Архивы: Анализ

Краткая История:
Генетический маркер HLA-B27 был открыт в 1973 году в ходе исследований, связанных с анкилозирующим спондилитом (болезнью Бехтерева). Ученые обнаружили, что этот специфический вариант гена HLA-B (человеческого лейкоцитарного антигена B) чрезвычайно часто встречается у пациентов с этим заболеванием по сравнению с общей популяцией. Последующие исследования подтвердили его сильную ассоциацию с целой группой воспалительных заболеваний суставов и позвоночника, позже названных серонегативными спондилоартритами (ССА). Определение HLA-B27 стало важнейшим инструментом в диагностике и оценке риска развития этих заболеваний, хотя его присутствие не является абсолютным гарантом болезни, а отсутствие – полной страховкой. Метод ПЦР (полимеразная цепная реакция) произвел революцию в детекции HLA-B27, сделав анализ высокоточным, быстрым и доступным.

Материал, используемый для исследования:

• Основной материал: Венозная кровь (цельная кровь с антикоагулянтом ЭДТА).
• Альтернативный материал (в некоторых лабораториях): Буккальный эпителий (соскоб со слизистой оболочки внутренней поверхности щеки).

Как подготовиться к анализу:
Подготовка к анализу на HLA-B27 методом ПЦР минимальна:

1. Специальной диеты не требуется. Можно питаться как обычно.
2. Рекомендуется сдавать кровь утром, натощак (после 8-12 часов ночного голодания). Допускается сдача крови днем, не ранее, чем через 4 часа после легкого приема пищи.
3. Питьевой режим: Воду пить можно (негазированную, несладкую).
4. Физические и эмоциональные нагрузки: За 30 минут до сдачи крови следует избегать физического перенапряжения (бег, подъем по лестнице), эмоционального возбуждения. Рекомендуется спокойно посидеть.
5. Лекарственные препараты: Обычно не влияют на результат генетического теста. Однако ОБЯЗАТЕЛЬНО сообщите врачу, направляющему на анализ, обо всех принимаемых лекарствах. В редких случаях иммуносупрессивная терапия высокой интенсивности теоретически может влиять на экспрессию генов, но на сам генетический код – нет.
6. Алкоголь и курение: Исключить за 24 часа до исследования.
7. Если берется буккальный соскоб: Не есть, не пить, не жевать жвачку, не курить и не чистить зубы минимум за 1 час до забора материала.

Описание данного вещества (HLA-B27):
HLA-B27 – это не вещество, а специфический аллель (вариант) гена HLA-B, расположенного на 6-й хромосоме человека. Гены HLA (Human Leukocyte Antigens) кодируют белки главного комплекса гистосовместимости (МНС) I и II классов. Эти белки играют ключевую роль в работе иммунной системы:

• Белки МНС I класса (к которым относится HLA-B) присутствуют на поверхности почти всех ядросодержащих клеток организма.
• Их основная функция – презентация пептидов (фрагментов белков) изнутри клетки цитотоксическим T-лимфоцитам (Т-киллерам).
• Т-киллеры распознают эти пептиды. Если пептид «чужой» (например, вирусный), они уничтожают инфицированную клетку. Если пептид «свой» – клетка остается нетронутой.

Считается, что аллель HLA-B27 кодирует белок, который может неправильно презентировать собственные пептиды или пептиды бактерий (особенно кишечных и урогенитальных), провоцируя аномальный аутоиммунный ответ, ведущий к хроническому воспалению в суставах, энтезисах (местах прикрепления связок и сухожилий к костям) и других тканях, что характерно для ССА.

