ВПЧ КВАНТ-15 (6,11,16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,68) — генотипирование

Краткая История
Открытие роли вируса папилломы человека (ВПЧ) в развитии рака шейки матки принадлежит Харальду цур Хаузену (Нобелевская премия 2008 г.). С развитием молекулярной биологии стало ясно, что существует множество типов ВПЧ с разной онкогенной опасностью. В 1980-90-х годах были разработаны первые методы ПЦР для детекции ВПЧ. Понимание, что персистенция высокоонкогенных типов ВПЧ (ВКР ВПЧ)– ключевой фактор риска рака, привело к созданию тестов, способных не только обнаруживать ВПЧ, но и определять конкретные генотипы. Тест «ВПЧ КВАНТ-15»(разработка «ДНК-Технология», Россия) – это современный мультиплексный ПЦР-тест в реальном времени, позволяющий количественно определить вирусную нагрузку и генотипировать 15 наиболее клинически значимых типов ВПЧ: 12 высокоонкогенных (16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,68) и 3 низкоонкогенных (6,11), вызывающих аногенитальные кондиломы. Это позволяет проводить стратификацию риска и персонализировать наблюдение.
Материал, используемый для исследования

Основной материал: Соскоб эпителиальных клеток из цервикального канала (у женщин) ИЛИ соскоб эпителиальных клеток из уретры (у мужчин) ИЛИ соскоб эпителиальных клеток из вульвы/вагины/перианальной области (при поражениях) ИЛИ биоптат/мазок-отпечаток с кондиломы/папилломы.
Тип контейнера: Специальная стерильная щеточка (цитощетка типа Цервикс-Браш или аналогичная) в жидкой транспортной среде (специальный раствор для сохранения клеток и ДНК/РНК, например, типа ThinPrep® или аналоги). Сухие зонды или мазки на стекле не подходят!
Важно: Использовать только специализированные наборы для забора, предоставляемые лабораторией.

Как подготовиться к анализу

Для женщин:
- Забор проводится не во время менструации (оптимально на 10-20 день цикла).
- За 48 часов: Исключить половые контакты, вагинальные свечи, кремы, тампоны, спринцевания, трансвагинальное УЗИ, кольпоскопию.
- За 24 часа: Не проводить гигиену с антисептиками.
Для мужчин/женщин (уретра, другие локализации):
- За 48 часов: Исключить половые контакты.
- За 1.5-2 часа до соскоба из уретры: Не мочиться.
Общее:
- Не применять местные антисептики или антибиотики в области забора за 48-72 часа.
- Не принимать системные противовирусные препараты (особенно против ВПЧ) без согласования с врачом (могут снизить вирусную нагрузку).
- После кольпоскопии с уксусной пробой или пробой Шиллера должно пройти 48-72 часа.
- После лечения (деструкция, конизация) забор проводят не ранее, чем через 4-6 недель для оценки эффективности.
Транспортировка: Доставить в лабораторию в течение 1-3 дней при +2…+8°С (в холодильнике). Уточнить стабильность конкретной транспортной среды.

Описание метода и типов ВПЧ

Метод: Мультиплексная ПЦР в реальном времени (ПЦР-РВ) с генотипированием. Метод основан на:
1. Экстракции ДНК из образца.
2. Одновременной амплификации (умножении) специфичных участков ДНК каждого из 15 типов ВПЧ + контроль взятия материала (КВМ) в одной пробирке с разными флуоресцентными метками.
3. Детекции накопления флуоресцентного сигнала в «реальном времени» на каждом цикле ПЦР. Порог цикла (Ct) обратно пропорционален количеству вирусной ДНК.
4. Генотипирование: По специфичности флуоресцентного сигнала и/или температуре плавления продуктов амплификации (метод High Load) определяется, какой именно тип ВПЧ присутствует.
5. Количественное определение: По значению Ct для каждого типа рассчитывается вирусная нагрузка в Геномных Эквивалентах (ГЭ) на 10^5 клеток эпителия (по КВМ).
Определяемые типы ВПЧ и их значение:

- ВПЧ высокого канцерогенного риска (ВКР ВПЧ): 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68. Вызывают дисплазию (CIN) и рак шейки матки, анальный рак, рак вульвы/вагины, рак ротоглотки, рак полового члена. Типы 16 и 18 ответственны за ~70% всех РШМ.
- ВПЧ низкого канцерогенного риска (НКР ВПЧ): 6, 11. Вызывают аногенитальные кондиломы и папилломы, респираторный папилломатоз. Практически не вызывают рак.

Диагностика заболеваний
«ВПЧ КВАНТ-15» используется для:

Скрининга рака шейки матки (РШМ): В сочетании с цитологией (ПАП-тест) у женщин старше 25-30 лет (реже у мужчин для скрининга анального рака в группах риска).
Триажирования аномальных результатов цитологии (ПАП-теста): При ASC-US (атипичные клетки плоского эпителия неясного значения) для определения тактики (кольпоскопия или наблюдение).
Оценки риска развития дисплазии/рака: Выявление и количественная оценка ВКР ВПЧ, особенно 16/18 типа.
Контроля после лечения CIN (дисплазии) или РШМ: Оценка элиминации ВПЧ как маркера успешности лечения и риска рецидива.
Диагностики генитальных кондилом: Выявление типов 6/11 как основной причины.
Обследования половых партнеров пациентов с ВПЧ-ассоциированными заболеваниями.
Оценки эффективности вакцинации против ВПЧ: Мониторинг заражения вакцинными и невакцинными типами.

Цель исследования
Основные цели назначения:

Стратификация риска развития РШМ: Обнаружение ВКР ВПЧ, особенно 16/18 типа, и их вирусной нагрузки – ключевой фактор риска персистенции и прогрессии.
Генотипирование ВПЧ: Определение конкретных типов вируса для:
- Оценки индивидуального онкориска (типы 16/18 несут высочайший риск).
- Решения о необходимости кольпоскопии (особенно при ASC-US, если выявлен ВКР ВПЧ).
- Дифференциации персистирующей инфекции от нового заражения.
- Оценки охвата вакцинации (выявление вакцинных типов 6,11,16,18).
Количественное определение вирусной нагрузки: Высокая нагрузка ВКР ВПЧ ассоциирована с большим риском персистенции и наличием CIN. Динамическое наблюдение за нагрузкой помогает оценить эффективность иммунного ответа или лечения.
Диагностика причины кондилом: Обнаружение типов 6/11.
Контроль после лечения: Подтверждение элиминации ВПЧ (отсутствие ДНК) или выявление персистенции/реинфекции.

