450 ₽

Код анализа: 125

Заказать

ПЦР Микобактерии туберкулеза

ДНК микобактерий туберкулеза (Mycobacterium tuberculosis complex) методом ПЦР (качественное и количественное определение)

Краткая История

Туберкулез — одно из древнейших инфекционных заболеваний человека, известное со времен Гиппократа (V век до н.э.). Возбудитель туберкулеза — Mycobacterium tuberculosis — был открыт 24 марта 1882 года немецким микробиологом Робертом Кохом (Robert Koch), который окрасил бактерии по разработанному им методу (окраска по Цилю-Нильсену) и доказал их этиологическую роль в развитии заболевания. За это открытие Кох был удостоен Нобелевской премии по физиологии и медицине в 1905 году. В течение почти 100 лет «золотым стандартом» диагностики туберкулеза оставались бактериоскопия (микроскопия мазка) и культуральный метод (посев на питательные среды Левенштейна-Йенсена, Финна-II, Миддлбрука), которые имеют высокую специфичность, но низкую чувствительность (бактериоскопия — 30-60%) и требуют длительного времени (посев — 4-8 недель). В 1980-х годах с развитием полимеразной цепной реакции (ПЦР) (изобретена Кэри Муллисом в 1983 году, Нобелевская премия по химии 1993 года) стало возможным быстрое (4-6 часов) и высокочувствительное выявление ДНК микобактерий туберкулеза непосредственно в клиническом материале (мокрота, моча, ликвор, биоптаты). В 1990-2000-х годах были разработаны коммерческие тест-системы для ПЦР в реальном времени (Real-Time PCR), позволяющие не только обнаруживать ДНК M. tuberculosis complex (M. tuberculosis, M. bovis, M. africanum, M. canettii, M. microti, M. pinnipedii), но и определять устойчивость к рифампицину (мутации в гене rpoB) и изониазиду (мутации в генах katG, inhA), а также проводить генотипирование для эпидемиологического мониторинга. Сегодня ПЦР на микобактерии туберкулеза является методом выбора для экспресс-диагностики туберкулеза (особенно при бактериоскопически негативных формах, внелегочном туберкулезе, туберкулезном менингите, у ВИЧ-инфицированных пациентов).

Материал, используемый для исследования

- Тип образца:Клинический материал в зависимости от предполагаемой локализации туберкулезного процесса.
- Локализация забора материала (в зависимости от клинических проявлений):

Легочный туберкулез (основная локализация, 80-85% случаев):Мокрота (утренняя, 5-10 мл, лучше индуцированная — после ингаляции гипертонического раствора хлорида натрия), бронхоальвеолярный лаваж (БАЛ) — при бронхоскопии, биоптат легкого (при трудной диагностике).
Туберкулезный менингит:Ликвор (спинномозговая жидкость) — 1-2 мл, полученный при люмбальной пункции.
Туберкулез мочеполовой системы:Утренняя порция мочи (средняя струя, 50-100 мл, лучше 3 дня подряд), эякулят (у мужчин), соскоб из уретры, биоптат почки.
Туберкулез периферических лимфатических узлов:Пунктат лимфатического узла (1-2 мл), биоптат лимфоузла.
Туберкулез кожи, костей, суставов, глаз:Биоптат тканей, экссудат, синовиальная жидкость, пунктат абсцесса.
Туберкулез кишечника, брюшины:Биоптат кишечника (при колоноскопии), асцитическая жидкость (5-10 мл).
Миллиарный туберкулез, туберкулезный сепсис:Кровь (5-10 мл, в пробирки с ЭДТА или цитратом, но лучше использовать специальные пробирки для ПЦР крови — с консервантом, предотвращающим деградацию ДНК).
- Тип пробирки/системы сбора:Специальная пробирка с транспортной средой для ПЦР (содержит консервант, предотвращающий деградацию ДНК и рост бактерий). Для мокроты и мочи — стерильные пластиковые контейнеры с широким горлом. Для ликвора — стерильные пробирки (1,5-2 мл). Для крови — вакуумные пробирки с ЭДТА (фиолетовая крышечка) или цитратом (синяя крышечка), но лучше — специальные пробирки для ПЦР (с консервантом).
- Объем материала:Мокрота — 5-10 мл; моча — 50-100 мл (центрифугируется); ликвор — 1-2 мл; кровь — 5-10 мл. Достаточное количество материала критически важно для чувствительности.
- Обработка:После взятия материал должен быть доставлен в лабораторию в течение 1-2 часов (при комнатной температуре) или храниться при +2…+8°C не более 24-48 часов. Замораживание допускается (до нескольких месяцев при -20°C или -70°C), но снижает чувствительность. Перед ПЦР материал обрабатывают (деконтаминация, лизис клеток, выделение ДНК). Крайне важно: Микобактерии туберкулеза очень устойчивы во внешней среде, имеют плотную клеточную стенку, богатую липидами (миколовые кислоты), что затрудняет лизис и выделение ДНК. Требуется специальная пробоподготовка (лизис ферментами — протеиназа К, лизирующий буфер, нагревание до 95-100°C).

