Тромбоциты (подсчет по методу Фонио)(назначается дополнительно к клиническому анализу крови)

Краткая История:
Метод подсчета тромбоцитов, разработанный швейцарским врачом Адольфом Фонио (Adolf Fonio) в начале XX века (1910-е годы), стал важным прорывом в гематологии. До его появления подсчет тромбоцитов (кровяных пластинок) под микроскопом в нативном мазке крови был крайне неточным из-за их малых размеров и склонности к агрегации. Фонио предложил простой и гениальный способ: использовать раствор сульфата магния (MgSO₄) в качестве антикоагулянта и красителя при приготовлении мазка. Магний предотвращает свертывание, а также вызывает частичное сморщивание (краевое стояние) эритроцитов, делая тромбоциты, окрашенные основными красителями (например, по Романовскому-Гимзе), более контрастными и легкими для идентификации и подсчета относительно эритроцитов. Этот метод, благодаря своей простоте, доступности и относительной точности, особенно при низких значениях, остается востребованным спустя столетие, дополняя автоматические гематологические анализаторы.

Материал, используемый для исследования:
Метод Фонио применяется к мазку периферической крови, который может быть приготовлен:

1. Непосредственно из капиллярной крови (из пальца): Кровь берется с использованием раствора сульфата магния (14% MgSO₄) в качестве антикоагулянта/красителя. Капля крови смешивается с каплей раствора MgSO₄ на предметном стекле, и из этой смеси делается мазок.
2. Из венозной крови, стабилизированной ЭДТА: В лаборатории к образцу крови в пробирке с ЭДТА добавляют каплю 14% раствора MgSO₄, тщательно перемешивают и затем готовят мазок. Это более предпочтительный способ, так как венозная кровь дает более стабильный результат, а наличие ЭДТА предотвращает свертывание до добавления MgSO₄.

Как подготовиться к анализу:
Поскольку подсчет по Фонио чаще всего является дополнительным тестом к общему клиническому анализу крови (ОАК), подготовка соответствует требованиям для сдачи ОАК:

1. Кровь сдается утром, натощак: После 8-12 часов ночного голодания. Можно пить чистую негазированную воду.
2. Накануне:
   • Избегать пищевых перегрузок (жирная, жареная пища).
   • Исключить алкоголь.
   • Избегать чрезмерных физических и эмоциональных нагрузок.
3. Лекарства: По возможности, согласовать с врачом временную отмену препаратов, влияющих на свертываемость крови и функцию тромбоцитов (аспирин, НПВС, антикоагулянты, некоторые антибиотики, диуретики) за несколько дней до анализа. Если отмена невозможна, обязательно сообщить врачу и лаборанту.
4. Процедура сдачи: Кровь берется из вены (предпочтительно) или из пальца. Для метода Фонио требуется мазок крови. Если анализ назначен специально, лаборант приготовит мазок с использованием раствора MgSO₄. Если метод Фонио назначается как уточняющий после автоматического ОАК, мазок может быть сделан из уже взятого образца венозной крови с ЭДТА.

Описание данного вещества:
Тромбоциты (кровяные пластинки) – это мелкие (2-4 мкм), безъядерные, плоские клеточные фрагменты, образующиеся в костном мозге из гигантских клеток-мегакариоцитов. Они играют ключевую роль в первичном гемостазе (остановке кровотечения):

1. Адгезия: Прилипают к поврежденному эндотелию сосуда.
2. Активация и Агрегация: Меняют форму, «распластываются» и склеиваются друг с другом, формируя первичную тромбоцитарную пробку.
3. Секреция: Выделяют биологически активные вещества (АДФ, тромбоксан А2, серотонин, факторы свертывания), которые усиливают спазм сосуда, привлекают новые тромбоциты и активируют плазменный каскад свертывания крови.
4. Участие в коагуляции: Предоставляют фосфолипидную поверхность для сборки комплексов факторов свертывания.

Диагностика заболеваний:
Подсчет тромбоцитов по Фонио назначается для диагностики и дифференциальной диагностики состояний, связанных с изменением количества тромбоцитов, выявленных в ОАК:

1. Тромбоцитопения: Снижение количества тромбоцитов (< 150×10⁹/л).
   • Подтверждение истинной тромбоцитопении: Метод Фонио – «золотой стандарт» для исключения псевдотромбоцитопении (ложного снижения из-за агрегации тромбоцитов в пробирке с ЭДТА, что часто ошибочно показывают автоматические анализаторы).
   • Оценка тяжести тромбоцитопении: Особенно при очень низких значениях, где автоматические счетчики менее точны.
   • Дифференциальная диагностика причин тромбоцитопении: Идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура (ИТП), лекарственная тромбоцитопения, гипоплазии костного мозга (апластическая анемия, лейкозы), ДВС-синдром, спленомегалия, наследственные тромбоцитопении.
2. Тромбоцитоз: Повышение количества тромбоцитов (> 450×10⁹/л).
   • Дифференциация реактивного тромбоцитоза (на фоне инфекции, воспаления, кровопотери, дефицита железа, после спленэктомии) от клонального (первичного) тромбоцитоза (миелопролиферативные заболевания – эссенциальная тромбоцитемия, истинная полицитемия).
   • Оценка морфологии тромбоцитов: При первичном тромбоцитозе часто наблюдаются гигантские, аномальные формы.
3. Контроль лечения при заболеваниях, сопровождающихся изменением числа тромбоцитов.

