Определение Helicobacter Pylori в биоматериале из ЖКТ

1. Краткая История
   Открытие Helicobacter pylori(H. pylori) в 1982 году австралийскими учеными Барри Маршаллом и Робином Уорреном стало революцией в гастроэнтерологии. До этого считалось, что в агрессивной кислой среде желудка бактерии существовать не могут, а причиной гастрита и язвы являются стресс и неправильное питание. Маршалл и Уоррен не только выделили бактерию из биоптатов желудка больных гастритом, но и Маршалл, чтобы доказать ее патогенность, выпил культуру H. pylori, вызвав у себя острый гастрит. За это открытие они получили Нобелевскую премию по физиологии и медицине в 2005 году. Установление роли H. pylori в развитии хронического гастрита, язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, MALT-лимфомы и рака желудка кардинально изменило подходы к лечению этих заболеваний – с подавления кислотности на эрадикацию (уничтожение) бактерии. С тех пор разработано множество методов диагностики H. pylori.
2. Материал, используемый для исследования
   Выбор материала зависит от метода исследования:
3. Инвазивные (требующие ФГДС и биопсии):
   • Биоптаты слизистой оболочки:
     • Антрального отдела желудка (минимум 1).
     • Тела желудка (минимум 1).
     • (Иногда) из зоны язвы или подозрительного образования.
   • Желудочный сок/слизь (менее часто).
4. Неинвазивные (не требующие ФГДС):
   • Кровь (сыворотка/плазма):Для серологических тестов (антитела).
   • Кал:Для выявления антигена H. pylori (ПЦР на H. pylori в кале также возможен, но менее распространен для первичной диагностики).
   • Выдыхаемый воздух:Для дыхательных тестов с меченой мочевиной (¹³С- или ¹⁴С-UBT).

3. Как подготовиться к анализу (Подробно)
   Подготовка крайне важнаи зависит от конкретного метода:

• Общие правила (для всех тестов, кроме серологии):
  • Антибиотики и препараты висмута:Отменить минимум за 4 недели до исследования. Они подавляют H. pylori, приводя к ложноотрицательным результатам.
  • Ингибиторы протонной помпы (ИПП): Омепразол, Пантопразол, Эзомепразол, Рабепразол, Лансопразол.Отменить минимум за 2 недели до исследования (кроме серологии). Они снижают кислотность и бактериальную нагрузку, что может исказить результаты быстрого уреазного теста, гистологии, дыхательного теста, ПЦР, теста на антиген в кале.
  • Н2-гистаминоблокаторы (Фамотидин, Ранитидин):Отменить минимум за 3-5 дней до исследования (кроме серологии).
  • Антациды (Альмагель, Фосфалюгель, Маалокс):Можно принимать, но отменить в день исследования (для дыхательного теста и ФГДС).
• Перед ФГДС с биопсией:
  • Голод:Полное голодание в течение 8-12 часов (обычно с вечера). Утром не пить воду.
  • Курение:Не курить в день исследования до процедуры.
• Дыхательный тест (UBT — Urea Breath Test):
  • Голод:Строгое голодание в течение 6-14 часов (уточнить в лаборатории). Утром можно выпить немного воды.
  • Гигиена полости рта:Утром почистить зубы.
  • Курение:Запрещено курить минимум за 6 часов до теста и до его окончания.
  • Физическая активность:Избегать физических нагрузок перед тестом.
  • Прием тестового раствора:Точно следовать инструкции лаборанта (задержать дыхание, выпить раствор, дышать в трубку в определенные моменты времени).
• Анализ кала на антиген H. pylori:
  • Сбор материала:Собирать в чистый сухой контейнер из разных мест каловой массы. Избегать попадания мочи и воды. Лучше использовать специальные контейнеры с ложечкой.
  • Хранение:Доставить в лабораторию как можно скорее (в течение 2-4 часов). Если немедленная доставка невозможна, хранить в холодильнике (+2..+8°C) не более 24 часов (уточнить требования лаборатории). Возможна заморозка для некоторых тестов.
• Серологический анализ крови (Антитела к H. pylori):
  • Голод:Рекомендуется сдавать натощак (8-12 часов), но не критично для большинства тестов.
  • Время суток:Предпочтительно утро.
  • Лекарства:Не влияют ИПП, антибиотики, висмут (так как определяются антитела, а не сам возбудитель). Однако, отмена ИПП/антибиотиков перед ФГДС все равно нужна, если серология – не единственный метод.
  • Курение:Не влияет существенно.

