Вирус цитомегалии IgG авидность

 

Авидность IgG антител к цитомегаловирусу (ЦМВ, CMV)

 

1. Краткая История

Цитомегаловирус (ЦМВ, Human herpesvirus type 5) был открыт в 1956 году независимо Маргарет Смит (США) и Уильямом Роу (США) при исследовании тканей детей с цитомегалией («гигантоклеточной» инклюзией). Долгое время диагностика ЦМВ-инфекции основывалась на вирусологических (выделение вируса в культуре клеток) и серологических методах (определение суммарных антител). Однако эти методы не позволяли различить острую (первичную) инфекцию от реактивации латентной инфекции или реинфекции, что критически важно для ведения беременных женщин и пациентов с иммунодефицитом. В 1980-х годах было обнаружено, что в ранние сроки после инфицирования (первые 1-4 месяца) вырабатываются антитела класса IgG с низкой авидностью – способностью прочно связываться с антигеном. По мере созревания иммунного ответа авидность антител возрастает. В 1990-х годах были разработаны стандартизованные методы определения авидности IgG (с использованием денатурирующих агентов – мочевины или гуанидина), что позволило дифференцировать первичную инфекцию (низкая авидность) от латентной/реактивации (высокая авидность). Сегодня определение авидности IgG к ЦМВ является обязательным компонентом серологической диагностики у беременных, при подозрении на внутриутробную инфекцию, у реципиентов трансплантатов и ВИЧ-инфицированных пациентов.

 

2. Материал, используемый для исследования

   • Тип образца:Венозная кровь (сыворотка крови).
   • Тип пробирки:Стандартная пробирка с активатором свертывания и разделительным гелем («желтая крышечка») для получения сыворотки. Допускается использование пробирки с гепарином («зеленая крышечка») или ЭДТА («фиолетовая крышечка»), однако предпочтительнее сыворотка.
   • Объем:Обычно 3-5 мл крови (достаточно 0,5-1 мл сыворотки).
   • Обработка:После взятия кровь аккуратно перемешивается (переворачивается) и оставляется при комнатной температуре на 20-30 минут для полного свертывания. Затем центрифугируется для получения сыворотки. Сыворотка должна быть прозрачной, без признаков гемолиза и липемии, которые могут интерферировать с иммуноанализом. Стабильность IgG антител в сыворотке при +4°C составляет 5-7 дней, при -20°C – 1 год и более. Длительное хранение или повторные циклы замораживания-оттаивания не рекомендуются.

 

3. Как подготовиться к анализу

Подготовка к анализу на авидность IgG к ЦМВ минимальна, так как это серологический тест, не зависящий от диеты, времени суток или физической нагрузки:

• Голодание:Строго не обязательно. Кровь можно сдавать как натощак, так и после еды. Однако для снижения риска липемии (мутности сыворотки) рекомендуется сдавать кровь натощак или через 3-4 часа после легкого приема пищи.
• Время сдачи:Кровь можно сдавать в любое время дня.
• Лекарственные препараты:Антибиотики, противовирусные препараты (ганцикловир, валганцикловир, ацикловир), иммуносупрессоры, глюкокортикоиды НЕ влияют на авидность антител, так как авидность отражает зрелость иммунного ответа, а не текущий уровень антител. Однако длительная иммуносупрессия может изменять кинетику иммунного ответа.
• Инфекционные заболевания:Острые инфекционные заболевания (не ЦМВ) могут временно модулировать иммунный ответ, но существенно не влияют на авидность специфических антител к ЦМВ.
• Беременность:Анализ можно и нужно проводить во время беременности при подозрении на первичную ЦМВ-инфекцию.
• Переливание крови и иммуноглобулинов:Если пациент недавно получал переливание крови, плазмы или внутривенные иммуноглобулины (ВВИГ), это может исказить результаты серологических тестов (внесение пассивных антител). Рекомендуется отложить анализ на 4-6 месяцев после последней трансфузии или введения ВВИГ, если это возможно.