Как подготовиться к анализу

Подготовка к анализу на ДНК микобактерий туберкулеза зависит от типа клинического материала:

Мокрота (основной материал):

Собирается утренняя мокрота(натощак, после пробуждения, перед чисткой зубов и приемом пищи).
Перед сбором прополоскать рот кипяченой водой (для удаления остатков пищи и микрофлоры полости рта).
Сделать 2-3 глубоких вдоха и выдоха, затем глубокий вдох и откашлять мокротуиз глубоких отделов бронхов (не слюну!).
Собрать 5-10 мл мокроты в стерильный пластиковый контейнер с широким горлом.
При отсутствии мокроты (сухой кашель) — провести ингаляцию гипертонического раствора хлорида натрия (3-5%)через небулайзер в течение 15-20 минут для индукции мокроты.
За 2-3 днядо сбора мокроты исключить прием антибиотиков (особенно рифампицина, изониазида, стрептомицина, фторхинолонов, аминогликозидов) — после консультации с врачом (нельзя отменять жизненно важные препараты!).
В день сбора мокроты не использовать противокашлевые препараты.

Моча (при подозрении на туберкулез мочеполовой системы):

Собирается утренняя порция мочи(средняя струя, после туалета наружных половых органов) в стерильный пластиковый контейнер (50-100 мл).
За 2-3 дня исключить прием антибиотиков.
Женщинам не рекомендуется сдавать анализ во время менструации.

Ликвор (спинномозговая жидкость) — при подозрении на туберкулезный менингит:

Люмбальную пункцию проводит врач (невролог, нейрохирург, инфекционист) по показаниям. Анализ ликвора на ПЦР является экспресс-методом (результат через 4-6 часов).

Кровь (при подозрении на генерализованный туберкулез, миллиарный туберкулез, туберкулезный сепсис):

Венозную кровь (5-10 мл) собирают в пробирку с ЭДТА (фиолетовая крышечка) или в специальную пробирку для ПЦР. За 2-3 дня исключить прием антибиотиков.

Общие требования:

За 2-4 неделидо исследования (по возможности) исключить прием антибиотиков, особенно противотуберкулезных (рифампицин, изониазид, стрептомицин, этамбутол, пиразинамид, фторхинолоны, аминогликозиды) — они снижают концентрацию возбудителя и могут давать ложноотрицательный результат.
Сообщить врачу о наличии острых инфекционных заболеваний (пневмония, бронхит, ОРВИ) — анализ следует отложить на 2-4 недели после выздоровления.
Исключить употребление алкоголя за 24 часа до исследования.

Описание данного вещества (Mycobacterium tuberculosis complex и метод ПЦР)

Mycobacterium tuberculosis complex (MTC) — это группа генетически близких видов микобактерий, вызывающих туберкулез у человека и животных. В комплекс входят:

Mycobacterium tuberculosis(основной возбудитель туберкулеза у человека, 95-98% случаев).
Mycobacterium bovis(вызывает туберкулез у крупного рогатого скота, может заражать человека через некипяченое молоко).
Mycobacterium africanum(вызывает туберкулез в Западной Африке).
Mycobacterium canettii(редкий вид, вызывает туберкулез у людей с иммунодефицитом).
Mycobacterium microti(вызывает туберкулез у полевок, редко у человека).
Mycobacterium pinnipedii(вызывает туберкулез у тюленей).

