450 ₽

Код анализа: 118

Заказать

ПЦР Цитомегаловирус

ДНК цитомегаловируса (ЦМВ, CMV) методом ПЦР (качественное и количественное определение)

Краткая История

Цитомегаловирус (ЦМВ, Human herpesvirus type 5) был открыт в 1956 году независимо Маргарет Смит (США) и Уильямом Роу (США) при исследовании тканей детей с цитомегалией («гигантоклеточной» инклюзией). Долгое время диагностика ЦМВ-инфекции основывалась на вирусологических (выделение вируса в культуре клеток – 2-6 недель) и серологических методах (определение IgM и IgG). Однако эти методы не позволяли выявить активную репликацию вируса (особенно у иммунокомпрометированных пациентов) и оценить эффективность противовирусной терапии. В 1990-х годах, с развитием полимеразной цепной реакции (ПЦР), стало возможным быстрое (4-6 часов) и высокочувствительное выявление ДНК ЦМВ в различных биологических жидкостях (кровь, моча, ликвор, слюна, амниотическая жидкость, бронхоальвеолярный лаваж, биоптаты). В 2000-2010-х годах были разработаны коммерческие тест-системы для количественной ПЦР в реальном времени (Real-Time PCR), позволяющие не только обнаруживать ДНК ЦМВ, но и определять вирусную нагрузку (количество копий ДНК/мл). Это стало критически важным для мониторинга ЦМВ-инфекции у иммунокомпрометированных пациентов (реципиенты трансплантатов, ВИЧ-инфицированные, онкогематологические больные), для прогнозирования риска развития ЦМВ-болезни, для оценки эффективности противовирусной терапии (ганцикловир, валганцикловир, фоскарнет, цидофовир, летермовир), а также для диагностики врожденной ЦМВ-инфекции у новорожденных. Сегодня количественная ПЦР является «золотым стандартом» диагностики активной ЦМВ-инфекции и мониторинга ЦМВ-реактивации.

Материал, используемый для исследования

Тип образца:В зависимости от клинических проявлений и цели исследования:

Кровь (плазма, цельная кровь, лейкоцитарная масса):Основной материал для диагностики активной ЦМВ-инфекции (виремии) и мониторинга ЦМВ-реактивации у иммунокомпрометированных пациентов. Плазма – предпочтительнее для количественной ПЦР (отражает свободный вирус). Цельная кровь или лейкоцитарная масса – более чувствительны (вирус находится внутри лейкоцитов), но дают более высокие значения.
Моча:Для диагностики ЦМВ-инфекции у новорожденных (врожденная ЦМВ-инфекция), у детей, у взрослых при поражении почек. ЦМВ выделяется с мочой длительно (месяцы, годы), поэтому положительная ПЦР мочи не всегда означает активную инфекцию (может быть латентная с периодическим выделением вируса).
Слюна:Скрининг новорожденных на врожденную ЦМВ-инфекцию (высокая чувствительность, неинвазивно). Положительный результат требует подтверждения ПЦР крови или мочи (так как в слюне вирус может быть транзиторным).
Ликвор (спинномозговая жидкость):При подозрении на ЦМВ-энцефалит, менингит, миелит (у ВИЧ-инфицированных, реципиентов трансплантатов, новорожденных).
Амниотическая жидкость:Для пренатальной диагностики врожденной ЦМВ-инфекции (при первичной ЦМВ-инфекции у беременной). Забор – после 21-22 недель беременности и через 6-8 недель после предполагаемой даты инфицирования матери.
Бронхоальвеолярный лаваж (БАЛ), биоптат легкого:При подозрении на ЦМВ-пневмонию.
Биоптат печени, кишечника, пищевода, сетчатки, почек, тканей ЦНС:При подозрении на ЦМВ-поражение соответствующих органов (у иммунокомпрометированных).
Стекловидное тело (влага глаза):При ЦМВ-ретините (у ВИЧ-инфицированных).
Грудное молоко:У матерей с активной ЦМВ-инфекцией (для оценки риска передачи новорожденному через молоко).