 

4. Описание данного вещества

Авидность IgG антител – это характеристика прочности (силы) связывания антител с соответствующим антигеном. В процессе созревания иммунного ответа после первичного контакта с антигеном (вирусом, бактерией) происходит аффинное созревание антител в зародышевых центрах лимфатических узлов. Под действием активированных Т-лимфоцитов (T-follicular helper cells) в В-лимфоцитах происходят соматические гипермутации в генах вариабельных участков иммуноглобулинов. Это приводит к отбору клонов В-клеток, продуцирующих антитела с более высокой аффинностью (силой связывания с антигеном) и, как следствие, с более высокой авидностью.

 

Кинетика авидности IgG при ЦМВ-инфекции:

1. Острая (первичная) инфекция (первые 1-4 месяца после инфицирования):Иммунный ответ только начинает формироваться. Антитела класса IgG имеют низкую авидность. Они слабо связываются с антигеном и легко диссоциируют при добавлении денатурирующих агентов (мочевина, гуанидин). Низкая авидность является маркером недавнего первичного инфицирования.
2. Период созревания (через 4-6 месяцев после инфицирования):Авидность постепенно нарастает.
3. Латентная инфекция (через 6 и более месяцев после инфицирования, реактивация, реинфекция):Антитела имеют высокую авидность. Они прочно связываются с антигеном и не диссоциируют (или диссоциируют в минимальной степени) при обработке денатурирующими агентами.

 

Диагностическое значение авидности:

• Низкая авидность IgG(индекс авидности < 30-40% в зависимости от тест-системы) указывает на первичную (острую) инфекцию, перенесенную в течение последних 1-4 месяцев.
• Высокая авидность IgG(индекс авидности > 50-60%) указывает на латентную инфекцию (инфицирование более 4-6 месяцев назад), реактивацию латентной инфекции или реинфекцию другим штаммом (при этом авидность остается высокой).

 

Важное отличие: авидность vs аффинность:

• Аффинность– сила связывания одного антиген-связывающего центра антитела с одной антигенной детерминантой (эпитопом).
• Авидность– суммарная прочность связывания всего антитела (со всеми его антиген-связывающими центрами) с многовалентным антигеном (например, вирусной частицей). Авидность зависит как от аффинности, так и от валентности антитела (IgG – двухвалентен, IgM – пятивалентен). В клинической практике определяют именно авидность, так как это более физиологичный показатель.

 

4.1 Метод определения авидности

Определение авидности IgG проводится в два этапа с использованием того же образца сыворотки:

1. Первый этап (контрольная проба):Стандартный иммуноферментный анализ (ИФА) или иммунохемилюминесцентный анализ (ИХЛ) – определение суммарного уровня IgG к ЦМВ.
2. Второй этап (тестовая проба):В лунки планшета (или на твердую фазу) после инкубации с сывороткой пациента добавляют денатурирующий агент – обычно раствор мочевины (6-8 М) или гуанидина гидрохлорида. Денатурирующий агент разрушает слабые (непрочные) связи между антителом и антигеном. Затем проводят стандартную процедуру ИФА/ИХЛ с детекцией оставшихся связанных антител.

 

Расчет индекса (процента) авидности:

Индекс авидности (%) = (Оптическая плотность тестовой пробы / Оптическая плотность контрольной пробы) × 100%

• Низкая авидность:Индекс < 30-40% (разрушается много антител).
• Пограничная (серая) зона:Индекс 30-50% (разные тест-системы имеют разные пороги). Требует повторного исследования через 2-4 недели.
• Высокая авидность:Индекс > 50-60% (разрушается мало антител или не разрушается).