Характеристики микобактерий туберкулеза:

Кислотоустойчивость:Бактерии имеют плотную клеточную стенку, богатую липидами (миколовые кислоты, фтиоцерановый димикоцеросат), что придает им устойчивость к кислотам, щелочам, спиртам, детергентам, многим антибиотикам, а также устойчивость во внешней среде (выживают в мокроте до 6-12 месяцев, в пыли до 3-4 месяцев).
Медленный рост:Время генерации 18-24 часа (для сравнения: у E. coli — 20 минут). На плотных питательных средах (Левенштейна-Йенсена) колонии появляются через 4-8 недель.
Облигатный аэроб:Требует кислород для роста, поэтому поражает преимущественно верхние отделы легких (верхушки), а также почки, кости, мозговые оболочки.
Внутриклеточный паразит:Размножается внутри макрофагов, уклоняясь от иммунного ответа (подавляет фаголизосомальное слияние, выживает в фагосомах).

Метод ПЦР (полимеразная цепная реакция):

Качественная ПЦР:Определяет наличие (обнаружено/не обнаружено) ДНК микобактерий туберкулеза в клиническом образце. Чувствительность метода — 10-100 копий ДНК в пробе (или 1-10 бактерий). Позволяет обнаружить M. tuberculosis в мокроте при бактериоскопии (микроскопия мазка) «+» (10-100 бактерий в поле зрения) и даже «-» (единичные бактерии).
Количественная ПЦР (Real-Time PCR):Позволяет не только обнаружить ДНК микобактерий туберкулеза, но и определить их количество (КОЕ/мл или геном-эквивалент/мл). Важно для оценки эффективности лечения (снижение ДНК на фоне противотуберкулезной терапии), а также для дифференциации активного туберкулеза (высокое количество) от латентной инфекции (низкое количество, но ДНК может вообще не определяться в крови/мокроте при латентной форме).
Мультиплексная ПЦР (с детекцией мутаций устойчивости):Позволяет одновременно выявить ДНК M. tuberculosis complex и определить устойчивость к рифампицину (мутации в гене rpoB — 95% случаев устойчивости) и изониазиду (мутации в генах katG, inhA). Это критически важно для назначения правильного режима химиотерапии (для лекарственно-чувствительного туберкулеза — 4 препарата: изониазид, рифампицин, этамбутол, пиразинамид; для МЛУ-ТБ — препараты резерва).
Специфичность:Очень высокая (98-100%) при использовании специфических праймеров к участкам ДНК, уникальным для M. tuberculosis complex (например, к гену IS6110 (вставка 6110) — многокопийный элемент, присутствующий у M. tuberculosis complex, но отсутствующий у нетуберкулезных микобактерий (NTM) — M. avium, M. intracellulare, M. kansasii, M. abscessus, M. chelonae и др.). IS6110 позволяет повысить чувствительность (до 1-10 бактерий) благодаря наличию 10-25 копий на геном.
Чувствительность:Очень высокая (90-98% для легочного туберкулеза с бактериоскопией «+»; 60-80% для бактериоскопии «-»; 40-60% для внелегочного туберкулеза). Чувствительность зависит от типа материала, стадии заболевания, приема антибиотиков.

