720 ₽

Код анализа: 824

Заказать

ПЦР хламидия пневмония (по слюне)

ДНК Chlamydia pneumoniae (хламидия пневмония) методом ПЦР (качественное определение)

Краткая История

Chlamydia pneumoniae (C. pneumoniae) была впервые выделена в 1965 году из конъюнктивы ребенка на Тайване и первоначально названа TW-183. В 1989 году была официально классифицирована как отдельный вид рода Chlamydia, отличный от Chlamydia trachomatis (урогенитальный хламидиоз, трахома) и Chlamydia psittaci (орнитоз). C. pneumoniae является облигатным внутриклеточным паразитом и передается воздушно-капельным путем. Долгое время диагностика C. pneumoniae основывалась на серологических методах (определение IgM, IgG), которые имеют низкую специфичность из-за перекрестных реакций с другими хламидиями, а также на культуральном методе (посев на клеточные линии), который является «золотым стандартом», но технически сложен, длителен (7-14 дней) и малодоступен. В 1990-2000-х годах, с развитием полимеразной цепной реакции (ПЦР), стало возможным быстрое (4-6 часов) и высокочувствительное выявление ДНК C. pneumoniae в респираторных образцах (мокрота, мазки из ротоглотки и носоглотки, бронхоальвеолярный лаваж). Сегодня ПЦР является методом выбора для экспресс-диагностики пневмонии, вызванной C. pneumoniae, особенно у детей, у пациентов с атипичным течением, а также для эпидемиологических исследований.

Материал, используемый для исследования

- Тип образца:Респираторный материал.
- Локализация забора материала (в зависимости от клинических проявлений):

Мазок из ротоглотки (зев):Основной материал, особенно для амбулаторных пациентов и детей. Забор производится специальным стерильным зондом (Dacron или rayon, не кальций-альгинатным, так как он ингибирует ПЦР) с задней стенки глотки, с миндалин и нёбных дужек .
Мазок из носоглотки:Альтернативный материал, особенно при заложенности носа. Зонд вводится через ноздрю до задней стенки носоглотки .
Мокрота:При продуктивном кашле. Пациент должен откашлять глубокую мокроту из бронхов, а не слюну. Рот перед сбором прополаскивают водой .
Слюна:Согласно некоторым источникам, слюна может использоваться как материал для ПЦР, однако чувствительность может быть ниже, чем при использовании специализированных транспортных сред .
Бронхоальвеолярный лаваж (БАЛ), биоптат легкого, плевральная жидкость:При тяжелой пневмонии, у госпитализированных пациентов, при бронхоскопии .

Тип пробирки/системы сбора:

Для мазков:Специальная пробирка с транспортной средой для ПЦР (VTM, UTM, M4). Это жидкая среда, содержащая антибиотики и буфер, предотвращающий деградацию ДНК и рост бактерий. Зонд споласкивается в среде и удаляется, либо обламывается в пробирку .
Для мокроты, БАЛ, плевральной жидкости:Стерильный пластиковый контейнер с герметичной крышкой .
- Объем материала:Мазок – достаточное количество эпителиальных клеток; мокрота – 1-3 мл; слюна – 0,5-1 мл .
- Обработка:Доставка в лабораторию осуществляется в день взятия (или в течение 12 часов при хранении при +2…+8°C). Замораживание не допускается. Стабильность ДНК в транспортной среде при комнатной температуре – до 21 дня (в зависимости от системы сбора), при +2…+8°C – до 24-48 часов.

Как подготовиться к анализу

Подготовка к анализу критически важна для получения достоверного результата (исключение ложноотрицательных результатов):

Для мазка из ротоглотки:

За 2-3 часа до взятия материала не есть, не пить, не курить, не чистить зубы, не использовать ополаскиватели для рта, леденцы, спреи для горла .
Непосредственно перед взятием мазка прополоскать рот водой (для удаления остатков пищи и слизи) .

Для сбора мокроты:

Утром, после пробуждения, прополоскать рот водой. Сделать 2-3 глубоких вдоха, откашлять мокроту из глубоких отделов бронхов в стерильный контейнер. Важно:Не собирать слюну! .

Для сбора слюны:

Собрать слюну в стерильный контейнер, стараясь не загрязнять ее кровью или остатками пищи.

Общие требования:

За 2-4 неделидо исследования исключить прием антибиотиков (особенно макролидов, тетрациклинов, фторхинолонов), которые могут снижать бактериальную нагрузку и приводить к ложноотрицательному результату ПЦР.
Сообщить врачу о наличии острых инфекционных заболеваний (лихорадка, ОРВИ) – анализ следует отложить на 2-4 недели после выздоровления (или сдать в острый период, так как ПЦР выявляет ДНК возбудителя в активной фазе).