 

5. Диагностика заболеваний

Определение авидности IgG к ЦМВ используется для дифференциальной диагностики первичной инфекции от реактивации латентной инфекции или реинфекции при:

1. Беременности (скрининг и диагностика ЦМВ-инфекции):Это основное показание. У беременных женщин при обнаружении IgG и IgM к ЦМВ определение авидности IgG позволяет:

• Низкая авидность– первичная инфекция в течение последних 1-4 месяцев. Высокий риск вертикальной передачи вируса плоду (внутриутробное инфицирование) – до 30-40% в I триместре и выше во II-III триместрах. Требует динамического наблюдения, амниоцентеза (определение ДНК ЦМВ в амниотической жидкости) и решения вопроса о пролонгировании беременности.
• Высокая авидность– латентная инфекция (инфицирование более 4-6 месяцев назад) или реактивация. Риск внутриутробного инфицирования минимален (менее 1-2%), так как у матери есть защитные антитела высокой авидности, которые передаются плоду. Однако при реактивации (редко) риск внутриутробного инфицирования все же существует (особенно у иммунокомпрометированных беременных).
  2. Диагностики неонатальной и врожденной ЦМВ-инфекции у новорожденных:У ребенка при обнаружении IgG к ЦМВ определение авидности помогает отличить материнские антитела (пассивно переданные через плаценту – у них высокая авидность, если мать инфицирована давно) от собственных антител ребенка (при врожденной инфекции – авидность может быть низкой, если инфекция произошла незадолго до родов).
  3. Пациентов с иммунодефицитами (ВИЧ-инфекция, реципиенты трансплантатов, онкогематологические больные, пациенты на хроническом диализе, получающие иммуносупрессивную терапию):У этих пациентов ЦМВ-инфекция может протекать тяжело (пневмонит, колит, ретинит, энцефалит). Определение авидности помогает отличить первичную инфекцию (низкая авидность, высокий риск тяжелого течения) от реактивации (высокая авидность, риск также высок, но прогноз может быть лучше).
  4. Дифференциальной диагностики ложноположительных IgM:Иногда IgM к ЦМВ могут сохраняться годами после первичной инфекции («персистирующие» IgM) или появляться при реактивации. Определение авидности IgG (высокая авидность при давней инфекции) позволяет отличить ложноположительные/персистирующие IgM от истинной первичной инфекции.
  5. Мониторинга течения ЦМВ-инфекции и оценки эффективности противовирусной терапии (ограниченно):Авидность IgG не используется для мониторинга лечения, так как она меняется медленно (месяцы). Для мониторинга используют ПЦР (определение ДНК ЦМВ в крови) и определение IgM/IgG в динамике.
  6. Скрининга доноров крови, органов и тканей:Для исключения первичной инфекции у доноров (особенно иммунокомпрометированных реципиентов). Высокая авидность IgG допустима (латентная инфекция), низкая авидность – противопоказание к донации (риск передачи вируса).

 

Цель исследования

Основные цели определения авидности IgG к цитомегаловирусу:

1. Дифференциальная диагностика первичной (острой) ЦМВ-инфекции от реактивации латентной инфекции или реинфекцииу пациентов с положительными IgM и IgG или изолированно положительными IgG (при подозрении на недавнее инфицирование).
2. Определение срока давности инфицирования– оценка, произошло ли заражение в течение последних 1-4 месяцев (низкая авидность) или более 4-6 месяцев назад (высокая авидность).
3. Оценка риска вертикальной передачи ЦМВ плодуу беременных женщин с первичной инфекцией (низкая авидность – высокий риск) или реактивацией (высокая авидность – низкий риск).
4. Дифференциальная диагностика врожденной ЦМВ-инфекции у новорожденных(отличие собственных антител ребенка от материнских пассивных антител).
5. Исключение ложноположительных результатов IgMк ЦМВ (при сохранении IgM более 4-6 месяцев после первичной инфекции или при реактивации).
6. Прогнозирование течения ЦМВ-инфекцииу иммунокомпрометированных пациентов (низкая авидность – первичная инфекция, высокий риск тяжелого течения).
7. Скрининг доноровдля предотвращения трансфузионной и трансплантационной передачи ЦМВ.