Цель исследования:
Основные цели подсчета тромбоцитов по методу Фонио:

1. Уточнение (верификация) количества тромбоцитов, полученного на автоматическом гематологическом анализаторе, особенно при:
   • Неожиданно низком результате (подозрение на псевдотромбоцитопению).
   • Очень низких (< 30×10⁹/л) или очень высоких (> 1000×10⁹/л) значениях, где автоматические счетчики могут давать погрешность.
   • Наличии предупреждающих флагов (flags) в результатах ОАК (например, «тромбоцитарные агрегаты», «тромбоцитопения?»).
2. Исключение псевдотромбоцитопении: Это наиболее частая причина назначения анализа. Антикоагулянт ЭДТА у некоторых людей (примерно 0.1-2% населения) вызывает агрегацию тромбоцитов in vitro, что автоматический анализатор воспринимает как крупные клетки или «мусор», занижая истинное количество тромбоцитов. Метод Фонио с использованием MgSO₄ или сразу на капиллярной крови позволяет избежать этой артефактной агрегации и получить достоверный результат.
3. Оценка морфологии тромбоцитов: При подсчете лаборант визуально оценивает размеры (микро-, макро-, гигантские тромбоциты), форму, гранулярность тромбоцитов, что может дать важную диагностическую информацию.
4. Подсчет тромбоцитов в ситуациях, когда автоматический анализ невозможен или ненадежен: Например, при выраженном лейкоцитозе, наличии холодовых агглютининов, фрагментации эритроцитов.

Что значат полученные результаты:
Результат представляется как количество тромбоцитов в 1 литре (или микролитре) крови (например, 180×10⁹/л). Интерпретирует результат врач (гематолог, терапевт, педиатр, хирург) в комплексе с клинической картиной и другими анализами (полным ОАК, коагулограммой, при необходимости – миелограммой).

• Норма: Обычно 150-450×10⁹/л (референсные значения могут незначительно отличаться в разных лабораториях).
• Тромбоцитопения (< 150×10⁹/л):
  • Легкая (100-150×10⁹/л): Часто бессимптомна, требует наблюдения и поиска причины.
  • Умеренная (50-100×10⁹/л): Риск кровоточивости при травмах или операциях.
  • Тяжелая (< 50×10⁹/л): Высокий риск спонтанных кровотечений (петехии, синяки, носовые, десневые кровотечения, меноррагии). Значения < 20×10⁹/л – угроза жизнеугрожающих кровотечений (внутричерепных, ЖКТ).
  • Подтверждение истинной тромбоцитопении методом Фонио исключает псевдотромбоцитопению.
• Тромбоцитоз (> 450×10⁹/л):
  • Умеренный (450-700×10⁹/л): Чаще реактивный (временный, на фоне других состояний).
  • Выраженный (> 700×10⁹/л): Может быть как реактивным, так и первичным (миелопролиферативное заболевание). Требует тщательной дифференциальной диагностики.
  • Оценка морфологии по Фонио (гигантские, аномальные формы) помогает заподозрить первичный тромбоцитоз.

Важно: Метод Фонио не только дает точное число, но и позволяет лаборанту отметить наличие агрегатов тромбоцитов в мазке (что характерно для псевдотромбоцитопении или некоторых патологических состояний) и описать морфологические особенности.

Факторы, влияющие на результат:

1. Качество мазка: Толстый, неравномерный, сломанный мазок затрудняет подсчет.
2. Техника подсчета: Опыт и тщательность лаборанта. Подсчет ведется в определенном количестве полей зрения микроскопа относительно числа эритроцитов.
3. Артефакты при приготовлении:
   • Неправильное соотношение крови и MgSO₄.
   • Плохое перемешивание.
   • Длительное время до приготовления мазка (для венозной крови с ЭДТА).
4. Агрегация тромбоцитов: Хотя метод Фонио минимизирует ЭДТА-зависимую агрегацию, агрегация может происходить и in vivo при некоторых заболеваниях или in vitro из-за технических ошибок.
5. Наличие гигантских тромбоцитов: Они могут быть ошибочно приняты за мелкие лимфоциты или моноциты автоматическим анализатором, но правильно идентифицируются при подсчете по Фонио.
6. Гемолиз образца крови.
7. Физиологические колебания: Количество тромбоцитов может меняться в течение суток, после физической нагрузки, при стрессе, у женщин во время менструации (небольшое снижение).

Лаборатория Бойченко гарантирует точность и достоверность результатов благодаря современному оборудованию и высоким стандартам качества.

Литература:

1. Fonio A. (1912). Über ein neues Verfahren der Blutplättchenzählung. Jahrbuch für Kinderheilkunde und physische Erziehung, 75, 375-384. (Оригинальная работа Фонио, хотя историческая).
2. International Council for Standardization in Haematology (ICSH). (2001). ICSH recommendations for ethylenediamine tetraacetic acid anticoagulation of blood for blood cell counting and sizing. International Journal of Laboratory Hematology, 23(6), 345-350. (Упоминает проблему ЭДТА-зависимой псевдотромбоцитопении).
3. Harrison, P., & Ault, K. A. (2001). Platelet counting. In Platelets (pp. 349-361). Academic Press. (Обзор методов подсчета, включая Фонио).
4. Lippi, G., & Plebani, M. (2012). EDTA-dependent pseudothrombocytopenia: further insights and recommendations for prevention of a clinically threatening artifact. Clinical Chemistry and Laboratory Medicine (CCLM), 50(8), 1281-1285.
5. Bain, B. J., Bates, I., & Laffan, M. A. (Eds.). (2017). Dacie and Lewis practical haematology (12th ed.). Elsevier. (Классическое руководство по гематологии с подробным описанием метода Фонио).