Описание данного вещества (Chlamydia pneumoniae и метод ПЦР)

Chlamydia pneumoniae – это грамотрицательная, облигатная внутриклеточная бактерия, относящаяся к семейству Chlamydiaceae. Является одной из основных причин атипичной пневмонии (наряду с Mycoplasma pneumoniae и Legionella pneumophila), составляя 6-20% случаев внебольничных пневмоний у взрослых и 5-15% у детей . Передается воздушно-капельным путем, инкубационный период длительный – 15-23 дня .

Клинические проявления:

Внебольничная пневмония (атипичная):Характеризуется постепенным началом, длительным течением. Основные симптомы: сухой или малопродуктивный кашель (может сохраняться неделями), субфебрильная температура, боль в горле, охриплость голоса, головная боль, слабость . Рентгенологически: интерстициальная пневмония или мелкоочаговые инфильтраты в нижних долях .
Бронхит, фарингит, синусит, отит:Часто предшествуют пневмонии или протекают изолированно.
Внелегочные проявления:У некоторых пациентов C. pneumoniae ассоциирована с развитием реактивного артрита, миокардита, энцефалита, атеросклероза (данные о роли в атеросклерозе противоречивы) .

Метод ПЦР (полимеразная цепная реакция):

Качественная ПЦР:Определяет наличие (обнаружено/не обнаружено) ДНК C. pneumoniae в образце. Не позволяет оценить бактериальную нагрузку. Чувствительность метода – 10-100 копий ДНК в пробе. Специфичность – 98-100% .
Чувствительность ПЦРдля диагностики C. pneumoniae пневмонии варьирует в зависимости от типа образца: для мазков из носо- и ротоглотки она составляет около 80-90%, но может быть ниже (36-82%) по сравнению с серологическими методами (IgM MIF), особенно у детей с непродуктивным кашлем . Бронхоальвеолярный лаваж (БАЛ) является наиболее чувствительным образцом, но его получение инвазивно .
Специфичность:Высокая (99%). Праймеры к специфическим участкам генома C. pneumoniae (например, гену 60 кДа белка наружной мембраны Omp2 или 16S рРНК) обеспечивают отсутствие перекрестных реакций с C. trachomatis и C. psittaci .

Диагностика заболеваний

Качественное определение ДНК Chlamydia pneumoniae используется для:

Экспресс-диагностики атипичной пневмонии (внебольничной):ПЦР является методом выбора для быстрого (4-6 часов) подтверждения этиологии пневмонии, когда клинические и рентгенологические данные указывают на атипичный характер (сухой кашель, нормальные лейкоциты, интерстициальные изменения) .
Дифференциальной диагностики респираторных инфекций:В составе мультиплексной ПЦР-панели, включающей Mycoplasma pneumoniae, Legionella pneumophila, Bordetella pertussis, а также респираторные вирусы (грипп, аденовирус, РС-вирус и др.) .
Диагностики у детей: pneumoniae является значимой причиной пневмонии у детей школьного возраста (5-15 лет). ПЦР мазка из ротоглотки – предпочтительный метод (неинвазивный, быстрый), хотя чувствительность может быть ниже, чем у серологии .
Эпидемиологических исследований:Для выявления вспышек в организованных коллективах (школы, казармы, дома престарелых).

Цель исследования

Основные цели качественного определения ДНК Chlamydia pneumoniae:

Лабораторное подтверждение пневмонии, вызванной C. pneumoniae(атипичная пневмония).
Дифференциальная диагностика затяжного кашля(отличие от коклюша, микоплазменной инфекции, вирусного бронхита).
Эпидемиологический мониторинги выявление вспышек в закрытых коллективах.
Обследование пациентов с внебольничной пневмонией, не отвечающих на стандартную бета-лактамную терапию(так как C. pneumoniae устойчива к пенициллинам и цефалоспоринам).

Что значат полученные результаты

Интерпретация результатов определения ДНК Chlamydia pneumoniae всегда проводится врачом-терапевтом, пульмонологом, инфекционистом в контексте клинической картины (наличие кашля > 5-7 дней, субфебрилитет, боль в горле, отсутствие эффекта от бета-лактамов), рентгенологических данных, а также с учетом результатов других тестов (микоплазма, легионелла, вирусы). Референсное значение – «не обнаружено» .

Референсные значения (качественная ПЦР):

Отрицательный результат («не обнаружено»):ДНК Chlamydia pneumoniae в исследуемом образце не обнаружена (или концентрация ниже предела чувствительности метода, обычно < 10-100 копий ДНК). Пневмония, вызванная C. pneumoniae, маловероятна. Однако у детей, особенно с непродуктивным кашлем, возможно ложноотрицательные результаты (низкое содержание ДНК в мазке из ротоглотки) .
Положительный результат («обнаружено»):ДНК Chlamydia pneumoniae обнаружена в исследуемом образце. Указывает на текущую инфекцию C. pneumoniae. В большинстве случаев это соответствует острой пневмонии, бронхиту или фарингиту. Положительный результат ПЦР является прямым доказательством наличия возбудителя и требует назначения антибиотикотерапии (макролиды, тетрациклины, фторхинолоны).