 

Что значат полученные результаты

Интерпретация результатов авидности IgG к ЦМВ всегда проводится врачом-инфекционистом, акушером-гинекологом, неонатологом или терапевтом в комплексе с результатами определения IgM и IgG к ЦМВ (количественно или полуколичественно), ПЦР (определение ДНК ЦМВ в крови, моче, амниотической жидкости), клинической картиной, анамнезом (иммунный статус, беременность, трансплантация) и данными инструментальных методов (УЗИ плода). Референсные значения зависят от тест-системы (ИФА, ИХЛ) и производителя. Всегда сверяйтесь с референсами вашей лаборатории!

 

Референсные значения (индекс/процент авидности):

Индекс авидности (%)	Интерпретация	Клиническое значение
< 30-40% (зависит от теста)	Низкая авидность	Первичная инфекция в течение последних 1-4 месяцев. Высокий риск передачи вируса (вертикально, трансплантационно, трансфузионно).
30-50% (или 40-60% – зависит от теста)	Пограничная (серая) зона	Неопределенный результат. Требует повторного исследования через 2-4 недели (ожидать повышения авидности при первичной инфекции).
> 50-60% (зависит от теста)	Высокая авидность	Латентная инфекция (инфицирование > 4-6 месяцев назад), реактивация или реинфекция. Низкий риск передачи вируса.

*Примечание: Конкретные пороговые значения зависят от производителя тест-системы. Например: Abbott – низкая < 35%, пограничная 35-45%, высокая > 45%; Euroimmun – низкая < 40%, пограничная 40-50%, высокая > 50%; DiaSorin – низкая < 30%, пограничная 30-50%, высокая > 50%. Всегда используйте референсы своей лаборатории!*

 

Низкая авидность IgG (< 30-40%):

• Указывает на первичную (острую) ЦМВ-инфекцию, перенесенную в течение последних 1-4 месяцев (чаще 1-2 месяцев).
• У беременных:Высокий риск внутриутробного инфицирования плода (30-40% при первичной инфекции в I триместре, 40-70% во II-III триместрах). Требует:

• Определения ДНК ЦМВ в амниотической жидкости (амниоцентез не ранее 21-22 недели беременности и не ранее 6-8 недель после предполагаемой даты инфицирования матери).
• УЗИ плода (кальцификаты в головном мозге, вентрикуломегалия, гепатоспленомегалия, асцит, гидропс, задержка внутриутробного развития).
• Решения вопроса о пролонгировании беременности (иногда рекомендуется прерывание при подтвержденном внутриутробном инфицировании с пороками развития).
  • У иммунокомпетентных небеременных:Недавнее инфицирование. Обычно протекает бессимптомно или как мононуклеозоподобный синдром (лихорадка, фарингит, лимфаденопатия, гепатит, атипичные мононуклеары в крови). Специфического лечения обычно не требуется (за исключением тяжелого течения).
  • У иммунокомпрометированных пациентов (ВИЧ, трансплантация):Первичная инфекция – высокий риск тяжелого течения (пневмонит, колит, ретинит, энцефалит). Требует противовирусной терапии (ганцикловир, валганцикловир, фоскарнет) и профилактики.
  • У новорожденных:Если IgG обнаружены у ребенка (в возрасте > 6 месяцев – собственные антитела) и авидность низкая – врожденная или перинатальная ЦМВ-инфекция. Требует подтверждения ПЦР.

 

Пограничная авидность IgG (30-50% или 40-60%):

• Неопределенный результат.Нельзя уверенно сказать, первичная это инфекция или давняя.
• Причины:

• Ранняя стадия первичной инфекции (авидность еще не достигла низких значений? – но обычно она именно низкая).
• Поздняя стадия первичной инфекции (авидность уже начинает повышаться, но еще не достигла высоких значений – через 3-5 месяцев после инфицирования).
• Индивидуальные особенности иммунного ответа (у некоторых людей авидность долго остается в пограничной зоне).
• Технические погрешности теста.
  • Действия:Рекомендуется повторить анализ через 2-4 недели. При первичной инфекции авидность будет нарастать (перейдет в высокую). При латентной инфекции останется в пограничной зоне или будет высокой (если изначально была неверно оценена). Также рекомендуется определение ДНК ЦМВ методом ПЦР (качественно или количественно).