Тип пробирки/системы сбора:

Для крови:Вакуумная пробирка с ЭДТА (фиолетовая крышечка) или с цитратом (синяя крышечка). Важно: Не использовать пробирки с гепарином (зеленая крышечка), так как гепарин ингибирует ПЦР. Плазму отделяют центрифугированием в течение 2-4 часов после взятия.
Для мочи, слюны, ликвора, амниотической жидкости, БАЛ, биоптатов:Стерильные пластиковые контейнеры или пробирки. Для длительного хранения (более 24 часов) – замораживание при -20°C или -70°C.
Для соскобов (урогенитальный тракт, конъюнктива):Специальная пробирка с транспортной средой для ПЦР (содержит консервант, предотвращающий деградацию ДНК).
- Объем материала:Кровь – 3-5 мл (цельная) или 1-2 мл плазмы. Моча – 5-10 мл. Ликвор – 1-2 мл. Слюна – 1-2 мл. Амниотическая жидкость – 2-5 мл.
- Обработка:Доставка в лабораторию осуществляется в день взятия (или в течение 12 часов при хранении при +2…+8°C). Замораживание допускается (при -20°C – до 1 месяца, при -70°C – до 1 года), но снижает выход ДНК. Стабильность ДНК в транспортной среде при комнатной температуре – до 21 дня (в зависимости от системы сбора).

Как подготовиться к анализу

Подготовка к анализу на ДНК ЦМВ зависит от типа клинического материала:

Кровь (для ПЦР):

Голодание: не требуется. Кровь можно сдавать как натощак, так и после еды.
Лекарства: Сообщить врачу о приеме противовирусных препаратов (ганцикловир, валганцикловир, фоскарнет, цидофовир, летермовир) – они снижают вирусную нагрузку и могут давать ложноотрицательный результат. Для мониторинга эффективности лечения анализ сдают до приема препарата (для определения минимального уровня).
За 2-4 недели до анализа (по возможности) исключить прием иммуносупрессоров (циклоспорин, такролимус, метотрексат, азатиоприн, микофенолата мофетил, ритуксимаб) – они могут вызывать реактивацию ЦМВ.
За 2-4 недели до анализа исключить прием антибиотиков (не влияют на вирус, но могут влиять на ПЦР-амплификацию? – нет, но важно для интерпретации).

Моча, слюна:

Собирают утреннюю порцию (моча – средняя струя, слюна – после пробуждения, до чистки зубов, еды, питья).
За 2-3 дня до сбора исключить прием уросептиков, антибактериальных препаратов (моча).
Женщинам – не сдавать мочу во время менструации.

Амниотическая жидкость (беременные):

Процедуру амниоцентеза проводит врач (акушер-гинеколог) по строгим показаниям (подозрение на врожденную ЦМВ-инфекцию). Анализ проводят не ранее 21-22 недель беременности и не ранее 6-8 недель после предполагаемой даты инфицирования матери (чтобы вирус успел попасть в амниотическую жидкость).
Подготовка: по назначению врача.

Общие требования:

За 2-4 недели до исследования (по возможности) исключить прием противовирусных препаратов (если цель – диагностика, а не мониторинг лечения).
Сообщить врачу о наличии острых инфекционных заболеваний (лихорадка, ОРВИ, ангина) – они могут вызывать реактивацию ЦМВ (искажение результата).

Описание данного вещества (цитомегаловирус и метод ПЦР)

Цитомегаловирус (ЦМВ, Human herpesvirus type 5, HHV-5) – это ДНК-содержащий вирус из семейства Herpesviridae, подсемейства Betaherpesvirinae. Характеризуется медленной репликацией, выраженным цитомегалическим эффектом (увеличение инфицированных клеток, появление внутриядерных включений – «совиный глаз»), способностью к латентной персистенции в организме пожизненно (в моноцитах, макрофагах, эндотелиальных клетках, клетках костного мозга, эпителии слюнных желез, почек) и реактивации при иммуносупрессии.

