ПЦР Вирус папилломы тип 18

Краткая История
Вирус папилломы человека (ВПЧ) известен столетиями, но его прямая связь с раком шейки матки была научно доказана лишь во второй половине XX века. В 1970-х годах немецкий ученый Харальд цур Хаузен выдвинул и впоследствии доказал гипотезу о том, что ВПЧ является основной причиной этого заболевания. Его многолетние исследования, увенчавшиеся Нобелевской премией по физиологии и медицине в 2008 году, привели к идентификации конкретных типов вируса, наиболее ассоциированных с онкологией. ВПЧ 16 и 18 типов были выделены как самые опасные («высокоонкогенные»), ответственные за подавляющее большинство случаев рака шейки матки (70-80%). Разработка метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) в 1983 году (Кэри Мюллис, Нобелевская премия 1993 г.) стала революцией в диагностике ВПЧ, позволив напрямую, с высокой чувствительностью и специфичностью, обнаруживать ДНК вируса, в том числе и конкретно 18 типа, в клинических образцах. Это открыло путь к массовому скринингу и эффективному мониторингу пациенток.
Материал, используемый для исследования
Для проведения ПЦР-анализа на ВПЧ 18 типа используются следующие типы биоматериала:

Соскоб эпителиальных клеток из цервикального канала (шейки матки): Является золотым стандартом для скрининга рака шейки матки у женщин. Забор производится специальной цитощеткой (Cervex-Brush®, типа «ершик») или зондом во время гинекологического осмотра.
Соскоб эпителиальных клеток из уретры: Применяется у мужчин и женщин при подозрении на уретральную локализацию вируса или для обследования партнеров.
Соскоб эпителиальных клеток из вульвы/вагины: Может использоваться как альтернатива цервикальному соскобу в определенных ситуациях, но обладает меньшей чувствительностью для выявления цервикальной патологии.
Соскоб эпителиальных клеток ано-генитальной области: При наличии кондилом или подозрении на аногенитальную инфекцию.
Биоптаты тканей: Фрагменты тканей, полученные при биопсии шейки матки, кондилом, участков дисплазии или опухолей.
Жидкостная цитология (например, ThinPrep®, SurePath®): Жидкостная среда, в которую помещается клеточный материал из цервикального канала, может использоваться и для ПЦР-тестирования на ВПЧ («co-testing»).
Моча (реже): Используется преимущественно у мужчин, но обладает меньшей чувствительностью по сравнению с соскобами.

Как подготовиться к анализу
Правильная подготовка критически важна для получения достоверного результата:

Женщины:
- Время цикла: Оптимальное время – середина цикла, через 1-2 дня после окончания менструации и не позднее, чем за 5 дней до начала следующей. Не следует сдавать анализ во время менструации.
- Воздержание: Необходимо воздержаться от половых контактов в течение 48 часов до забора материала.
- Местные препараты: За 48-72 часа до исследования прекратить использование вагинальных свечей, кремов, таблеток, спермицидов, тампонов. Не проводить спринцевания.
- Гигиена: Накануне вечером провести обычный туалет наружных половых органов теплой водой с мылом. Утром в день исследования подмывание не рекомендуется.
- Медицинские манипуляции: Забор материала должен проводиться до гинекологического осмотра (кольпоскопии) или не ранее, чем через 48 часов после него. После лечения эрозии, биопсии шейки матки, хирургических вмешательств на шейке матки следует выждать не менее 4-6 недель.
Мужчины:
- Воздержание: Рекомендуется воздержание от мочеиспускания в течение 1.5-2 часов перед забором материала из уретры.
- Гигиена: Тщательный туалет наружных половых органов вечером накануне. Утром в день исследования – подмывание без использования агрессивных антисептиков.
Общее для всех:
- Антибиотики/Противовирусные: Информировать врача о недавнем или текущем приеме любых антибиотиков или противовирусных препаратов. Они могут влиять на результат.
- Острые инфекции: Не рекомендуется сдавать анализ во время острых воспалительных заболеваний урогенитального тракта (с выраженными симптомами – зуд, жжение, обильные выделения). Сначала нужно пройти лечение.

Описание данного вещества (ВПЧ 18 типа)
Вирус папилломы человека 18 типа (Human Papillomavirus 18, HPV-18) – это небольшой ДНК-содержащий вирус, относящийся к семейству Papillomaviridae, роду Alphapapillomavirus. Как и все ВПЧ, он обладает тропизмом к эпителиальным клеткам кожи и слизистых оболочек. Вирион не имеет внешней оболочки, его капсид имеет икосаэдрическую форму. Геном представлен кольцевой двухцепочечной ДНК.

ВПЧ 18 типа классифицируется как вирус высокого онкогенного риска (ВОР). Это означает, что его персистенция (длительное присутствие) в эпителиальных клетках, особенно шейки матки, значительно повышает риск развития предраковых состояний (дисплазия шейки матки различной степени тяжести – CIN I, II, III) и инвазивного рака шейки матки. Он также ассоциирован с раком вульвы, влагалища, анального канала, полового члена и раком ротоглотки.