4. Описание данного исследования
   Цель – выявить наличие или отсутствие инфекции Helicobacter pyloriв желудке. Используются различные методы:

1. Инвазивные (требуют ФГДС):
   • Быстрый уреазный тест (CLO-тест, Campy-тест):Биоптат помещается в среду с мочевиной и индикатором pH. Если H. pylori присутствует, ее уреаза расщепляет мочевину на аммиак и CO2. Аммиак ощелачивает среду, вызывая изменение цвета индикатора (обычно с желтого на красный). Результат через несколько минут/часов.
   • Гистологическое исследование:Биоптаты фиксируются, окрашиваются специальными красителями (Гимза, Уорти-Старри, иммуногистохимия) и исследуются под микроскопом на предмет наличия бактерий. Позволяет оценить степень воспаления, атрофии, метаплазии, дисплазии.
   • Культуральный метод (бактериологический посев):Биоптат измельчается и высевается на специальные питательные среды. При наличии роста колоний H. pylori определяется их чувствительность к антибиотикам. Требует времени (до 7-14 дней), сложен, но дает информацию о чувствительности.
   • ПЦР (полимеразная цепная реакция) в биоптате:Обнаружение ДНК бактерии. Высокочувствительный и специфичный метод. Может определять гены вирулентности (CagA, VacA) и устойчивости к кларитромицину.
2. Неинвазивные:
   • ¹³С- или ¹⁴С-мочевинный дыхательный тест (UBT):Пациент выпивает раствор меченой мочевины (¹³С — нерадиоактивный, безопасный; ¹⁴С — слаборадиоактивный, реже используется). Если в желудке есть H. pylori, ее уреаза расщепит меченую мочевину. Образовавшийся меченый CO2 попадает в кровь и выдыхается. Через определенное время (обычно 30 мин) измеряется концентрация меченого CO2 в выдыхаемом воздухе. Повышение – признак инфекции. Высокоточный метод для первичной диагностики и контроля эрадикации.
   • Иммунохроматографический тест на антиген H. pylori в кале:Обнаружение специфических белков (антигенов) бактерии в кале с помощью моноклональных антител. Простой, быстрый, недорогой метод. Точность зависит от качества тест-системы.
   • Серологические тесты (ИФА):Обнаружение антител (IgG, реже IgA, IgM) к H. pylori в крови. Указывает на факт инфицирования в настоящем или прошлом. Не подходит для контроля эрадикации сразу после лечения, так как антитела сохраняются месяцы и годы. Полезен для эпидемиологических исследований, при невозможности отменить ИПП или при кровоточащих язвах.

5. Диагностика заболеваний

• Хронический гастрит(антральный, фундальный, пангастрит).
• Язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки.
• MALT-лимфома желудка.
• Аденокарцинома желудка.
• Функциональная диспепсия(в части случаев ассоциирована с H. pylori).
• Железодефицитная анемия неясного генеза.
• Идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура (ИТП).

6. Цель исследования (Подробно)

• Первичная диагностика H. pylori-инфекции:При наличии симптомов диспепсии (боль/дискомфорт в эпигастрии, изжога, отрыжка, тошнота, раннее насыщение), при эндоскопических признаках гастрита/язвы, при отягощенном семейном анамнезе по раку желудка.
• Контроль эрадикации (уничтожения) H. pylori:Проверка успешности проведенного лечения. Критически важен. Проводится не ранее чем через 4 недели после окончания антибиотикотерапии и через 2 недели после отмены ИПП. Используются только тесты, выявляющие активную инфекцию: UBT, тест на антиген в кале, гистология с окраской, ПЦР. Серология не используется для контроля эрадикации!
• Диагностика причин рецидивирующей язвенной болезни.
• Обследование перед длительной терапией НПВП(нестероидными противовоспалительными препаратами) у пациентов с риском язвообразования.
• Скрининг и диагностика у пациентов с высоким риском рака желудка(семейный анамнез, хронический атрофический гастрит, состояние после резекции желудка по поводу рака).
• Диагностика причин железодефицитной анемии или ИТПпри исключении других причин.
• Эпидемиологические исследования.

7. Что значат полученные результаты (Подробно)

• Положительный результат (для UBT, теста на антиген в кале, быстрого уреазного теста, гистологии/ПЦР с обнаружением бактерий):Указывает на наличие активной инфекции H. pylori в желудке. Требуется консультация гастроэнтеролога для решения вопроса об эрадикационной терапии.
• Отрицательный результат (для UBT, теста на антиген в кале, быстрого уреазного теста, гистологии/ПЦР без обнаружения бактерий):С высокой вероятностью активная инфекция H. pylori отсутствует. Важно: Отрицательный результат на фоне приема ИПП/антибиотиков/висмута может быть ложным. Необходимо убедиться, что подготовка была соблюдена.
• Серология (Антитела IgG к H. pylori):
  • Положительный:Указывает на то, что организм встречался с H. pylori (текущая инфекция или перенесенная в прошлом). Не различает активную и перенесенную инфекцию. Сам по себе не является показанием к лечению без подтверждения активной инфекции другими методами или наличия серьезных показаний (язва в анамнезе, MALT-лимфома и др.).
  • Отрицательный:С высокой вероятностью инфицирования H. pylori никогда не было (или было очень давно, и титр антител упал). Ложноотрицательный возможен на ранней стадии инфекции (до выработки антител).
• Гистология:Помимо факта наличия/отсутствия бактерий, дает детальную информацию о состоянии слизистой (степень и активность воспаления, атрофия, кишечная метаплазия, дисплазия), что важно для оценки риска рака.
• Посев:Показывает рост колоний H. pylori (+) и предоставляет важнейшую информацию о чувствительности к антибиотикам, что позволяет выбрать оптимальную схему эрадикации, особенно при неэффективности предыдущего лечения.