Эпидемиология:

Серопревалентность (наличие IgG) в популяции: 40-80% (в развивающихся странах до 90-100%, в развитых – 50-70%). Первичное инфицирование обычно происходит в детстве (чаще бессимптомно) или подростковом/взрослом возрасте (чаще при половых контактах, через слюну, мочу, грудное молоко).
Пути передачи: воздушно-капельный (слюна), половой (сперма, цервикальная слизь), контактный (моча, фекалии), трансплацентарный (от матери к плоду), при грудном вскармливании (через молоко), при переливании крови и трансплантации органов (от донора).

Клинические проявления:

Иммунокомпетентные взрослые и дети (первичная инфекция):

Бессимптомно (90-95%).
Мононуклеозоподобный синдром (5-10%): лихорадка, фарингит, лимфаденопатия (особенно шейная), гепатоспленомегалия, повышение АЛТ/АСТ, атипичные мононуклеары в крови (отличие от ВЭБ-инфекции – отрицательные антитела к ВЭБ). Может быть тяжелым у беременных (риск вертикальной передачи).

Иммунокомпрометированные пациенты (реактивация латентной инфекции или первичная инфекция):

ВИЧ-инфекция (CD4 < 50-100):ЦМВ-ретинит (поражение сетчатки – «творожистый» ретинит, геморрагии, отслойка сетчатки, слепота), ЦМВ-колит (диарея, боли в животе, лихорадка, кровь в стуле), ЦМВ-эзофагит (дисфагия, одинофагия), ЦМВ-пневмония (одышка, гипоксия), ЦМВ-энцефалит (спутанность сознания, атаксия, слабоумие), ЦМВ-полирадикулопатия (слабость в ногах, недержание мочи), ЦМВ-адреналит (недостаточность надпочечников).
Реципиенты трансплантатов (почки, печени, сердца, легких, костного мозга):ЦМВ-пневмония, ЦМВ-гепатит, ЦМВ-колит, ЦМВ-ретинит, ЦМВ-энцефалит, ЦМВ-панкреатит. ЦМВ-инфекция у реципиентов трансплантатов ассоциирована с повышенным риском отторжения трансплантата.
Онкогематологические заболевания (лейкозы, лимфомы), после химиотерапии, лучевой терапии:ЦМВ-реактивация, пневмония, гепатит, колит, энцефалит.

Беременные (первичная ЦМВ-инфекция):

Вертикальная передача плоду (трансплацентарно):Риск передачи – 30-40% при первичной инфекции в I триместре, 40-70% во II-III триместрах. Риск при реактивации – менее 1-2%.
Врожденная ЦМВ-инфекция у новорожденных (10-15% инфицированных имеют симптомы):Микроцефалия, гидроцефалия, внутричерепные кальцификаты, хориоретинит, сенсоневральная тугоухость (глухота), гепатоспленомегалия, тромбоцитопения (петехиальная сыпь), задержка внутриутробного развития, желтуха, пневмония, энцефалит, судороги, летальность 10-20%. У 85-90% инфицированных новорожденных симптомы отсутствуют, но у 10-15% из них впоследствии развиваются отдаленные последствия (тугоухость, задержка психомоторного развития, хориоретинит).

Новорожденные и дети (перинатальная инфекция – при прохождении через инфицированные родовые пути, через грудное молоко):

Чаще бессимптомно или легкое течение. У недоношенных – пневмония, гепатит, тромбоцитопения.