 

Высокая авидность IgG (> 50-60%):

• Указывает на латентную (персистирующую) ЦМВ-инфекцию (инфицирование более 4-6 месяцев назад, чаще – годы).Возможна реактивация латентной инфекции (особенно у иммунокомпрометированных) или реинфекция другим штаммом (авидность остается высокой).
• У беременных:Риск внутриутробного инфицирования плода при высокой авидности IgG минимален (менее 1-2%), даже если обнаружены IgM (это могут быть ложноположительные или персистирующие IgM). При реактивации ЦМВ во время беременности (что бывает редко) риск вертикальной передачи также невысок (около 1-2%).

• Если у беременной обнаружены только IgG (без IgM), авидность высокая– латентная инфекция. Дополнительное обследование не требуется (только рутинный скрининг по показаниям).
• Если у беременной обнаружены IgG и IgM, авидность высокая– скорее всего, ложноположительные или персистирующие IgM (IgM могут сохраняться годами у 5-15% пациентов). Первичная инфекция в последние 4-6 месяцев маловероятна. Для исключения реактивации можно определить ДНК ЦМВ в крови методом ПЦР.
  • У новорожденных (в возрасте до 6 месяцев):Если IgG обнаружены и авидность высокая – это, скорее всего, материнские пассивные антитела (переданные через плаценту). Собственные антитела ребенка при врожденной инфекции могут иметь низкую или высокую авидность в зависимости от срока инфицирования.
  • У реципиентов трансплантатов и ВИЧ-инфицированных:Высокая авидность указывает на латентную инфекцию (риск реактивации сохраняется, но первичная инфекция маловероятна). Однако при реактивации авидность остается высокой, поэтому для диагностики активной инфекции используют ПЦР.

 

Важные нюансы интерпретации:

• Авидность IgG определяется ТОЛЬКО при положительном результате IgG.Если IgG отрицательный, авидность не определяют (нет смысла).
• Авидность IgG не используется для диагностики острой инфекции в первые 2-4 недели после инфицирования– в этот период IgG могут еще не появиться (сероконверсия). В ранние сроки (первые 2-3 недели) для диагностики первичной инфекции используют IgM и ПЦР (определение ДНК ЦМВ в крови). Авидность IgG информативна начиная с 4-6 недели после инфицирования.
• Авидность IgG не меняется при реактивации латентной инфекции– она остается высокой. Поэтому для диагностики реактивации авидность бесполезна, нужно использовать ПЦР (обнаружение ДНК ЦМВ в крови, моче, слюне).
• Авидность IgG не используется для мониторинга лечения(она меняется медленно, в течение месяцев).
• Ложноположительные результаты авидности(низкая авидность при латентной инфекции) возможны при очень высоком уровне IgG (эффект «антительного перенасыщения»), при некоторых аутоиммунных заболеваниях (ревматоидный фактор), при наличии гетерофильных антител.
• Авидность к ЦМВ и авидность к другим герпесвирусам (ВЭБ, ВПГ, ВЗВ) не коррелируют– нужно определять отдельно для каждого вируса.

 

8. Факторы, влияющие на результат

На результат определения авидности IgG к ЦМВ могут влиять различные преаналитические, биологические, патологические и методологические факторы:

Преаналитические:

• Гемолиз образца:Может интерферировать с иммуноанализом, приводя к ложноотрицательным или ложноположительным результатам.
• Липемия (хилёз):Сильное помутнение сыворотки мешает оптическому измерению (в фотометрических методах).
• Неправильное хранение:Длительное хранение при комнатной температуре (более 5-7 дней) может приводить к деградации антител.
• Замораживание-оттаивание:Повторные циклы замораживания-оттаивания могут снижать активность антител.