Механизм онкогенеза ВПЧ 18 типа связан со способностью его ранних белков (E6 и E7) вмешиваться в ключевые регуляторные пути клетки:

Белок E6: Связывается с клеточным белком p53 (главный «страж генома», подавляющий опухолевый рост) и ускоряет его разрушение через убиквитин-протеасомный путь. Это приводит к потере контроля над клеточным циклом, накоплению мутаций и уклонению клетки от апоптоза (запрограммированной смерти).
Белок E7: Связывается и инактивирует белок ретинобластомы (pRb), который является ключевым регулятором перехода клетки из G1 в S фазу клеточного цикла. Это приводит к неконтролируемой пролиферации клеток. E7 также может активировать теломеразу, способствуя «бессмертию» инфицированных клеток.

Инфекция ВПЧ 18 типа чаще всего передается половым путем (включая орально-генитальные контакты). Возможен контактно-бытовой путь (через поврежденную кожу/слизистые) и вертикальный путь (от матери к ребенку во время родов). Инфекция чрезвычайно распространена: большинство сексуально активных людей сталкиваются с ВПЧ в течение жизни. В большинстве случаев (80-90%) иммунная система справляется с вирусом в течение 1-2 лет, элиминируя его. Однако у части инфицированных развивается персистирующая инфекция, которая и представляет основной риск для развития рака.

Диагностика заболеваний
ПЦР-анализ на ВПЧ 18 типа является основным молекулярно-биологическим методомдиагностики инфицирования этим конкретным высокоонкогенным типом вируса. Он используется для:

Первичного скрининга рака шейки матки: Все чаще применяется как самостоятельный метод или в комбинации с цитологией (ПАП-тестом) у женщин старше 25-30 лет. Выявление ВПЧ 18 типа (особенно при персистенции) – важный маркер повышенного риска.
Триажирование женщин с аномальными результатами цитологии (ПАП-теста): Если в мазке обнаружены клетки неясного значения (ASC-US) или низкой степени атипии (LSIL), тест на ВПЧ ВОР (включая 18 тип) помогает определить необходимость кольпоскопии. Наличие ВПЧ 18 типа – показание к углубленному обследованию.
Мониторинг после лечения предраковых поражений шейки матки (CIN II/III): ПЦР на ВПЧ ВОР (включая 18 тип) используется для контроля эффективности лечения (конизация, LEEP) и раннего выявления рецидива. Сохранение позитивного результата, особенно на ВПЧ 16/18, – фактор риска рецидива.
Обследование половых партнеров женщин с выявленным ВПЧ 18 типа или патологией шейки матки.
Диагностика причин аногенитальных кондилом (хотя 18 тип реже вызывает кондиломы, чем типы 6 и 11, он может обнаруживаться).
Оценка риска развития рака других локализаций (анальный канал, ротоглотка) у групп высокого риска.

Цель исследования
Основные цели проведения ПЦР-анализа на ВПЧ 18 типа:

Раннее выявление высокого онкогенного риска: Точно идентифицировать наличие именно 18 типа ВПЧ, который несет наиболее высокую угрозу развития рака шейки матки и других аногенитальных раков.
Стратификация риска у женщин: У женщин с положительным результатом на ВПЧ ВОР общих тестов (которые показывают наличие любого из 12-14 типов высокого риска) определение конкретного типа (16 или 18) является ключевым для определения тактики ведения. Обнаружение ВПЧ 18 типа требует более активного подхода (немедленная кольпоскопия) даже при нормальной цитологии, в отличие от других ВПЧ ВОР.
Повышение эффективности скрининга: Использование типоспецифического ПЦР (особенно на 16/18) позволяет более точно отбирать женщин в группу самого высокого риска для немедленного углубленного обследования, избегая избыточных процедур у женщин с менее опасными типами ВПЧ ВОР.
Мониторинг эффективности лечения и прогноза: Оценка динамики вирусной нагрузки или элиминации ВПЧ 18 типа после лечения предраковых поражений шейки матки (CIN). Персистенция ВПЧ 18 типа после лечения – неблагоприятный прогностический признак.
Оценка эффективности вакцинации: В рамках эпидемиологических исследований для мониторинга распространенности именно вакциноуправляемых типов (16/18) после внедрения вакцин.
Диагностика причин неоплазий других локализаций: Установление роли ВПЧ 18 типа в развитии рака анального канала, полового члена, вульвы, влагалища, ротоглотки.