Диагностика заболеваний

Качественное (и количественное) определение ДНК микобактерий туберкулеза используется для:

Экспресс-диагностики туберкулеза легких (легочный туберкулез):Это основное показание. ПЦР позволяет получить результат через 4-6 часов (посев — 4-8 недель, бактериоскопия — 1-2 дня). Особенно важна при бактериоскопически негативных формах (мазок «-»), когда в мокроте мало бактерий (< 10^4 КОЕ/мл), но клинические и рентгенологические признаки туберкулеза есть. ПЦР рекомендуется проводить в дополнение к бактериоскопии и посеву (не вместо них!).
Диагностики внелегочного туберкулеза (туберкулезный менингит, туберкулез мочеполовой системы, туберкулез лимфатических узлов, костей, суставов, кишечника, брюшины):При внелегочных формах бактериоскопия часто отрицательна (мало бактерий, трудность получения материала). ПЦР имеет чувствительность 40-80% (зависит от материала и стадии). Для туберкулезного менингита ПЦР ликвора — метод выбора (чувствительность 50-80%, специфичность 95-100%).
Диагностики туберкулеза у ВИЧ-инфицированных пациентов:У ВИЧ-инфицированных (особенно с CD4 < 200) часто развиваются внелегочные и диссеминированные формы туберкулеза (миллиарный туберкулез, туберкулезный менингит, туберкулез лимфоузлов), бактериоскопия мокроты часто отрицательна (из-за низкой бактериальной нагрузки). ПЦР (кровь, ликвор, пунктаты) значительно повышает выявляемость.
Диагностики туберкулеза у детей:У детей (особенно раннего возраста) часто трудно получить мокроту (заменяют промывными водами желудка), бактериоскопия малоинформативна (низкая бактериальная нагрузка). ПЦР (промывные воды желудка, индуцированная мокрота, биоптаты) повышает выявляемость.
Определения лекарственной устойчивости (МЛУ-ТБ, ШЛУ-ТБ):Мультиплексная ПЦР (например, GeneXpert MTB/RIF, Hain GenoType MTBDRplus) позволяет выявить устойчивость к рифампицину (RIF) и изониазиду (INH) за 2-4 часа. Это критически важно для назначения правильной терапии (при МЛУ-ТБ требуется 5-6 препаратов резерва, длительность лечения 18-24 месяца).
Мониторинга эффективности противотуберкулезной терапии (количественная ПЦР):Определение количества ДНК M. tuberculosis в мокроте в динамике (до лечения, через 2 недели, 1, 2, 4, 6 месяцев). Снижение ДНК в 2-4 log (в 100-10000 раз) через 2-4 недели — благоприятный прогноз. Сохранение высокого уровня ДНК через 2-3 месяца — неэффективность лечения (устойчивость). Однако ПЦР не дифференцирует живые бактерии от мертвых (ДНК может сохраняться 2-4 недели после гибели бактерий), поэтому для контроля излеченности «золотым стандартом» остается посев (отрицательный через 2-6 месяцев).
Дифференциальной диагностики туберкулеза и нетуберкулезных микобактериозов (NTM):Нетуберкулезные микобактерии (M. avium, M. intracellulare, M. kansasii, M. abscessus, M. chelonae) вызывают заболевания, сходные с туберкулезом, у иммунокомпрометированных пациентов (ВИЧ, муковисцидоз, ХОБЛ). ПЦР со специфическими праймерами к IS6110 (присутствует только у M. tuberculosis complex) позволяет их дифференцировать.

Цель исследования

Основные цели качественного (и количественного) определения ДНК микобактерий туберкулеза:

Экспресс-диагностика туберкулеза легких (особенно бактериоскопически негативных форм, ВИЧ-ассоциированного туберкулеза, туберкулеза у детей).
Диагностика внелегочного туберкулеза(менингит, мочеполовой туберкулез, туберкулез лимфатических узлов, костей, кишечника, брюшины).
Выявление лекарственной устойчивости (МЛУ-ТБ, ШЛУ-ТБ)к рифампицину и изониазиду (GeneXpert MTB/RIF, Hain GenoType MTBDRplus) для назначения правильной терапии.
Мониторинг эффективности противотуберкулезной терапии(количественная ПЦР в динамике).
Дифференциальная диагностика туберкулеза и нетуберкулезных микобактериозов (NTM).
Эпидемиологический мониторинг (генотипирование, молекулярное типирование)— для выявления вспышек туберкулеза, отслеживания путей передачи, дифференциации рецидива от реинфекции.
Скрининг контактных лиц (в очагах туберкулезной инфекции)— ПЦР мокроты у бессимптомных контактных лиц может выявить ранние формы туберкулеза (до развития симптомов).

