Анализ: ПЦР HBV — качественный в Луганске

1. Краткая История
   Вирус гепатита B (HBV) был открыт в 1965 году Барухом Бламбергом, получившим Нобелевскую премию за это открытие. Качественная ПЦР-диагностика HBV появилась в 1990-х годах, став революцией в выявлении вируса. Этот метод позволил обнаруживать ДНК HBV даже при низкой вирусной нагрузке, где серологические тесты (ИФА, HBsAg) были малоэффективны. Точность и чувствительность ПЦР сделали её «золотым стандартом» для подтверждения активной репликации вируса, особенно у пациентов с иммуносупрессией или скрытыми формами гепатита B.
2. Материал, используемый для исследования

• Основной материал: Плазма крови (предпочтительно) или сыворотка крови.
• Тип пробирки:
  • Для плазмы: Пробирка с ЭДТА (фиолетовая крышка).
  • Для сыворотки: Пробирка без антикоагулянта (красная крышка).
• Объем: 4-5 мл крови.
• Обработка:
  • Плазму/сыворотку отделить от клеток крови в течение 2-4 часов после взятия.
  • Хранить при +2…+8°C до 72 часов; для длительного хранения заморозить при -70°C.
• Важно: Избегать гемолиза, липемии, повторных замораживаний-оттаиваний.

3. Как подготовиться к анализу

• Голодание: Не требуется, но предпочтительно сдавать утром натощак (8-12 часов без пищи).
• Время сдачи: Любое время суток.
• Лекарственные препараты:
  • Противовирусные (тенофовир, энтекавир) не отменять – анализ оценивает их эффективность.
  • Гепарин может ингибировать ПЦР – сообщите врачу о его приеме.
• Алкоголь и курение: Исключить за 24 часа.
• Физические нагрузки: Избегать интенсивных нагрузок накануне.
• Инструментальные вмешательства: После биопсии печени или переливания крови выждать 2 недели.

4. Описание метода
   Качественная ПЦР обнаруживает ДНК HBVв образце, давая ответ:

• «Обнаружено» – вирус присутствует, активная репликация.
• «Не обнаружено» – ДНК HBV ниже порога чувствительности теста (обычно 10–50 МЕ/мл).
  Методика:

1. Экстракция ДНК: Выделение вирусной ДНК из плазмы/сыворотки.
2. Амплификация: Многократное копирование целевых участков генома HBV (например, гена preCore/Core) с помощью фермента Taq-полимеразы и специфических праймеров.
3. Детекция: Электрофорез в геле или флуоресцентные зонды (SYBR Green, TaqMan).
   Контроли качества:

• Внешний контроль (образцы с известным статусом HBV).
• Внутренний контроль (искусственная ДНК для исключения ложноотрицательных результатов).

5. Диагностика заболеваний
   Анализ применяется для:

• Подтверждения активной HBV-инфекции при:
  • Отрицательном HBsAg, но положительном anti-HBc («скрытый гепатит B»).
  • Серонегативном периоде острого гепатита B (до появления HBsAg).
• Диагностики перинатальной передачи – выявление ДНК HBV у новорожденных от HBsAg-позитивных матерей.
• Контроля вирусной репликации у HBsAg-негативных пациентов на иммуносупрессивной терапии (риск реактивации HBV).
• Оценки эффективности вакцинации у групп риска (медработники).

6. Цель исследования

1. Верификация активной инфекции: Отличие репликации вируса от иммунного ответа (anti-HBc+, HBsAg-).
2. Ранняя диагностика острого гепатита B: Обнаружение ДНК HBV до сероконверсии.
3. Выявление оккультного гепатита B: Диагностика скрытых форм у пациентов с хроническими заболеваниями печени.
4. Оценка риска передачи: Для беременных с HBV и реципиентов донорских органов.
5. Контроль реактивации HBV: У пациентов перед химиотерапией или лечением биологическими препаратами.

7. Что значат полученные результаты

• «Обнаружено»:
  • Активная репликация HBV в печени.
  • Пациент заразен (риск передачи через кровь, половой путь, от матери к ребенку).
  • Требуется определение стадии гепатита (острый/хронический) и вирусной нагрузки (количественный ПЦР).
• «Не обнаружено»:
  • ДНК HBV ниже порога чувствительности теста.
  • Не исключает:
    • Латентную инфекцию (вирус интегрирован в геном гепатоцитов).
    • Очень низкую виремию (<10 МЕ/мл).
    • Ложноотрицательный результат (при гемолизе, нарушении преаналитики).
• Интерпретация в динамике:
  • Исчезновение ДНК HBV после лечения – признак эффективности терапии.
  • Появление ДНК HBV у серонегативного пациента – возможная реактивация инфекции.

8. Факторы, влияющие на результат

• Преаналитические ошибки:
  • Гемолиз, липемия – ингибируют ПЦР.
  • Несвоевременная обработка пробы (>6 часов) – деградация ДНК.
  • Неправильное хранение – ложное снижение виремии.
• Биологические факторы:
  • Низкая вирусная нагрузка (<50 МЕ/мл) – риск ложноотрицательного результата.
  • Мутации в гене preCore/Core – ложное отсутствие амплификации.
• Технические ограничения:
  • Чувствительность тест-систем (10–50 МЕ/мл).
  • Контаминация в лаборатории – ложноположительный результат.

Лаборатория Бойченко гарантирует точность и достоверность результатов благодаря современному оборудованию и высоким стандартам качества.

Список литературы:

1. Raimondo G. et al. Update of the statements on biology and clinical impact of occult hepatitis B virus infection. J Hepatol. 2019.
2. European Association for the Study of the Liver. EASL 2017 Clinical Practice Guidelines on the management of hepatitis B virus infection. J Hepatol. 2017.
3. Gish R.G. et al. Molecular diagnosis of hepatitis B and C infections in clinical practice. Clin Liver Dis. 2017.
4. Caligiuri P. et al. Diagnostic accuracy of assays for detection of hepatitis B virus DNA: a systematic review. Clin Chem. 2020.
5. WHO Guidelines on Hepatitis B and C Testing. Geneva: World Health Organization, 2017.