Что значат полученные результаты

«ДНК ВПЧ 18 типа ОБНАРУЖЕНА»:
- Указывает на наличие вирусной ДНК в исследуемом образце.
- Не означает диагноз «рак» или даже «предрак». Это означает инфицирование высокоонкогенным типом ВПЧ.
- У женщин: Это сигнал высокого риска развития рака шейки матки. Требует обязательного дообследования:
  - Если результат первичного скрининга – требуется кольпоскопия (осмотр шейки матки под увеличением) с прицельной биопсией подозрительных участков, независимо от результата цитологии (ПАП-теста).
  - При наличии аномальной цитологии (ASC-US, LSIL, HSIL) – кольпоскопия обязательна.
  - После лечения CIN – требует тщательного наблюдения и повторных ПЦР-тестов для контроля элиминации вируса. Персистенция – тревожный признак.
- У мужчин: Указывает на инфицирование и потенциальный риск развития рака полового члена, анального канала или ротоглотки. Требует консультации уролога/проктолога/ЛОРа для осмотра соответствующих зон. Может быть причиной передачи партнерше.
- Общее: Положительный результат требует обсуждения с врачом для определения дальнейшей тактики обследования, наблюдения или лечения. Необходимо информировать половых партнеров. Рекомендуется вакцинация партнеров (если не привиты) для предотвращения реинфекции или заражения другими типами.
«ДНК ВПЧ 18 типа НЕ ОБНАРУЖЕНА»:
- Указывает на отсутствие ДНК ВПЧ 18 типа в исследуемом образце на момент забора.
- Не исключает:
  - Инфицирование другими типами ВПЧ (включая другие высокоонкогенные, например, 16, 31, 33, 45 и т.д., или низкого риска).
  - Инфицирование ВПЧ 18 типа в очень низкой концентрации (ниже порога чувствительности теста).
  - Локализацию вируса в участке, не захваченном при заборе материала (ложноотрицательный результат из-за неправильного забора).
  - Перенесенную в прошлом инфекцию ВПЧ 18 типа (вирус элиминирован).
- У женщин: При нормальной цитологии – низкий риск развития рака шейки матки, связанного с ВПЧ 18 типа, в ближайшие годы. Следует продолжать плановый скрининг согласно возрасту и рекомендациям (обычно цитология или комбинация с тестом на ВПЧ ВОР в целом).
- Важно: Отрицательный результат на ВПЧ 18 типа не отменяет необходимости скрининга на другие типы ВПЧ ВОР или проведения цитологии.

Факторы, влияющие на результат

Правильность забора материала: Наиболее частая причина ложноотрицательных результатов. Недостаточное количество клеток, попадание в образец слизи, крови, воспалительного экссудата, непопадание зондом в зону трансформации шейки матки. Квалификация медработника, проводящего забор, критически важна.
Нарушение подготовки пациентом: Половые контакты, спринцевания, использование местных препаратов, менструация перед анализом – могут снизить концентрацию вируса в образце или сделать забор неинформативным.
Стадия инфекции и вирусная нагрузка: В период латентной инфекции или при очень низкой вирусной нагрузке концентрация ДНК может быть ниже порога чувствительности тест-системы.
Локализация вируса: Вирус может находиться в очаге, не доступном для стандартного забора (глубоко в цервикальном канале, в железах).
Технические ошибки лаборатории: Нарушение правил транспортировки, хранения биоматериала, ошибки на этапах выделения ДНК, постановки ПЦР (контаминация, неправильно подобранные режимы амплификации, некачественные реагенты).
Чувствительность и специфичность тест-системы: Разные ПЦР-тесты имеют разную аналитическую чувствительность (минимальная определяемая концентрация ДНК) и специфичность (способность точно определять именно 18 тип, не давая перекрестных реакций с другими типами). Использование валидированных, высококачественных тест-систем обязательно.
Прием противовирусных препаратов: Может временно снижать вирусную нагрузку.
Состояние иммунитета: У пациентов с выраженной иммуносупрессией (ВИЧ, прием иммуносупрессантов) характер вирусной нагрузки и персистенции может быть нетипичным.

Заключение
ПЦР-анализ на выявление ДНК вируса папилломы человека 18 типа – это высокоточный и незаменимый инструмент в современной профилактике рака шейки матки и других ВПЧ-ассоциированных заболеваний. Его способность точно идентифицировать наиболее онкогенный тип вируса позволяет врачам выделять пациенток с наивысшим риском и проводить своевременное и адекватное вмешательство. Понимание значения результата и факторов, влияющих на него, необходимо как врачам для принятия клинических решений, так и пациентам для осознанного участия в программах скрининга и последующего наблюдения.

Лаборатория Бойченко гарантирует точность и достоверность результатов благодаря современному оборудованию и высоким стандартам качества.

Список литературы (ВПЧ 18):

World Health Organization (WHO). Human papillomavirus (HPV) and cervical cancer. Fact sheets. [Электронный ресурс]. (Обновляется регулярно).
de Sanjose, S., et al. (2010). Human papillomavirus genotype attribution in invasive cervical cancer: a retrospective cross-sectional worldwide study. The Lancet Oncology, 11(11), 1048-1056. (Ключевое исследование по вкладу типов ВПЧ в РШМ).
Schiffman, M., et al. (2007). Human papillomavirus and cervical cancer. The Lancet, 370(9590), 890-907. (Фундаментальный обзор).
Российское общество акушеров-гинекологов (РОАГ). Клинические рекомендации «Доброкачественные и предраковые заболевания шейки матки с позиции профилактики рака». 2020 г. (Актуальные национальные рекомендации по скринингу и ведению).
Arbyn, M., et al. (2020). 2020 list of human papillomavirus assays suitable for primary cervical cancer screening. Clinical Microbiology and Infection, 27(8), 1083-1095. (Оценка валидных тест-систем для ВПЧ-скрининга).