Метод ПЦР (полимеразная цепная реакция):

Качественная ПЦР:Определяет наличие (обнаружено/не обнаружено) ДНК ЦМВ в образце. Не позволяет оценить вирусную нагрузку. Чувствительность метода – 10-100 копий ДНК в пробе. Специфичность – 98-100%. Используется для скрининга (например, у новорожденных, у доноров крови, у беременных с подозрением на первичную инфекцию).
Количественная ПЦР (Real-Time PCR):Позволяет не только обнаружить ДНК ЦМВ, но и определить вирусную нагрузку (количество копий ДНК/мл или МЕ/мл – международные единицы, калиброванные по стандарту ВОЗ). Это критически важно для:

Мониторинга ЦМВ-реактивации у иммунокомпрометированных пациентов (ВИЧ, трансплантация, онкогематология).
Прогнозирования риска развития ЦМВ-болезни (чем выше вирусная нагрузка, тем выше риск).
Оценки эффективности противовирусной терапии (снижение вирусной нагрузки в 1-2 log (10-100 раз) через 2-4 недели – благоприятный признак).
Дифференциации активной инфекции (высокая нагрузка) от латентной (низкая нагрузка, или ДНК только в лейкоцитах, но не в плазме).
- Мультиплексная ПЦР (сочетанное выявление нескольких возбудителей):Одновременное выявление ЦМВ, вируса Эпштейна-Барр (ВЭБ), герпесвируса 6 типа (HHV-6), герпесвируса 8 типа (HHV-8), аденовируса, парвовируса В19 (у иммунокомпрометированных).
- Специфичность:Высокая (98-100%). Праймеры к консервативным участкам генома ЦМВ (например, к генам UL123 (IE1), UL83 (pp65), UL54 (ДНК-полимераза), UL55 (гликопротеин B), UL122 (IE2)) обеспечивают высокую специфичность.
- Чувствительность:Очень высокая (90-100% для крови/плазмы при активной инфекции; 95-100% для мочи, слюны у новорожденных; 70-90% для амниотической жидкости). Чувствительность зависит от типа материала, стадии заболевания, приема противовирусных препаратов.

Диагностика заболеваний

Качественное (и количественное) определение ДНК цитомегаловируса используется для:

Диагностики активной ЦМВ-инфекции (виремии) у иммунокомпрометированных пациентов (ВИЧ-инфекция, реципиенты трансплантатов, онкогематологические заболевания):Это основное показание. Регулярный (еженедельный или ежемесячный) скрининг ЦМВ-ДНК в крови (количественная ПЦР) позволяет выявить реактивацию ЦМВ на доклинической стадии (до развития симптомов) и начать превентивную (профилактическую) противовирусную терапию (ганцикловир, валганцикловир, летермовир). Порог для начала превентивной терапии зависит от типа трансплантации и лаборатории (обычно > 1000-5000 копий/мл или > 1000-2000 МЕ/мл).
Мониторинга эффективности противовирусной терапии ЦМВ-инфекции:Количественная ПЦР крови (плазма) каждые 1-2 недели. Цель – снижение вирусной нагрузки в 1-2 log (10-100 раз) через 2-4 недели. Если вирусная нагрузка не снижается или растет – подозрение на устойчивость к препарату (требуется генотипирование – выявление мутаций в генах UL97 (устойчивость к ганцикловиру) и UL54 (устойчивость к ганцикловиру, цидофовиру, фоскарнету).
Диагностики врожденной ЦМВ-инфекции у новорожденных:ПЦР мочи или слюны (качественная или количественная) в первые 2-3 недели жизни (предпочтительно в первые 7-10 дней). Положительный результат подтверждает врожденную ЦМВ-инфекцию (вирус выделяется с мочой и слюной длительно). Отрицательный результат (в первые 2-3 недели) с высокой вероятностью исключает врожденную инфекцию. Важно: ПЦР крови у новорожденных менее чувствительна (40-60%), чем ПЦР мочи/слюны.
Пренатальной диагностики врожденной ЦМВ-инфекции (амниоцентез):ПЦР амниотической жидкости (количественная) – «золотой стандарт». Проводится не ранее 21-22 недель беременности и не ранее 6-8 недель после предполагаемой даты инфицирования матери. Высокая вирусная нагрузка (> 10^5-10^6 копий/мл) ассоциирована с высоким риском симптомной врожденной инфекции у плода.
Диагностики ЦМВ-энцефалита, менингита, миелита:ПЦР ликвора (качественная или количественная). Положительный результат (особенно в сочетании с ПЦР крови) подтверждает диагноз. Высокая вирусная нагрузка в ликворе (> 10^3-10^4 копий/мл) ассоциирована с плохим прогнозом.
Диагностики ЦМВ-пневмонии:ПЦР бронхоальвеолярного лаважа (БАЛ) или биоптата легкого. Сочетание с ПЦР крови (виремия) повышает специфичность.
Диагностики ЦМВ-колита, эзофагита, гастрита, гепатита:ПЦР биоптатов кишечника, пищевода, желудка, печени (гистологическое исследование + ПЦР). ПЦР крови часто положительна.
Диагностики ЦМВ-ретинита:Диагноз ставится на основании офтальмоскопии (характерные изменения сетчатки). ПЦР стекловидного тела (влага глаза) подтверждает диагноз (но инвазивно, редко). ПЦР крови часто положительна.
Скрининга доноров крови, органов, тканей:Качественная ПЦР крови (или ПЦР лейкоцитов) для исключения активной ЦМВ-инфекции у донора (особенно для реципиентов-иммунокомпрометированных). Положительный результат – противопоказание к донации.
Обследования беременных с подозрением на первичную ЦМВ-инфекцию:ПЦР крови, мочи, слюны (качественная или количественная) в комплексе с серологией (IgM, IgG, авидность IgG). Положительная ПЦР крови при первичной инфекции (особенно в I триместре) – высокий риск вертикальной передачи. Отрицательная ПЦР не исключает первичную инфекцию (виремия может быть кратковременной).

