Анализ: Микроскопия грибковой флоры в Луганске

Краткая История:
Микроскопия как метод выявления грибов в патологическом материале имеет давнюю историю, уходящую корнями в XIX век, когда были описаны многие возбудители микозов. Несмотря на развитие культуральных (посев) и молекулярно-генетических (ПЦР) методов, микроскопическое исследование остается первым, быстрым и часто решающим этапом в диагностике грибковых инфекций (микозов). Прямое обнаружение элементов гриба (гиф, дрожжевых клеток, спор) в тканях или отделяемом позволяет быстро подтвердить грибковую этиологию процесса и начать лечение, не дожидаясь результатов посева, который может занимать недели. Метод особенно важен при поверхностных микозах кожи, ногтей, слизистых, а также при исследовании мокроты, гноя, биоптатов.

Материал, используемый для исследования:
Материал зависит от локализации предполагаемой грибковой инфекции:

Кожа, ногти:Чешуйки кожи, соскоб с очага поражения, обрезки ногтевых пластин, волосы (с корнем).
Слизистые оболочки:Соскоб или мазок-отпечаток со слизистой полости рта, языка, влагалища, уретры, конъюнктивы.
Мокрота, бронхоальвеолярный лаваж (БАЛЖ):При подозрении на грибковую пневмонию (например, аспергиллез, кандидоз).
Гной, отделяемое ран, свищей.
Ликвор (спинномозговая жидкость):При подозрении на грибковый менингит (криптококкоз).
Моча:При подозрении на грибковую инфекцию мочевыводящих путей.
Биопсийный материал (ткани):При глубоких микозах или подозрении на них.

Как подготовиться к анализу:
Подготовка определяется типом материала:

Кожа/Ногти:
- Прекратить использование местных противогрибковых кремов/мазей/лаков за 7-14 дней до забора (по согласованию с врачом!).
- Не обрабатывать очаг поражения йодом, зеленкой, спиртом в течение нескольких дней.
- Не мыть область поражения с мылом непосредственно перед забором (можно вечером накануне).
Слизистые (рот, влагалище, уретра):
- Рот:См. подготовку к мазку из ротовой полости (не чистить зубы/не полоскать утром, не есть/не пить за 2 часа).
- Влагалище/Уретра:Забор обычно проводится гинекологом/урологом.
  - Не применять местные препараты (свечи, кремы, спринцевания) за 3-7 дней.
  - Исключить половые контакты за 24-48 часов.
  - Не мочиться за 1.5-2 часа до забора материала из уретры.
  - Забор предпочтительно проводить не ранее 5 дня менструального цикла (не во время менструации).
- Мокрота:Собирать утром, натощак, после тщательного полоскания рта водой (не антисептиком!), при глубоком откашливании.
- Общие рекомендации:
  - Сообщить врачу о принимаемых системных противогрибковых препаратах или антибиотиках.
  - Следовать указаниям врача относительно места и времени забора.

Описание данного исследования:
Микроскопия грибковой флоры – это исследование патологического материала под микроскопом с целью прямого обнаружения элементов грибов. Для повышения информативности используются различные методы обработки материала:

Нативный препарат (необработанный):Материал помещают в каплю физиологического раствора или 10-20% раствора KOH (гидроксид калия). KOH растворяет кератин (чешуйки кожи, ногти, слизь), делая грибные структуры более видимыми. Позволяет увидеть гифы, дрожжевые клетки, споры.
Окрашенный препарат:
- Окраска по Граму:Дрожжевые клетки Candida окрашиваются в синий/фиолетовый цвет (Грам+), гифы могут окрашиваться слабо.
- Окраска метиленовым синим, лактофуксином:Для общей визуализации.
- Калькофлуор белый:Специальный флуоресцентный краситель, связывающийся с хитином и целлюлозой клеточной стенки грибов. При просмотре под флуоресцентным микроскопом грибы светятся ярко-зеленым. Очень чувствительный метод.
- Тушь (при исследовании ликвора на криптококк):Капля ликвора смешивается с тушью – капсула криптококка видна как светлый ореол вокруг дрожжевой клетки на черном фоне (тест негативного окрашивания).

Врач-лаборант или миколог исследует препарат под микроскопом (обычно сначала при малом, затем при большом увеличении, иммерсии) на наличие:

Гиф (нитевидные структуры) – септированные (с перегородками) или несептированные.
Псевдогифы (цепочки вытянутых дрожжевых клеток).
Дрожжевые клетки (почкующиеся или нет).
Артроспоры (бластоспоры, расположенные цепочками).
Споры (макроконидии, микроконидии).
Характерные структуры (например, друзы актиномицетов).

Цель исследования:
Основные цели микроскопии на грибы:

Быстрое подтверждение грибковой этиологии заболевания:Обнаружение элементов гриба в патологическом материале является прямым доказательством инфекции.
Дифференциальная диагностика:Отличить грибковое поражение от бактериального, вирусного, аллергического или неинфекционного дерматоза.
Ориентировочная идентификация типа гриба:Морфология элементов может указать на группу возбудителя:
- Дрожжевые клетки и псевдогифы – Candida spp.
- Разветвленные септированные гифы – Aspergillus spp., Fusarium spp. и др. гиалиновые гифомицеты.
- Широкие, слабо септированные или несептированные гифы – Mucorales (зигомицеты).
- Дрожжевые клетки с широкой капсулой в ликворе – Cryptococcus neoformans.
- Короткие гифы, распадающиеся на артроспоры – Geotrichum spp., Trichosporon spp.
- Кожные грибы (дерматофиты) в коже/ногтях/волосах: видимые гифы или артроспоры.
Контроль эффективности лечения:Снижение количества или исчезновение грибковых элементов в динамике.
Отбор материала для культурального исследования:Микроскопия помогает выбрать наиболее информативный материал для посева.