Что значат полученные результаты

Интерпретация результатов определения ДНК микобактерий туберкулеза всегда проводится врачом-фтизиатром, пульмонологом, инфекционистом в контексте клинической картины (кашель > 2-3 недель, лихорадка, ночная потливость, потеря веса, кровохарканье), данных рентгенографии/КТ органов грудной клетки (инфильтрат, каверна, диссеминация), туберкулиновых проб (проба Манту, Диаскинтест), а также с учетом результатов бактериоскопии и посева. Референсное значение – «не обнаружено» (для качественной ПЦР) .

Референсные значения (качественная ПЦР):

Отрицательный результат («не обнаружено»):ДНК микобактерий туберкулеза в исследуемом образце не обнаружена (или концентрация ниже предела чувствительности метода, обычно < 10-100 копий ДНК). Туберкулез маловероятен (но не исключен при низкой бактериальной нагрузке, ранней стадии, внелегочных формах, приеме антибиотиков). Чувствительность ПЦР не 100% (90-98% для легочного туберкулеза с бактериоскопией «+», 60-80% для бактериоскопии «-», 40-60% для внелегочного). При отрицательном результате, но высоком клиническом подозрении на туберкулез, рекомендуется повторить исследование через 2-4 недели (или исследовать другой материал).
Положительный результат («обнаружено»):ДНК микобактерий туберкулеза обнаружена в исследуемом образце. Указывает на наличие M. tuberculosis complex в организме. С высокой вероятностью соответствует активному туберкулезу (особенно при наличии клинических и рентгенологических симптомов). Однако возможны ложноположительные результаты (контаминация лабораторной посуды, реагентов) и выявление ДНК у пациентов с латентной туберкулезной инфекцией (ЛТИ) без активного заболевания (редко, при очень высокой чувствительности ПЦР).

Количественная ПЦР (Real-Time PCR, количество ДНК в КОЕ/мл или геном-эквивалент/мл):

< 10^2 – 10^3 КОЕ/мл (низкая бактериальная нагрузка):Сомнительный результат. Может соответствовать ранней стадии туберкулеза, латентной инфекции (редко), низкой эффективности отхаркивания (мало бактерий в мокроте), приему антибиотиков. Требует повторного исследования (мокрота, БАЛ, биоптат) через 2-4 недели.
10^3 – 10^5 КОЕ/мл (умеренная бактериальная нагрузка):Характерна для активного туберкулеза с бактериоскопией «+» (1-10 бактерий в поле зрения). Требует лечения.
> 10^5 КОЕ/мл (высокая бактериальная нагрузка):Характерна для активного деструктивного туберкулеза (каверны, массивное бактериовыделение), бактериоскопия «++» или «+++». Высокая эпидемиологическая опасность (заразность для окружающих). Требует госпитализации и интенсивной терапии.
Динамика (снижение на 2-4 log через 2-4 недели лечения):Благоприятный прогноз, эффективность терапии.
Отсутствие снижения или рост через 2-3 месяца:Неэффективность лечения, подозрение на лекарственную устойчивость (МЛУ-ТБ, ШЛУ-ТБ). Требуется определение лекарственной чувствительности.

Интерпретация в зависимости от клинической ситуации:

Положительный ПЦР + клинические симптомы (кашель > 2-3 недель, лихорадка, ночная потливость, потеря веса, кровохарканье) + рентгенологические изменения (инфильтрат, каверна, диссеминация):

Интерпретация:Активный туберкулез легких (или другой локализации). Требует госпитализации (при бактериовыделении), назначения противотуберкулезной терапии (I режим: изониазид, рифампицин, этамбутол, пиразинамид), изоляции (при легочной форме), эпидемиологического расследования (выявление контактных лиц).