Цель исследования

Основные цели качественного (и количественного) определения ДНК цитомегаловируса:

Диагностика активной ЦМВ-инфекции (виремии) у иммунокомпрометированных пациентов (ВИЧ, трансплантация, онкогематология).
Мониторинг ЦМВ-реактивации и превентивная терапияу реципиентов трансплантатов (регулярная количественная ПЦР крови).
Мониторинг эффективности противовирусной терапии(количественная ПЦР крови в динамике).
Диагностика врожденной ЦМВ-инфекции(ПЦР мочи/слюны новорожденного в первые 2-3 недели жизни).
Пренатальная диагностика врожденной ЦМВ-инфекции(ПЦР амниотической жидкости).
Диагностика ЦМВ-энцефалита, менингита, миелита(ПЦР ликвора).
Диагностика ЦМВ-пневмонии, колита, эзофагита, гепатита, ретинита(ПЦР соответствующих биоптатов/жидкостей).
Скрининг доноров крови, органов, тканей.
Обследование беременных с подозрением на первичную ЦМВ-инфекцию(в комплексе с серологией).

Что значат полученные результаты

Интерпретация результатов определения ДНК ЦМВ всегда проводится врачом-инфекционистом, гематологом, трансфузиологом, неонатологом, акушером-гинекологом в контексте клинической картины, иммунного статуса пациента (CD4, тип трансплантации, фаза после трансплантации, наличие иммуносупрессии), а также с учетом динамики вирусной нагрузки (при количественной ПЦР). Референсное значение – «не обнаружено» (для качественной ПЦР) или менее 100-200 копий/мл (нижний предел количественного определения).

Референсные значения (качественная ПЦР):

Отрицательный результат («не обнаружено»):ДНК ЦМВ в исследуемом образце не обнаружена (или концентрация ниже предела чувствительности, < 10-100 копий/мл). Активная ЦМВ-инфекция маловероятна. Однако у иммунокомпрометированных пациентов возможна ложноотрицательная ПЦР (вирус находится только в тканях, не в крови, или вирусная нагрузка ниже предела чувствительности). Рекомендуется повторное исследование через 1-2 недели.
Положительный результат («обнаружено»):ДНК ЦМВ обнаружена. Указывает на наличие ЦМВ в организме. Клиническое значение зависит от:

Клинического контекста (иммунокомпетентный vs иммунокомпрометированный).
Количества ДНК (вирусной нагрузки).
Типа материала (кровь/плазма vs моча/слюна).
Динамики (нарастание или снижение).

