигот (СС) активность лактазы во взрослом возрасте очень низкая (первичная лактазная недостаточность).
  • Аллель Т(-13910): Ассоциирован с сохранением высокой экспрессии гена LCT во взрослом возрасте (лактазная персистенция). Гетерозиготы (СТ) обычно сохраняют достаточную активность лактазы для переваривания умеренного количества лактозы.

Диагностика заболеваний:
Генетический тест на полиморфизм C/T(-13910) гена LCT методом ПЦР по буккальному эпителию используется для диагностики первичной (врожденной, взрослого типа) лактазной недостаточности. Это состояние обусловлено генетически запрограммированным снижением активности лактазы, которое обычно проявляется в подростковом или взрослом возрасте. Тест не диагностирует:

• Вторичную лактазную недостаточность: Возникает из-за повреждения слизистой тонкого кишечника (энтероцитов) при различных заболеваниях (кишечные инфекции, целиакия, болезнь Крона, лучевой энтерит, прием некоторых лекарств). Активность лактазы снижается временно и обычно восстанавливается после лечения основного заболевания.
• Врожденную лактазную недостаточность: Крайне редкое аутосомно-рецессивное заболевание, проявляющееся с рождения тяжелой диареей при кормлении грудным молоком. Вызвано мутациями в самом гене LCT, а не полиморфизмом C/T(-13910).

Цель исследования:

1. Подтверждение генетической причины непереносимости лактозы: Установить, являются ли симптомы непереносимости молочных продуктов (вздутие, метеоризм, диарея, боли в животе после употребления молока) следствием первичной (наследственной) лактазной недостаточности.
2. Дифференциальная диагностика: Отличить первичную ЛН от вторичной ЛН и от других состояний, вызывающих схожие симптомы (синдром раздраженного кишечника, пищевые аллергии, целиакия).
3. Определение генетической предрасположенности: Выявить носительство аллеля, связанного с персистенцией лактазы или гиполактазией, даже при отсутствии выраженных симптомов.
4. Индивидуализация диеты: Получение объективного генетического обоснования для рекомендаций по ограничению или исключению лактозосодержащих продуктов из рациона.
5. Прогноз для детей: При наличии семейного анамнеза ЛН определение генотипа у ребенка может помочь прогнозировать развитие непереносимости в будущем и корректировать питание.

Что значат полученные результаты:

• Генотип С/С (гомозигота по аллелю С):
  • Указывает на первичную лактазную недостаточность (взрослого типа).
  • Активность фермента лактазы во взрослом возрасте очень низкая.
  • Высокая вероятность развития симптомов непереносимости лактозы при употреблении молока и молочных продуктов, содержащих лактозу.
  • Рекомендовано соблюдение безлактозной или низколактозной диеты.
• Генотип С/Т (гетерозигота):
  • Указывает на частичную лактазную недостаточность.
  • Активность лактазы снижена, но обычно достаточна для переваривания небольших или умеренных количеств лактозы.
  • Симптомы непереносимости могут возникать при употреблении больших порций молочных продуктов или проявляться не всегда/не у всех.
  • Рекомендуется индивидуальный подбор диеты с ограничением лактозы по переносимости. Часто допустимы кисломолочные продукты (йогурт, кефир, сыры), где часть лактозы уже расщеплена бактериями.
• Генотип Т/Т (гомозигота по аллелю Т):
  • Указывает на лактазную персистенцию.
  • Активность фермента лактазы во взрослом возрасте сохраняется высокой.
  • Отсутствует генетическая предрасположенность к первичной лактазной недостаточности. Симптомы непереносимости лактозы при этом генотипе маловероятны и, если присутствуют, требуют поиска других причин (вторичная ЛН, СРК, аллергия и др.).

Факторы, влияющие на результат:

1. Качество образца буккального эпителия:
   • Недостаточное количество клеток: Если соскоб проведен некачественно и собрано мало клеток, выделение ДНК может быть неудачным.
   • Загрязнение: Прием пищи, напитков, жевание жвачки, курение, чистка зубов менее чем за час до забора приводят к загрязнению образца, что может помешать выделению ДНК или ингибировать ПЦР.
   • Неправильное хранение/транспортировка: Отсутствие стабилизирующего раствора, длительная транспортировка при неподходящей температуре может привести к деградации ДНК.
2. Технические ошибки ПЦР: Хотя метод надежен, ошибки на этапах выделения ДНК, подготовки реакционной смеси, амплификации или детекции теоретически возможны (очень редко при соблюдении протоколов).
3. Редкие генетические варианты: Стандартный тест на C/T(-13910) выявляет основной полиморфизм, ответственный за ЛН у большинства европеоидных популяций. Однако существуют другие, менее распространенные полиморфизмы (например, G/A(-22018) или полиморфизмы у представителей африканских или коренных американских популяций), которые также влияют на активность лактазы, но данным конкретным тестом не определяются.
4. Химеризм/Мозаицизм: Присутствие в организме клеток с разным генетическим материалом (например, после трансплантации костного мозга) может дать ложный результат при исследовании буккального эпителия, если донор и реципиент имеют разные генотипы по LCT.
5. Эпигенетические факторы: В редких случаях экспрессия гена LCT может модулироваться факторами, не затрагивающими саму последовательность ДНК, но влияющими на ее «считываемость». ПЦР на полиморфизм этого не выявляет.

Заключение:
Генетический тест на лактазную недостаточность по буккальному эпителию – это удобный, неинвазивный и высокоинформативный метод подтверждения первичной (наследственной) непереносимости лактозы. Его результаты помогают врачу (гастроэнтерологу, терапевту, диетологу) установить причину симптомов, дифференцировать первичную ЛН от вторичной и дать персонализированные рекомендации по питанию. Понимание своего генотипа позволяет осознанно управлять диетой и улучшать качество жизни.

Лаборатория Бойченко гарантирует точность и достоверность результатов благодаря современному оборудованию и высоким стандартам качества.

Список литературы (Лактазная недостаточность, буккальный эпителий):

1. Шульпекова Ю.О. Непереносимость лактозы: клиника, диагностика, подходы к лечению // РМЖ. Гастроэнтерология. – 2019. – Т. 3. – № 1(I). – С. 11-17.
2. Хавкин А.И., Комарова О.Н. Лактазная недостаточность у детей и взрослых // Лечащий врач. – 2017. – № 5. – С. 26-30.
3. Клинические рекомендации «Синдром мальабсорбции лактозы у взрослых». Научное общество гастроэнтерологов России, 2020.
4. Enattah, N. S., Sahi, T., Savilahti, E., Terwilliger, J. D., Peltonen, L., & Järvelä, I. (2002). Identification of a variant associated with adult-type hypolactasia. Nature Genetics, *30*(2), 233–237. (Ключевая статья об открытии полиморфизма).
5. Mattar, R., de Campos Mazo, D. F., & Carrilho, F. J. (2012). Lactose intolerance: diagnosis, genetic, and clinical factors. Clinical and Experimental Gastroenterology, *5*, 113–121. (Обзор методов диагностики).