Диагностика заболеваний:
Микроскопия – ключевой метод диагностики при:

Дерматофитиях (дерматомикозах):Микроспория, трихофития, эпидермофития, руброфития, онихомикоз (грибок ногтей). Обнаружение гиф или артроспор в чешуйках кожи, ногтях, волосах.
Кандидозе:Кожный, слизистых (оральный, вагинальный), висцеральный. Обнаружение дрожжевых клеток, псевдогифов, гифов.
Разноцветном (отрубевидном) лишае:Обнаружение характерных скоплений округлых дрожжевых клеток и коротких изогнутых гиф («спагетти с фрикадельками») в кожных чешуйках.
Кератомикозах (Piedraia hortae, Trichosporon spp.):Обнаружение элементов гриба в узелках на волосах.
Аспергиллезе:Обнаружение септированных гиф характерного вида (дихотомическое ветвление под острым углом) в мокроте, БАЛЖ, биоптатах, отделяемом из пазух.
Мукормикозе (зигомикозе):Обнаружение широких несептированных (или слабо септированных) гиф с неправильным ветвлением в биоптатах или отделяемом.
Криптококкозе:Обнаружение дрожжевых клеток с характерной капсулой в ликворе (тушь-препарат), мокроте, биоптатах.
Пневмоцистозе (Pneumocystis jirovecii):Обнаружение цист и трофозоитов в мокроте или БАЛЖ (окраска по Романовскому-Гимзе, Грокотту, калькофлуором белым).

Что значат полученные результаты:
Результат формулируется как:

«Обнаружены элементы гриба»:Это положительный результат, подтверждающий наличие грибковой инфекции. Описывается вид найденных структур:
- Дрожжевые клетки (бластоспоры):Указывает на дрожжевую инфекцию (чаще всего Candida spp., реже Cryptococcus, Trichosporon и др.).
- Псевдогифы:Характерны для Candida albicans и некоторых других Candida spp., указывают на инвазивный рост.
- Гифы (мицелий):
  - Септированные гифы:Могут принадлежать дерматофитам, Aspergillus spp., Fusarium spp., Scedosporium spp. и др.
  - Несептированные гифы:Характерны для грибов порядка Mucorales (Mucor, Rhizopus, Lichtheimia).
- Артроспоры (артроконидии):Характерны для Geotrichum, Trichosporon, а также являются формой размножения дерматофитов в пораженном материале.
- Споры (конидии):Могут быть обнаружены (особенно при поверхностных микозах), имеют диагностическое значение при наличии характерных форм.
- Дрожжевые клетки с капсулой (в туши):Диагностический признак Cryptococcus neoformans/gattii.
«Элементы гриба не обнаружены»:Отрицательный результат. НЕ исключает полностью грибковую инфекцию (грибов может быть мало, материал взят неудачно, пациент применял противогрибковые средства). Требует оценки в комплексе с клиникой и другими исследованиями (посев, ПЦР).

Факторы, влияющие на результат:

Качество забора материала:Забор с неповрежденного участка, недостаточное количество материала, поверхностный соскоб без чешуек – главные причины ложноотрицательных результатов.
Предварительная местная терапия:Применение противогрибковых средств перед забором материала подавляет грибы.
Метод обработки материала:
- Неправильная концентрация или время воздействия KOH (слишком слабое – не очищает препарат, слишком сильное – разрушает грибы).
- Некачественная окраска.
- Неиспользование чувствительных методов (калькофлуор белый).
Опыт исследователя:Требуется высокий уровень подготовки для распознавания грибковых элементов, особенно на фоне детрита, артефактов, бактерий.
Стадия заболевания:В начальной стадии или при хроническом вялом течении грибов в материале может быть мало.
Тип гриба:Некоторые грибы (например, гистоплазма) плохо видны при прямой микроскопии.
Ложноположительные результаты:Редко, могут быть вызваны артефактами (волокна, кристаллы, загрязнения), напоминающими гифы.

Лаборатория Бойченко гарантирует точность и достоверность результатов благодаря современному оборудованию и высоким стандартам качества.

Литература:

Сергеев А.Ю., Сергеев Ю.В. Грибковые инфекции. Руководство для врачей. — М.: Бином, 2008. — 480 с.
Климко Н.Н. Микозы: диагностика и лечение. Руководство для врачей. — М.: Медицинское информационное агентство, 2007. — 336 с.
Richardson M.D., Warnock D.W. Fungal Infection: Diagnosis and Management. 4th Edition. Wiley-Blackwell, 2012.
Лабораторная диагностика микозов: Клинические рекомендации / Под ред. Н.Н. Климко. — СПб.: Нордмедиздат, 2018. — 120 с.
Procop G.W., Church D.L., Hall G.S., Janda W.M., Koneman E.W., Schreckenberger P.C., Woods G.L. Koneman’s Color Atlas and Textbook of Diagnostic Microbiology. 7th Edition. Lippincott Williams & Wilkins, 2016. (Разделы по микологии).