Количественная ПЦР (Real-Time PCR, вирусная нагрузка в копиях/мл или МЕ/мл – международные единицы):

Важно: Разные тест-системы имеют разные пороговые значения. Приводимые цифры – ориентировочные. Всегда используйте референсы вашей лаборатории!

< 100-500 копий/мл (или МЕ/мл) – низкая вирусная нагрузка:У иммунокомпетентных – может быть транзиторная виремия (при первичной инфекции), обычно бессимптомно. Лечение не требуется. У иммунокомпрометированных – ранняя стадия реактивации, или низкий уровень персистенции. Требует динамического контроля (повтор через 1-2 недели). У новорожденных (моча/слюна) – врожденная инфекция, но низкая нагрузка.
500 – 5000 копий/мл – умеренная вирусная нагрузка:У иммунокомпрометированных – активная реактивация. Риск развития ЦМВ-болезни (пневмония, колит, ретинит, энцефалит) умеренный. Показана превентивная терапия (ганцикловир, валганцикловир) для реципиентов трансплантатов (особенно при нарастании нагрузки). У иммунокомпетентных – первичная инфекция (часто бессимптомно или мононуклеозоподобный синдром).
> 5000-10000 копий/мл – высокая вирусная нагрузка:У иммунокомпрометированных – высокий риск ЦМВ-болезни. Показана противовирусная терапия. У ВИЧ-инфицированных с CD4 < 50 – высокий риск ретинита, колита, энцефалита. У новорожденных (кровь) – высокая нагрузка ассоциирована с симптомной врожденной инфекцией.
> 100000 копий/мл – очень высокая вирусная нагрузка:У иммунокомпрометированных – ЦМВ-болезнь с высокой вероятностью. Требует немедленной противовирусной терапии (внутривенный ганцикловир, фоскарнет, летермовир). У ВИЧ-инфицированных с CD4 < 50 – почти всегда ЦМВ-ретинит, колит, энцефалит.

Динамика (нарастание или снижение):

Нарастание вирусной нагрузки (в 2-4 раза и более за 1-2 недели):Неблагоприятный прогноз, активная репликация вируса, высокий риск ЦМВ-болезни. Требует усиления терапии (или начала терапии).
Снижение вирусной нагрузки (в 1-2 log, т.е. 10-100 раз за 2-4 недели):Благоприятный прогноз, ответ на противовирусную терапию.
Отсутствие снижения или рост на фоне терапии:Подозрение на устойчивость к препарату (требуется генотипирование – мутации UL97 и UL54).

Интерпретация в зависимости от клинической ситуации:

Иммунокомпрометированный пациент (реципиент трансплантата, ВИЧ с CD4 < 100, онкогематология) + положительная ПЦР крови (любая нагрузка):

Интерпретация:ЦМВ-реактивация. Требует мониторинга (количественная ПЦР каждые 1-2 недели). При нарастании нагрузки или появлении симптомов – противовирусная терапия. При нагрузке > 1000-5000 копий/мл – превентивная терапия (по протоколам).

ВИЧ-инфицированный с CD4 < 50 + положительная ПЦР крови (> 1000 копий/мл) + симптомы (снижение зрения, диарея, одышка, лихорадка):

Интерпретация:ЦМВ-ретинит, колит, пневмония, энцефалит. Требует немедленной противовирусной терапии (ганцикловир, фоскарнет, летермовир) + антиретровирусная терапия (АРТ).

Новорожденный (возраст до 2-3 недель) + положительная ПЦР мочи или слюны:

Интерпретация:Врожденная ЦМВ-инфекция. Требует клинического обследования (невролог, офтальмолог, аудиолог), УЗИ головного мозга (кальцификаты), офтальмоскопии (хориоретинит), аудиологического скрининга (тугоухость). При симптомной инфекции (микроцефалия, гепатоспленомегалия, тромбоцитопения, пневмония, энцефалит) – противовирусная терапия (валганцикловир, ганцикловир). При бессимптомной – наблюдение (риск поздней тугоухости).

