ВПЧ КВАНТ-4 (6,11,16,18) генотипирование

1. Краткая История
   Понимание ключевой роли ВПЧ 16 и 18 типов в развитии рака шейки матки (~70% случаев) и ВПЧ 6 и 11 типов в развитии аногенитальных кондилом (~90% случаев) привело к разработке профилактических вакцин. Первая квадривалентная вакцина Гардасил®, защищающая именно от типов 6,11,16,18, была зарегистрирована в 2006 году. Это создало потребность в специфических тестах для:

1. Оценки распространенности именно этих типов.
2. Мониторинга эффективности вакцинации.
3. Стратификации риска у женщин (особенно выявление 16/18).
   Тест «ВПЧ КВАНТ-4» (разработка «ДНК-Технология», Россия) – это узконаправленный мультиплексный ПЦР-тест в реальном времени, позволяющий количественно определить вирусную нагрузку и генотипировать только 4 типа ВПЧ: высокоонкогенные 16 и 18 и низкоонкогенные 6 и 11. Он фокусируется на наиболее клинически значимых и вакцинных типах.

2. Материал, используемый для исследования

• Основной материал: Соскоб эпителиальных клеток из цервикального канала (у женщин) ИЛИ соскоб эпителиальных клеток из уретры (у мужчин) ИЛИ соскоб эпителиальных клеток из вульвы/вагины/перианальной области ИЛИ биоптат/мазок-отпечаток с кондиломы/папилломы.
• Тип контейнера: Специальная стерильная щеточка (цитощетка типа Цервикс-Браш или аналогичная) в жидкой транспортной среде (ThinPrep® или аналоги). Сухие зонды не годятся.
• Важно: Использовать только специализированные наборы для забора от лаборатории.

3. Как подготовиться к анализу

• Аналогично подготовке к «ВПЧ КВАНТ-15» (см. статью 2):
  • Женщины: Не во время менструации. За 48 часов: исключить секс, вагинальные препараты, тампоны, спринцевания, УЗИ, кольпоскопию. За 24 часа: не использовать антисептики.
  • Мужчины/Женщины (уретра): За 48 часов исключить секс. За 1.5-2 часа не мочиться перед соскобом из уретры.
  • Общее: Не применять местные антисептики/антибиотики за 48-72 часа. Отмена системных противовирусных – по согласованию. После кольпоскопии – 48-72 часа. После лечения – минимум 4-6 недель.
• Транспортировка: +2…+8°С, в течение 1-3 дней.

4. Описание метода и типов ВПЧ

• Метод: Мультиплексная ПЦР в реальном времени (ПЦР-РВ) с генотипированием. Принцип аналогичен «КВАНТ-15», но нацелен только на 4 типа:
  1. Экстракция ДНК.
  2. Одновременная амплификация специфичных участков ДНК ВПЧ 6, 11, 16, 18 + КВМ в одной пробирке с разными флуоресцентными метками.
  3. Детекция сигнала в реальном времени. Расчет Ct.
  4. Генотипирование: Определение конкретного типа (6,11,16,18) по специфичности сигнала.
  5. Количественное определение: Расчет вирусной нагрузки (ГЭ/10^5 клеток) для каждого обнаруженного типа.
• Определяемые типы ВПЧ:

• • ВПЧ 16, 18: Высокоонкогенные типы (ВКР ВПЧ). Основные виновники РШМ, рака ануса, вульвы/вагины, полового члена, ротоглотки.
  • ВПЧ 6, 11: Низкоонкогенные типы (НКР ВПЧ). Основная причина генитальных и респираторных папиллом/кондилом.

5. Диагностика заболеваний
   «ВПЧ КВАНТ-4» используется для:

• Скрининга РШМ (фокус на 16/18): Особенно в алгоритмах, где обнаружение именно ВПЧ 16/18 является прямым показанием к кольпоскопии, независимо от цитологии.
• Триажирования аномальной цитологии (ASC-US): Выявление ВКР ВПЧ 16/18 для принятия решения о кольпоскопии.
• Стратификации риска: Женщины с ВПЧ 16/18 имеют наивысший риск развития CIN3+ (тяжелой дисплазии/рака in situ).
• Диагностики причины аногенитальных кондилом: Выявление типов 6/11.
• Мониторинга эффективности вакцинации против ВПЧ (квадривалентной Гардасил/Церварикс): Оценка заражения вакцинными типами (6,11,16,18) у привитых.
• Контроля после лечения CIN/кондилом: Оценка элиминации специфических вакцинных/онкогенных типов.