Интерпретация в зависимости от клинической ситуации:

Положительный ПЦР + симптомы (кашель, субфебрилитет, боль в горле) + рентгенологические изменения (интерстициальная пневмония):

Интерпретация:Атипичная пневмония (Chlamydia pneumoniae-этиология). Требует назначения антибиотиков (азитромицин, кларитромицин, доксициклин, левофлоксацин). Бета-лактамы (пенициллины, цефалоспорины) не эффективны.

Положительный ПЦР + затяжной кашель (> 2-3 недель) без пневмонии (рентген чистая):

Интерпретация:Хламидийный бронхит или постинфекционный кашель. Требует лечения (обычно азитромицином).

Отрицательный ПЦР + высокая клиническая вероятность пневмонии, вызванной C. pneumoniae:

Интерпретация: pneumoniae не исключена (возможна низкая бактериальная нагрузка или неправильный забор материала). Рекомендуется повторить ПЦР (или исследовать другой материал – мокроту, БАЛ), а также провести серологическое исследование (IgM, IgG в парных сыворотках с интервалом 2-4 недели) .

Важные нюансы интерпретации:

ПЦР vs серология:Серологические методы (определение IgM и IgG) выявляют антитела, которые появляются через 2-3 недели после начала заболевания. ПЦР выявляет ДНК возбудителя в активной фазе (первые 1-3 недели). Сочетание ПЦР и серологии повышает диагностическую чувствительность (особенно у детей, у которых ПЦР мазка может быть ложноотрицательной) .
Ложноположительный результат:Возможен при контаминации образца (несоблюдение правил асептики, загрязнение реагентов). Частота ложноположительных результатов в хорошо организованных лабораториях составляет менее 1%.
Ложноотрицательный результат:Возможен при неправильном взятии материала (недостаточное количество эпителиальных клеток), при длительном хранении образца (деградация ДНК), при подавлении ПЦР (ингибиторы в образце – кровь, слизь), при очень низкой концентрации C. pneumoniae (ниже предела чувствительности), при приеме антибиотиков до анализа.

Факторы, влияющие на результат

На результат определения ДНК Chlamydia pneumoniae могут влиять различные преаналитические, аналитические и биологические факторы:

Преаналитические (до взятия материала):

Прием антибиотиков(макролиды, тетрациклины, фторхинолоны) за 2-4 недели до анализа – приводит к ложноотрицательным результатам (снижение бактериальной нагрузки, разрушение ДНК).
Неправильный сбор материала:Сбор слюны вместо глубокой мокроты или неглубокий мазок из ротоглотки (недостаточное количество эпителиальных клеток).
Еда, питье, курение перед взятием мазка из ротоглотки– снижают количество эпителиальных клеток.
Использование неправильных зондов (кальций-альгинатных):Они содержат ингибиторы ПЦР .

Аналитические (на этапе лабораторного исследования):

Контаминация реагентов и лабораторной посудыампликонами (продуктами ПЦР) – ложноположительный результат.
Ингибиторы ПЦРв образце (кровь, слизь, компоненты транспортной среды) – ложноотрицательный результат.
Чувствительность тест-системы:Разные коммерческие наборы имеют разную чувствительность (10-100 копий ДНК) .

Биологические факторы:

Возраст:У детей раннего возраста (< 5 лет) C. pneumoniae встречается реже, чем у школьников и взрослых. У детей часто низкая бактериальная нагрузка, что снижает чувствительность ПЦР .
Стадия заболевания:В первые дни заболевания (1-5 дней) бактериальная нагрузка может быть еще низкой. Лучше исследовать на 5-14 день.

Лаборатория Бойченко гарантирует точность и достоверность результатов благодаря современному оборудованию и высоким стандартам качества.

Список литературы:

Genoma Laboratório de Análise Clínica. Chlamydia pneumoniae PCR qualitativo diversos.
Compunet Lab. Chlam Pneumoniae DNA PCR.
Creative Biogene. Mycoplasma pneumoniae / Chlamydophila pneumoniae real-time PCR kit.
National Institute of Standards and Technology. Selected article for: Chlamydia pneumoniae.
Ashwin Y.B., Perumalla S.K., et al. Serological and Molecular Methods in Diagnosis of Lower Respiratory Tract Infections Caused Due to Chlamydia pneumoniae. Current Medical Issues. 2020;18(4):296-299.