Новорожденный (возраст > 3 недель) + положительная ПЦР мочи или слюны:

Интерпретация:Может быть врожденной инфекцией (если инфицирование произошло внутриутробно) или перинатальной/постнатальной (при родах, через грудное молоко). Для дифференциации: ПЦР крови (при перинатальной/постнатальной инфекции виремия кратковременная, у иммунокомпетентных детей редко). Лечение только при симптомах (пневмония, гепатит, энцефалит – у недоношенных, у детей с иммунодефицитом).

Беременная (I триместр) + положительная ПЦР крови (виремия) + IgM положительный, авидность IgG низкая:

Интерпретация:Первичная ЦМВ-инфекция. Высокий риск вертикальной передачи (30-40%). Требует амниоцентеза (ПЦР амниотической жидкости) не ранее 21-22 недель. При подтверждении врожденной инфекции у плода – обсуждение пролонгирования беременности (лечение во время беременности не рекомендуется, но в некоторых странах используется валганцикловир или гипериммунный иммуноглобулин – данные противоречивы).

Беременная (II-III триместр) + положительная ПЦР крови (низкая нагрузка) + IgM отрицательный, IgG положительный (высокая авидность):

Интерпретация:Реактивация латентной ЦМВ-инфекции. Риск вертикальной передачи минимален (< 1-2%). Амниоцентез обычно не требуется. Наблюдение.

Иммунокомпетентный взрослый + положительная ПЦР крови (низкая нагрузка) + симптомы (лихорадка, фарингит, лимфаденопатия):

Интерпретация:Мононуклеозоподобный синдром, вызванный ЦМВ (первичная инфекция). Лечение симптоматическое (противовирусные – только при тяжелом течении, например, при пневмонии, энцефалите).

Иммунокомпетентный взрослый + положительная ПЦР мочи (или слюны) + отрицательная ПЦР крови:

Интерпретация:Латентная ЦМВ-инфекция с периодическим выделением вируса (транзиторная вирурия). Не требует лечения.

Важные нюансы интерпретации:

ПЦР плазмы (свободный вирус) vs ПЦР цельной крови (вирус в лейкоцитах):Плазма отражает активную репликацию (виремию). Цельная кровь более чувствительна, но может давать положительный результат при латентной инфекции (вирус в лейкоцитах без репликации). Для мониторинга реакции на терапию предпочтительнее плазма.
Единицы измерения: копии/мл vs МЕ/мл (международные единицы):МЕ/мл калиброваны по стандарту ВОЗ (первый международный стандарт ЦМВ, код 09/162). Разные тест-системы могут давать разные абсолютные значения (в 2-5 раз). При мониторинге важно использовать одну и ту же тест-систему (для сравнения результатов в динамике).
Ложноположительный результат:Возможен при контаминации образца (несоблюдение правил асептики, загрязнение реагентов). Частота ложноположительных результатов в хорошо организованных лабораториях составляет менее 0,5-1%.
Ложноотрицательный результат:Возможен при неправильном взятии материала (недостаточное количество крови, мочи), при длительном хранении (деградация ДНК), при подавлении ПЦР (ингибиторы в образце – гепарин, гемоглобин, мочевая кислота), при очень низкой вирусной нагрузке (ниже предела чувствительности), при приеме противовирусных препаратов до анализа.
Контроль излеченности:Для иммунокомпрометированных пациентов – отрицательная ПЦР плазмы (или снижение до < 100-500 копий/мл) через 2-4 недели после окончания курса противовирусной терапии.