Что значат полученные результаты

Контроль взятия материала (КВМ): Должен быть положительным (≥ 10^4 клеток). Если КВМ < 10^4 клеток, результат недействителен (неадекватный забор), нужен перезабор.
ВПЧ высокого риска (16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,68):
- Не обнаружено: ДНК этих типов ВПЧ в образце нет. Риск развития CIN/РШМ, связанный с этими типами, минимален на момент исследования.
- Обнаружено (с указанием типа и вирусной нагрузки):
  - Тип: Конкретный выявленный генотип (например, ВПЧ 16, ВПЧ 31). Наличие ВПЧ 16 или 18 требует особого внимания и часто прямого направления на кольпоскопию даже при нормальной цитологии.
  - Вирусная нагрузка: Указывается в ГЭ/10^5 клеток (например, 5.2 x 10^5 ГЭ/10^5 клеток). Высокая нагрузка (> 10^5 ГЭ/10^5 клеток) особенно для типов 16/18, ассоциирована с повышенным риском наличия CIN2+ (умеренной дисплазии или хуже). Низкая нагрузка (< 10^3 ГЭ/10^5 клеток) чаще указывает на транзиторную инфекцию. Однако любое обнаружение ВКР ВПЧ требует внимания врача и динамики.
ВПЧ низкого риска (6, 11):
- Не обнаружено: ДНК этих типов ВПЧ в образце нет. Кондиломы, вероятно, вызваны другими причинами или другими типами ВПЧ (не входящими в панель).
- Обнаружено (с указанием типа и нагрузки): Подтверждает, что кондиломы (если есть) или носительство вызвано этими типами. Вирусная нагрузка менее значима для прогноза онкозаболеваний, но может коррелировать с активностью кондилом.
Важно:
- Положительный результат не означает рак или даже дисплазию. Он означает инфицирование и повышенный риск.
- Отрицательный результат не исключает полностью ВПЧ-инфекцию (возможно заражение типами не из панели КВАНТ-15 или очень низкая нагрузка).
- Решение о дальнейшем обследовании (кольпоскопия) или тактике ведения принимает врач на основании комбинации: наличия/отсутствия ВКР ВПЧ, конкретных генотипов (особенно 16/18), вирусной нагрузки, результатов цитологии, возраста женщины и анамнеза.

Факторы, влияющие на результат

Нарушение техники забора материала: Неадекватный соскоб (мало клеток → ложноотрицательный КВМ), контаминация.
Нарушение подготовки: Половой акт, спринцевания, местные препараты (могут снизить нагрузку или дать ложноотрицательный результат).
Транспортировка и хранение: Нарушение температурного режима или сроков → деградация ДНК → ложноотрицательный результат.
Стадия инфекции: В латентной фазе или при очень раннем заражении нагрузка может быть ниже порога детекции.
Локализация забора: При поражениях вульвы/перианальной области забор из цервикального канала может не выявить вирус.
Ингибиторы ПЦР: Присутствие в образце веществ (гемоглобин, слизь, цервикальная слизь при неправильной подготовке), подавляющих реакцию ПЦР → ложноотрицательный или заниженный результат.
Недавнее лечение: Деструкция очагов, противовирусная терапия → снижение нагрузки.
Методологические ограничения: Тест не определяет онкогенную активность вируса (интеграцию в геном, экспрессию онкобелков E6/E7). Не выявляет другие типы ВПЧ, кроме 15 указанных.

Лаборатория Бойченко гарантирует точность и достоверность результатов благодаря современному оборудованию и высоким стандартам качества.

Список литературы (ВПЧ КВАНТ-15):

de Sanjose S, Quint W.G.V, Alemany L et al. Human papillomavirus genotype attribution in invasive cervical cancer: a retrospective cross-sectional worldwide study. Lancet Oncol. 2010;11(11):1048-1056. (О распределении онкогенных типов ВПЧ при РШМ).
Schiffman M, Castle P.E, Jeronimo J et al. Human papillomavirus and cervical cancer. Lancet. 2007;370(9590):890-907. (Фундаментальный обзор).
Perkins R.B, Guido R.S, Castle P.E et al. 2019 ASCCP Risk-Based Management Consensus Guidelines for Abnormal Cervical Cancer Screening Tests and Cancer Precursors. J Low Genit Tract Dis. 2020;24(2):102-131. (Роль ВПЧ-тестирования и генотипирования в скрининге).
Arbyn M, Snijders P.J.F, Meijer C.J.L.M et al. Which high-risk HPV assays fulfil criteria for use in primary cervical cancer screening? Clin Microbiol Infect. 2015;21(9):817-826. (О валидации ВПЧ-тестов для скрининга).

ДНК-Технология. Инструкция по применению набора реагентов для выявления и количественного определения ДНК вирусов папилломы человека (Human papillomavirus, HPV) 6, 11, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68 типов методом ПЦР в режиме реального времени (ВПЧ КВАНТ-15). (Официальная инструкция тест-системы)