8. Факторы, влияющие на результат (Подробно)

• Прием лекарств:Самая частая причина ошибок. Антибиотики, препараты висмута, ИПП, H2-блокаторы (особенно перед UBT, тестом на антиген, уреазным тестом, гистологией/ПЦР) – приводят к ложноотрицательным результатам. Строгое соблюдение сроков отмены!
• Кровотечение (язвенное, эрозивное):Может снижать точность быстрого уреазного теста и гистологии (ложноотрицательный результат).
• Атрофия слизистой желудка:При выраженной атрофии и кишечной метаплазии количество H. pylori может быть очень мало или бактерии могут отсутствовать в биоптате (ложноотрицательный результат), хотя инфекция в других отделах может сохраняться.
• Рак желудка:Опухолевая ткань может быть не заселена H. pylori.
• Недавно перенесенная эрадикационная терапия:Контроль проводится слишком рано (менее 4 нед после антибиотиков и 2 нед после ИПП) – ложноотрицательный результат.
• Качество забора биоптатов:Биопсия должна браться из правильных мест (антрум, тело), достаточного размера и количества. Неправильный забор снижает чувствительность инвазивных тестов.
• Качество доставки и обработки материала:
  • Для гистологии/посева/ПЦР: Неправильная фиксация, хранение, транспортировка биоптатов.
  • Для анализа кала: Длительное хранение при комнатной температуре, замораживание/размораживание (если не разрешено инструкцией теста).
  • Для UBT: Нарушение процедуры проведения (несоблюдение времени, неправильное дыхание в трубку).
• Курение перед UBT:Может влиять на результат.
• Серология:Перенесенная в прошлом инфекция (антитела сохраняются). Ранняя стадия инфекции (антитела еще не выработались — ложноотрицательный). Иммунодефицитные состояния (сниженный иммунный ответ — ложноотрицательный). Перекрестные реакции с другими бактериями (редко, ложноположительный).
• Метод исследования:Чувствительность и специфичность разных методов варьируются (UBT и ПЦР в кале/биоптате — высокие; быстрый уреазный тест — зависит от нагрузки; серология — не для активной инфекции).

Заключение:
Диагностика Helicobacter pylori – обязательный этап при многих заболеваниях верхних отделов ЖКТ. Выбор метода зависит от клинической ситуации, доступности, необходимости оценки чувствительности к антибиотикам или контроля эрадикации. Строжайшее соблюдение правил подготовки, особенно отмены определенных лекарств, является залогом достоверного результата. Правильная интерпретация результатов врачом-гастроэнтерологом позволяет принять решение о необходимости и тактике эрадикационной терапии, направленной на устранение причины заболевания.

Лаборатория Бойченко гарантирует точность и достоверность результатов благодаря современному оборудованию и высоким стандартам качества.

Список литературы:

1. Ивашкин В.Т., Маев И.В., Лапина Т.Л. и др. Диагностика и лечение инфекции Helicobacter pylori у взрослых. Клинические рекомендации Российской гастроэнтерологической ассоциации. Рос журн гастроэнтерол гепатол колопроктол. 2018;28(1):55-70. (Рус.)
2. Маев И.В., Самсонов А.А., Андреев Н.Г. Заболевания желудка и двенадцатиперстной кишки. — М.: ГЭОТАР-Медиа, 2015. — Глава по H. pylori. (Рус.)
3. Malfertheiner, P., Megraud, F., O’Morain, C. A., Gisbert, J. P., Kuipers, E. J., Axon, A. T., … & Leja, M. (2017). Management of Helicobacter pylori infection—the Maastricht V/Florence Consensus Report. Gut, 66(1), 6-30.
4. Chey, W. D., Leontiadis, G. I., Howden, C. W., & Moss, S. F. (2017). ACG clinical guideline: treatment of Helicobacter pylori infection. The American journal of gastroenterology, 112(2), 212-239.
5. Best, L. M., Takwoingi, Y., Siddique, S., Selladurai, A., Gandhi, A., Low, B., … & Gurusamy, K. S. (2018). Non‐invasive diagnostic tests for Helicobacter pylori infection. Cochrane Database of Systematic Reviews, (3).