ВПЧ высокий риск (ПЦР) (качественный)

Краткая История
Качественное ПЦР-тестирование на ДНК ВПЧ высокого канцерогенного риска (ВКР ВПЧ) стало революцией в скрининге рака шейки матки (РШМ). После доказательства Харальдом цур Хаузеном роли ВПЧ в РШМ, разработка ПЦР Кари Мюллисом (Нобелевская премия 1993 г.) открыла путь к высокочувствительной детекции вируса. Первые качественные ПЦР-тесты на ВКР ВПЧ появились в 1990-х годах (например, Hybrid Capture 2 — HC2). Они позволяли обнаружить группу 13-14 ВКР типов, но без определения конкретного генотипа и вирусной нагрузки, лишь давая ответ «обнаружено/не обнаружено». Несмотря на появление более продвинутых тестов (генотипирование, количественные), качественное определение группы ВКР ВПЧостается широко используемым, экономически эффективным методом первичного скрининга или триажирования, подтверждая наличие любогоиз опасных типов вируса.
Материал, используемый для исследования

Основной материал: Соскоб эпителиальных клеток из цервикального канала (у женщин) ИЛИ соскоб эпителиальных клеток из уретры (у мужчин) ИЛИ соскоб эпителиальных клеток из вульвы/вагины/перианальной области ИЛИ биоптат/мазок-отпечаток с очага.
Тип контейнера: Специальная стерильная щеточка (цитощетка) в жидкой транспортной среде (ThinPrep® или аналоги) ИЛИ сухая стерильная пробирка типа «Эппендорф» (только для соскобов/биоптатов при использовании методик, допускающих сухой материал, что бывает реже). Предпочтительна жидкая среда.
Важно: Использовать наборы для забора, соответствующие требованиям лаборатории и применяемому методу ПЦР.

Как подготовиться к анализу
Подготовка идентична подготовке к «ВПЧ КВАНТ-15» и «КВАНТ-4» (см. статьи 2 и 3):

Женщины: Не во время менструации. За 48 часов: исключить секс, вагинальные препараты, тампоны, спринцевания, УЗИ, кольпоскопию. За 24 часа: не использовать антисептики.
Мужчины/Женщины (уретра): За 48 часов исключить секс. За 1.5-2 часа не мочиться перед соскобом из уретры.
Общее: Не применять местные антисептики/антибиотики за 48-72 часа. Отмена системных противовирусных – по согласованию. После кольпоскопии – 48-72 часа. После лечения – минимум 4-6 недель.
Транспортировка: +2…+8°С, в течение времени, указанного лабораторией (1-3 дня для жидкой среды).

Описание метода

Метод: Качественная Полимеразная Цепная Реакция (ПЦР). Суть метода:
1. Экстракция ДНК: Выделение всей ДНК из образца.
2. Амплификация: Многократное копирование (умножение) специфического участка ДНК, характерного для группы ВКР ВПЧ. Используются:
  - Консенсусные праймеры: Распознают консервативные участки генома, общие для многих ВКР типов (часто мишенью служат гены L1 или E1). Не различают конкретные типы!
  - Типоспецифичные праймеры в мультиплексном формате: Набор праймеров, каждый из которых специфичен к своему типу ВКР ВПЧ (например, 16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,68). Позволяет определить, что какой-то из этих типов присутствует, но без идентификации конкретного (ответ все равно «обнаружено» для группы). Реже используется.
3. Детекция результата:
  - Электрофорез в агарозном геле: Визуализация полосы ДНК ожидаемого размера под УФ светом после окрашивания. Субъективный метод.
  - Флуоресцентная детекция в конце реакции (end-point PCR): Использование интеркалирующих красителей (SYBR Green) или флуоресцентных зондов (TaqMan), дающих сигнал при накоплении продукта. Более объективно.
4. Контроли: Обязательно используются контроли экстракции (КЭ) и амплификации (КВМ — контроль взятия материала, КПЦР — контроль ПЦР-реакции).
Определяемые типы: Зависит от тест-системы. Обычно включает 12-14 ВКР типов: 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68. Некоторые системы включают 66. Конкретный список уточняется в лаборатории.

Диагностика заболеваний
Качественный тест на ВКР ВПЧ применяется для:

Первичного скрининга РШМ: У женщин старше 25-30 лет, часто в сочетании с цитологией (co-testing) или как самостоятельный первичный тест (HPV primary screening).
Триажирования аномальных результатов цитологии (ASC-US): Определение необходимости кольпоскопии. Если ВКР ВПЧ обнаружен → кольпоскопия.
Контроля после лечения CIN (дисплазии): Оценка элиминации ВКР ВПЧ как маркера успешности лечения (цель — «не обнаружено»).
Обследования женщин с неясными гинекологическими симптомами.
Обследования половых партнеров пациентов с ВПЧ-ассоциированными заболеваниями.
Скрининга анального рака в группах высокого риска (МСМ, ВИЧ+).