6. Цель исследования
   Основные цели назначения:

1. Выявление и генотипирование ВПЧ 16 и 18 типов: Определение женщин с наивысшим риском развития РШМ для приоритетного направления на кольпоскопию.
2. Выявление и генотипирование ВПЧ 6 и 11 типов: Подтверждение основной причины аногенитальных кондилом.
3. Количественная оценка вирусной нагрузки ВПЧ 16/18: Высокая нагрузка ассоциирована с большей вероятностью наличия CIN2+ и персистенции.
4. Оценка эффективности квадривалентной вакцинации: Мониторинг инфицирования типами 6,11,16,18 у привитых лиц.
5. Контроль элиминации специфических типов ВПЧ после лечения: Подтверждение успешности лечения дисплазии (элиминация 16/18) или кондилом (элиминация 6/11).

7. Что значат полученные результаты

• Контроль взятия материала (КВМ): Должен быть положительным (≥ 10^4 клеток). Неадекватный забор → перезабор.
• ВПЧ 16 и/или 18:
  • Не обнаружено: ДНК ВПЧ 16 и 18 типов в образце нет. Риск РШМ, связанный с этими типами, минимален на момент исследования. Не исключает инфицирование другими ВКР ВПЧ.
  • Обнаружено (с указанием типа и вирусной нагрузки):
    • Тип: Указывается конкретно ВПЧ 16, ВПЧ 18 или оба.
    • Вирусная нагрузка: ГЭ/10^5 клеток. Любое обнаружение ВПЧ 16 или 18 является показанием для углубленного обследования (кольпоскопия) у женщин, особенно старше 30 лет, независимо от результата цитологии (по современным рекомендациям ASCCP). Высокая нагрузка усиливает этот риск.
• ВПЧ 6 и/или 11:
  • Не обнаружено: ДНК ВПЧ 6 и 11 типов в образце нет. Кондиломы, вероятно, вызваны другими типами ВПЧ (если есть).
  • Обнаружено (с указанием типа и нагрузки): Подтверждает, что кондиломы (если есть) или носительство вызвано именно этими типами. Вирусная нагрузка может коррелировать с клинической картиной кондилом.
• Важно:
  • Этот тест не выявляет другие типы ВПЧ (31,33,45,51 и т.д.). Отрицательный результат на 16/18 не исключает инфицирование другими ВКР ВПЧ и связанный с ними риск.
  • Результат интерпретируется врачом в комплексе с анамнезом, осмотром, цитологией, данными о вакцинации.

8. Факторы, влияющие на результат
   Факторы аналогичны «ВПЧ КВАНТ-15» (см. статью 2):

• Нарушение забора/подготовки/транспортировки.
• Неадекватный материал (низкий КВМ).
• Стадия инфекции (низкая нагрузка).
• Локализация забора.
• Наличие ингибиторов ПЦР.
• Недавнее лечение.
• Методологические ограничения (только 4 типа).

Лаборатория Бойченко гарантирует точность и достоверность результатов благодаря современному оборудованию и высоким стандартам качества.

Список литературы (ВПЧ КВАНТ-4):

1. Wright T.C., Stoler M.H., Behrens C.M. et al. Primary cervical cancer screening with human papillomavirus: end of study results from the ATHENA study using HPV as the first-line screening test. Gynecol Oncol. 2015;136(2):189-197. (ATHENA — доказательство эффективности стратегии с генотипированием 16/18).
2. Castle P.E., Stoler M.H., Wright T.C. et al. Performance of carcinogenic human papillomavirus (HPV) testing and HPV16 or HPV18 genotyping for cervical cancer screening of women aged 25 years and older: a subanalysis of the ATHENA study. Lancet Oncol. 2011;12(9):880-890. (Роль генотипирования 16/18 в скрининге).
3. Schiffman M, Kinney W.K, Cheung L.C et al. Relative Performance of HPV and Cytology Components of Cotesting in Cervical Screening. J Natl Cancer Inst. 2018;110(5):501-508. (Сравнение стратегий).
4. Garland S.M, Steben M, Sings H.L et al. Natural history of genital warts: analysis of the placebo arm of 2 randomized phase III trials of a quadrivalent HPV (types 6, 11, 16, and 18) vaccine. J Infect Dis. 2009;199(6):805-814. (Роль 6/11 в кондиломах).
5. ДНК-Технология. Инструкция по применению набора реагентов для выявления и количественного определения ДНК вирусов папилломы человека (Human papillomavirus, HPV) 6, 11, 16, 18 типов методом ПЦР в режиме реального времени (ВПЧ КВАНТ-4). (Официальная инструкция).