Положительный ПЦР + отсутствие симптомов (случайная находка при скрининге контактных лиц, флюорография без патологии):

Интерпретация:Возможна латентная туберкулезная инфекция (ЛТИ) (редко ДНК в мокроте/крови), или ранняя стадия (до развития симптомов), или ложноположительный результат. Требует тщательного обследования (Диаскинтест, проба Манту, КТ органов грудной клетки, повторная ПЦР через 1-3 месяца). При ЛТИ лечение не всегда требуется (только у лиц с высоким риском реактивации: ВИЧ, контактные, дети, пациенты с иммуносупрессией).

Положительный ПЦР + ВИЧ-инфекция (особенно CD4 < 200):

Интерпретация:Туберкулез (часто внелегочный, диссеминированный, с низкой бактериальной нагрузкой) . Требует немедленного начала противотуберкулезной терапии (I режим) и антиретровирусной терапии (АРТ) через 2-8 недель после начала лечения туберкулеза.

Положительный ПЦР + бактериоскопия «-» (микроскопия мазка отрицательная):

Интерпретация:Бактериоскопически негативный туберкулез (мало бактерий, < 10^4 КОЕ/мл). ПЦР позволяет подтвердить диагноз. Требует лечения (I режим).

Отрицательный ПЦР + бактериоскопия «+» (микроскопия положительная):

Интерпретация:Возможно, ПЦР ложноотрицательна (ингибиторы в образце, неправильное хранение, прием антибиотиков). Рекомендуется повторить ПЦР, провести посев. Лечение назначается на основании клинико-рентгенологических данных и бактериоскопии.

Отрицательный ПЦР + высокое клиническое подозрение на туберкулез (рентгенологические изменения, контакт с больным туберкулезом, положительные пробы Манту/Диаскинтест):

Интерпретация:Туберкулез не исключен (чувствительность ПЦР 60-90%). Рекомендуется:
- Повторить ПЦР через 2-4 недели.
- Исследовать другой материал (БАЛ, биоптат, ликвор, мочу).
- Провести посев (4-8 недель).
- Назначить пробное лечение (по решению фтизиатрической комиссии).

Важные нюансы интерпретации:

Ложноположительный результат:Возможен при контаминации образца (несоблюдение правил асептики, загрязнение лабораторной посуды и реагентов ампликонами), при низком пороге детекции (обнаружение единичных копий ДНК, не имеющих клинического значения). Частота ложноположительных результатов в хорошо организованных лабораториях составляет менее 1-2%.
Ложноотрицательный результат:Возможен при неправильном взятии материала (мало мокроты, слюна вместо мокроты), при длительном хранении (деградация ДНК), при наличии ингибиторов ПЦР в образце (кровь, слизь, лекарства), при очень низкой бактериальной нагрузке (< 10-100 бактерий в пробе), при приеме противотуберкулезных антибиотиков до анализа, при внелегочных формах (низкое содержание бактерий в исследуемом материале). Частота ложноотрицательных результатов: 10-40% (зависит от типа материала и стадии заболевания).
ПЦР не дифференцирует живые бактерии от мертвых:ДНК может сохраняться 2-4 недели после гибели бактерий (после начала лечения). Поэтому положительная ПЦР через 1-2 месяца лечения не обязательно означает неэффективность (может быть ДНК мертвых бактерий). Для контроля излеченности «золотой стандарт» – посев (отрицательный через 2-6 месяцев). Количественная ПЦР (снижение ДНК) более информативна, чем качественная.
GeneXpert MTB/RIF (Xpert MTB/RIF) – автоматизированная ПЦР в реальном времени:Позволяет одновременно выявить ДНК M. tuberculosis complex и мутации устойчивости к рифампицину (rpoB). Чувствительность: 95-98% для бактериоскопии «+», 60-80% для бактериоскопии «-». Результат через 2-4 часа. Рекомендован ВОЗ для первичной диагностики туберкулеза (особенно у ВИЧ-инфицированных, детей, при внелегочных формах).
Дифференциация M. tuberculosis complex и нетуберкулезных микобактерий (NTM):Если ПЦР с праймерами к IS6110 отрицательная, а клинические и рентгенологические признаки «туберкулеза» есть – следует подозревать NTM (M. avium, M. intracellulare, M. kansasii, M. abscessus, M. chelonae). Требуется ПЦР с другими праймерами (специфичными к NTM) или посев на среду Левенштейна-Йенсена с последующей идентификацией.