Цель исследования
Основные цели назначения:

Скрининг на наличие инфекции ВКР ВПЧ: Ответ на вопрос: инфицирована ли пациентка каким-либо из высокоонкогенных типов ВПЧ?
Определение показаний к кольпоскопии: При аномальной цитологии (особенно ASC-US) или как часть первичного скрининга (если тест положительный).
Оценка риска развития РШМ: Сам факт обнаружения ВКР ВПЧ повышает риск по сравнению с отрицательным результатом.
Контроль излеченности после терапии по поводу CIN: Подтверждение эрадикации ВКР ВПЧ (отрицательный результат — хороший прогностический признак).

Что значат полученные результаты

Контроль взятия материала (КВМ) / Контроль экстракции (КЭ): Должны быть положительными. Неадекватный материал → результат недействителен.
Контроль ПЦР (КПЦР): Должен быть положительным, подтверждая адекватность реакционной смеси.
ДНК ВПЧ высокого канцерогенного риска:
- Не обнаружено: ДНК ВКР ВПЧ (типов, определяемых данной тест-системой) в образце не выявлено. Риск наличия CIN2+ в данный момент очень низок. Не исключает инфицирование в прошлом или заражение в будущем.
- Обнаружено: В образце выявлена ДНК одного или нескольких типов ВКР ВПЧ из группы, определяемой тест-системой. Это означает:
  - Наличие инфекции, вызванной опасными типами ВПЧ.
  - Повышенный риск развития дисплазии (CIN) и рака шейки матки (а также других аногенитальных раков).
  - Необходимость дальнейшего обследования или усиления наблюдения в зависимости от клинического контекста (возраст, цитология, анамнез):
    - При скрининге у женщин 25-65 лет: Если результат первичного скрининга или ко-тестинга → направление на цитологию (если не делалась) или кольпоскопию (по алгоритмам, например, ASCCP).
    - При ASC-US цитологии → прямое направление на кольпоскопию.
    - После лечения CIN → требует более частого контроля.
Важно:
- Положительный результат НЕ означает наличие рака или дисплазии. У большинства женщин инфекция транзиторная и разрешается самостоятельно.
- Положительный результат НЕ указывает на конкретный тип ВПЧ (16, 18 или другой) и на вирусную нагрузку.
- Отрицательный результат НЕ исключает полностью риск РШМ (редкие ВКР типы, не входящие в панель; ложноотрицательный результат; рак, не ассоциированный с ВПЧ).
- Интерпретация и дальнейшие шаги обязательно определяются врачом на основании комплексной оценки.

Факторы, влияющие на результат

Нарушение преаналитики: Неправильный забор, подготовка, транспортировка, хранение → ложноотрицательный результат.
Неадекватный материал: Мало клеток (низкий КВМ/КЭ).
Ингибиторы ПЦР: Присутствие в образце веществ, блокирующих реакцию → ложноотрицательный результат.
Стадия инфекции: Очень ранняя или латентная фаза с низким числом копий ДНК → ложноотрицательный.
Типы ВПЧ: Тест не выявляет типы, не входящие в его панель. Некоторые системы могут не детектировать тип 68 или 66.
Метод детекции: Электрофорез менее чувствителен и специфичен, чем флуоресцентная детекция.
Недавнее лечение: Может привести к ложноотрицательному результату.
Ложноположительный результат: Крайне редок при соблюдении всех процедур, возможен при контаминации в лаборатории.

Лаборатория Бойченко гарантирует точность и достоверность результатов благодаря современному оборудованию и высоким стандартам качества.

Список литературы (ВПЧ ВКР качественный):

Arbyn M, Ronco G, Anttila A et al. Evidence regarding human papillomavirus testing in secondary prevention of cervical cancer. Vaccine. 2012;30 Suppl 5:F88-99. (Обзор доказательной базы ВПЧ-тестирования).
Saslow D, Solomon D, Lawson H.W et al. American Cancer Society, American Society for Colposcopy and Cervical Pathology, and American Society for Clinical Pathology screening guidelines for the prevention and early detection of cervical cancer. CA Cancer J Clin. 2012;62(3):147-172. (Рекомендации по скринингу, включая ВПЧ-тестирование).
Meijer C.J., Berkhof J., Castle P.E. et al. Guidelines for human papillomavirus DNA test requirements for primary cervical cancer screening in women 30 years and older. Int J Cancer. 2009;124(3):516-520. (Требования к ВПЧ-тестам для скрининга).
Cuzick J, Clavel C, Petry K.U et al. Overview of the European and North American studies on HPV testing in primary cervical cancer screening. Int J Cancer. 2006;119(5):1095-1101. (Сравнение исследований).
Koliopoulos G, Nyaga V.N, Santesso N et al. Cytology versus HPV testing for cervical cancer screening in the general population. Cochrane Database Syst Rev. 2017;8(8):CD008587. (Кохрейновский обзор).