 

Физиологические факторы:

• Возраст:У пожилых людей авидность антител может быть несколько выше (длительный иммунный ответ).
• Беременность:Физиологическая иммуносупрессия может замедлять созревание авидности (но не отменяет диагностическую значимость).
• Иммунодефициты:У пациентов с иммунодефицитами (ВИЧ, онкогематологические заболевания, после трансплантации) созревание авидности может быть замедленным или неполным. Это затрудняет интерпретацию (низкая авидность может сохраняться дольше 4-6 месяцев).

 

Патологические состояния:

• Аутоиммунные заболевания (системная красная волчанка, ревматоидный артрит):Наличие аутоантител (ревматоидный фактор) может вызывать ложноположительные результаты (неспецифическое связывание с антигеном в тесте). Современные тест-системы включают блокирующие агенты, но риск сохраняется.
• Паразитарные инфекции (гельминтозы):Высокий уровень общего IgE может влиять на иммуноанализ (редко).
• Гипергаммаглобулинемия (моноклональные гаммапатии):Очень высокий уровень IgG (например, при множественной миеломе) может вызывать ложноположительные результаты (антительный «перенасыщение»).

 

Лекарственные препараты:

• Снижают уровень IgG (опосредованно):Иммуносупрессоры (циклоспорин, азатиоприн, метотрексат, микофенолата мофетил), высокие дозы глюкокортикоидов (преднизолон > 20 мг/сут длительно), моноклональные антитела (ритуксимаб, алемтузумаб). Это может замедлять созревание авидности, но не отменяет диагностическую значимость.
• Не влияют на авидность:Противовирусные препараты (ганцикловир, валганцикловир, ацикловир), антибиотики, антигистаминные.

 

Методологические факторы (НАИБОЛЕЕ ВАЖНЫЕ):

• Разные тест-системы имеют разные пороговые значения!Результаты авидности, полученные на разных анализаторах (Abbott, Euroimmun, DiaSorin, Siemens, Roche), несопоставимы напрямую. Обязательно используйте референсные значения, указанные в бланке вашей лаборатории.
• Метод определения:Иммуноферментный анализ (ИФА) – классический метод для определения авидности. Иммунохемилюминесценция (ИХЛ) – также используется, но не на всех анализаторах есть режим определения авидности (требует специальных реагентов). Предпочтительнее ИФА с мочевиной.
• Концентрация денатурирующего агента:Разные производители используют разные концентрации мочевины (6 М, 8 М) или гуанидина. Это влияет на пороговые значения.
• Калибровка и контроль качества:Критически важны. Лаборатория должна использовать коммерческие контрольные образцы с известной авидностью.
• Индекс авидности – относительный показатель:Зависит от оптической плотности контрольной пробы (без денатурации). При очень высоком уровне IgG возможны артефакты.

Лаборатория Бойченко гарантирует точность и достоверность результатов благодаря современному оборудованию и высоким стандартам качества.

---

Список литературы:

1. Клинические рекомендации Министерства здравоохранения РФ «Цитомегаловирусная инфекция у взрослых». 2021.
2. Клинические рекомендации Министерства здравоохранения РФ «Цитомегаловирусная инфекция у детей». 2021.
3. Клинические рекомендации (протоколы) по ведению беременных с подозрением на внутриутробное инфицирование (ЦМВ, токсоплазмоз, краснуха). Российское общество акушеров-гинекологов. 2020.
4. Lazzarotto T., Guerra B., Lanari M. et al. New advances in the diagnosis of congenital cytomegalovirus infection. Journal of Clinical Virology. 2008;41(3):192-197.
5. Prince H.E., Lapé-Nixon M. Role of cytomegalovirus (CMV) IgG avidity testing in the diagnosis of primary CMV infection during pregnancy. Clinical and Vaccine Immunology. 2014;21(10):1377-1384.