Факторы, влияющие на результат

На результат определения ДНК микобактерий туберкулеза могут влиять различные преаналитические, аналитические и биологические факторы:

Преаналитические (до взятия материала):

Прием противотуберкулезных антибиотиков(рифампицин, изониазид, стрептомицин, этамбутол, пиразинамид, фторхинолоны, аминогликозиды) за 2-4 недели до анализа – приводит к ложноотрицательным результатам (снижение бактериальной нагрузки, разрушение ДНК). Это самый частый фактор ложноотрицательных результатов.
Неправильный сбор материала:Сбор слюны вместо мокроты (ложноотрицательный), недостаточный объем мочи (менее 50 мл), длительное хранение при комнатной температуре (деградация ДНК).
Недостаточное количество материала:Мокроты менее 5 мл, ликвора менее 1 мл.
Несоблюдение правил асептикипри взятии материала – контаминация образца микобактериями из внешней среды (ложноположительный результат).

Аналитические (на этапе лабораторного исследования):

Контаминация реагентов и лабораторной посудыампликонами (продуктами ПЦР) – ложноположительный результат. Современные лаборатории используют системы с УФ-деконтаминацией и раздельные зоны для выделения ДНК и амплификации.
Ингибиторы ПЦРв образце (кровь, слизь, гемоглобин, мочевая кислота, препараты для местного лечения) – ложноотрицательный результат. Требуется специальная пробоподготовка (очистка ДНК).
Нарушение температурного режима хранения транспортной среды(замораживание, перегрев) – деградация ДНК (ложноотрицательный результат).
Чувствительность тест-системы:Разные коммерческие наборы имеют разную чувствительность (10-100 копий ДНК). Высокочувствительные тесты (например, на основе IS6110, многокопийного элемента) более чувствительны, но могут выявлять очень низкие концентрации ДНК, не имеющие клинического значения (контаминация).
Недостаточный лизис клеток:Микобактерии туберкулеза имеют плотную клеточную стенку, богатую липидами (миколовые кислоты), что затрудняет лизис и выделение ДНК. Требуется специальная пробоподготовка (протеиназа К, детергенты, нагревание).

Биологические факторы:

Латентная туберкулезная инфекция (ЛТИ):ДНК M. tuberculosis может обнаруживаться в крови/мокроте у пациентов с ЛТИ (при очень высокой чувствительности ПЦР), но они не заразны и не имеют симптомов. Дифференциальная диагностика с активным туберкулезом проводится на основании клинико-рентгенологических данных, Диаскинтеста, посева.
ВИЧ-инфекция (с CD4 < 200):У таких пациентов часто низкая бактериальная нагрузка, что снижает чувствительность ПЦР (ложноотрицательные результаты). Рекомендуется использовать GeneXpert MTB/RIF (более чувствительный).
Внелегочный туберкулез:Низкая концентрация микобактерий в материале (ликвор, моча, пунктаты, биоптаты) снижает чувствительность ПЦР (40-60%).
Туберкулез у детей:Часто низкая бактериальная нагрузка, трудность получения мокроты (замена на промывные воды желудка). Чувствительность ПЦР ниже, чем у взрослых.

Лаборатория Бойченко гарантирует точность и достоверность результатов благодаря современному оборудованию и высоким стандартам качества.

Список литературы:

Клинические рекомендации Министерства здравоохранения РФ «Туберкулез у взрослых». 2022.
Клинические рекомендации Министерства здравоохранения РФ «Туберкулез у детей». 2021.
Клинические рекомендации Министерства здравоохранения РФ «Внелегочный туберкулез». 2020.
World Health Organization (WHO). WHO consolidated guidelines on tuberculosis. Module 3: Diagnosis – Rapid diagnostics for tuberculosis detection. 2021.
Lawn S.D., Nicol M.P. Xpert MTB/RIF assay: development, evaluation and implementation of a new rapid molecular diagnostic for tuberculosis and rifampicin resistance. Future Microbiology. 2011;6(9):1067-1082.