Факторы, влияющие на результат

На результат определения ДНК цитомегаловируса могут влиять различные преаналитические, аналитические и биологические факторы:

Преаналитические (до взятия материала):

Прием противовирусных препаратов (ганцикловир, валганцикловир, фоскарнет, цидофовир, летермовир)за 2-4 недели до анализа – приводит к ложноотрицательным результатам (снижение вирусной нагрузки, разрушение ДНК). Это самый частый фактор ложноотрицательных результатов.
Прием иммуносупрессоров (циклоспорин, такролимус, метотрексат, азатиоприн, микофенолата мофетил, ритуксимаб, глюкокортикоиды)– может вызывать реактивацию ЦМВ (увеличение вирусной нагрузки). Важно для интерпретации (реактивация на фоне иммуносупрессии – ожидаемое явление).
Гепарин(в пробирках с зеленой крышкой) – ингибирует ПЦР (ложноотрицательный результат). Используйте пробирки с ЭДТА (фиолетовая) или цитратом (синяя).
Длительное хранение крови при комнатной температуре(более 2-4 часов) – деградация ДНК (ложноотрицательный результат). Центрифугируйте в течение 2 часов.
Замораживание-оттаивание(более 1-2 циклов) – деградация ДНК.
Гемолиз, липемия образца– ингибиторы ПЦР (ложноотрицательный результат).

Аналитические (на этапе лабораторного исследования):

Контаминация реагентов и лабораторной посудыампликонами (продуктами ПЦР) – ложноположительный результат.
Ингибиторы ПЦРв образце (гепарин, гемоглобин, мочевая кислота, препараты для местного лечения) – ложноотрицательный результат.
Нарушение температурного режима хранения транспортной среды(замораживание, перегрев) – деградация ДНК.
Чувствительность тест-системы:Разные коммерческие наборы имеют разную чувствительность (10-100 копий/мл). Высокочувствительные тесты предпочтительнее для иммунокомпрометированных пациентов.
Калибровка по стандарту ВОЗ:Для количественной ПЦР результаты в МЕ/мл должны быть калиброваны по стандарту ВОЗ (для сопоставимости между лабораториями).

Биологические факторы:

Иммунный статус (CD4-лимфоциты):У ВИЧ-инфицированных с CD4 < 50-100 риск реактивации ЦМВ и ЦМВ-болезни значительно выше. Положительная ПЦР крови (даже с низкой нагрузкой) у таких пациентов требует активного наблюдения.
Тип трансплантации:У реципиентов аллогенных трансплантатов костного мозга риск ЦМВ-реактивации выше (50-70%), чем у реципиентов аутологичных (10-20%). У реципиентов солидных органов (почки, печень, сердце) – 20-40%.
Стадия после трансплантации:Риск реактивации максимален через 1-6 месяцев после трансплантации (до восстановления иммунитета).
Беременность:Иммуносупрессия может вызывать реактивацию ЦМВ (редко, риск вертикальной передачи при реактивации < 1-2%).
Возраст:У новорожденных и детей раннего возраста ЦМВ-инфекция может протекать тяжелее (пневмония, гепатит, энцефалит). У пожилых – риск реактивации ниже.

Лаборатория Бойченко гарантирует точность и достоверность результатов благодаря современному оборудованию и высоким стандартам качества.

Список литературы:

Клинические рекомендации Министерства здравоохранения РФ «Цитомегаловирусная инфекция у взрослых». 2021.
Клинические рекомендации Министерства здравоохранения РФ «Цитомегаловирусная инфекция у детей». 2021.
Клинические рекомендации Министерства здравоохранения РФ «ВИЧ-инфекция у взрослых (оппортунистические инфекции)». 2020.
Клинические рекомендации Министерства здравоохранения РФ «Трансплантация гемопоэтических стволовых клеток (профилактика и лечение ЦМВ-инфекции)». 2020.
Ljungman P., de la Camara R., Robin C. et al. Guidelines for the management of cytomegalovirus infection in patients with haematological malignancies and after stem cell transplantation from the 2017 European Conference on Infections in Leukaemia (ECIL 7). The Lancet Infectious Diseases. 2019;19(8):e260-e272.