Диагностика заболеваний:
Анализ на HLA-B27 является вспомогательным диагностическим тестом и используется в комплексе с клинической картиной, данными осмотра, визуализации (рентген, МРТ) и другими лабораторными исследованиями (например, СОЭ, С-реактивный белок, ревматоидный фактор – который при ССА обычно отрицательный, отсюда и название «серонегативные») для диагностики и дифференциальной диагностики группы серонегативных спондилоартритов (ССА), включающих:

• Анкилозирующий спондилит (болезнь Бехтерева)
• Реактивные артриты (включая синдром Рейтера)
• Псориатический артрит
• Артриты, ассоциированные с воспалительными заболеваниями кишечника (болезнь Крона, язвенный колит)
• Недифференцированный спондилоартрит
• Острый передний увеит (ирит)
• Ювенильный спондилоартрит

Цель исследования:

1. Подтверждение/Исключение диагноза ССА: Помощь в установлении диагноза при наличии характерных клинических симптомов (хроническая боль и скованность в спине воспалительного характера, боль в периферических суставах, энтезиты, увеит и др.), особенно при неясной или атипичной картине.
2. Дифференциальная диагностика: Различение ССА от других заболеваний суставов (ревматоидный артрит, остеоартроз, инфекционные артриты), которые имеют иные паттерны поражения и не ассоциированы с HLA-B27.
3. Оценка прогноза: У пациентов с ранними симптомами или недифференцированным артритом положительный HLA-B27 может указывать на более высокий риск развития классического анкилозирующего спондилита.
4. Скрининг родственников: У родственников первой степени родства больных анкилозирующим спондилитом положительный HLA-B27 указывает на повышенный (но не 100%) риск развития заболевания.
5. Объяснение этиологии увеита: При рецидивирующем остром переднем увеите выявление HLA-B27 подтверждает его вероятную связь со спондилоартритом.

Что значат полученные результаты:

• HLA-B27 ОБНАРУЖЕН (положительный результат):
  • Указывает на наличие аллеля HLA-B27 в геноме человека.
  • Не означает, что человек обязательно болен или заболеет ССА. Распространенность HLA-B27 в популяции составляет 5-10% (зависит от этнической принадлежности), в то время как распространенность ССА гораздо ниже.
  • Значительно повышает риск развития ССА (особенно анкилозирующего спондилита и связанных с ним артритов). Риск развития анкилозирующего спондилита у носителя HLA-B27 примерно в 50-100 раз выше, чем у человека без этого аллеля.
  • При наличии клинических симптомов, соответствующих ССА, положительный HLA-B27 является важным аргументом в пользу этого диагноза.
  • Может ассоциироваться с более тяжелым течением некоторых ССА.
• HLA-B27 НЕ ОБНАРУЖЕН (отрицательный результат):
  • Указывает на отсутствие аллеля HLA-B27 в исследуемом образце ДНК.
  • Значительно снижает вероятность диагноза анкилозирующего спондилита или других классических ССА, но не исключает его полностью. Существует понятие «HLA-B27-негативный спондилоартрит».
  • Не исключает другие формы артрита или иные причины имеющихся симптомов.

Факторы, влияющие на результат:

1. Качество образца:
   • Кровь: Гемолиз (разрушение эритроцитов), недостаточный объем крови, неправильный антикоагулянт, неправильное хранение или транспортировка могут сделать образец непригодным для выделения ДНК.
   • Буккальный соскоб: Недостаточное количество клеток эпителия, загрязнение пищей, напитками или зубной пастой, неправильная техника забора.
2. Технические ошибки лаборатории: Хотя ПЦР высокоточный метод, ошибки на этапах выделения ДНК, постановки реакции, амплификации или детекции продукта теоретически возможны (крайне редко при соблюдении стандартов).
3. Очень редкие генетические вариации: Существует множество субтипов HLA-B27 (более 150), подавляющее большинство из которых ассоциированы с болезнью. Однако некоторые крайне редкие субтипы могут не определяться стандартными ПЦР-системами или не иметь ассоциации с заболеванием.
4. Контаминация: Загрязнение образца ДНК другого человека или ампликонами (продуктами ПЦР) из предыдущих реакций может дать ложноположительный результат. Строгие меры предотвращения контаминации в лаборатории критически важны.
5. Химеризм: Состояние, при котором в организме присутствуют клетки с разным генетическим материалом (например, после трансплантации костного мозга или переливания крови). Может дать ложноположительный или ложноотрицательный результат в зависимости от типа химеризма и времени, прошедшего после процедуры.

Заключение:
Анализ на HLA-B27 методом ПЦР – высокоинформативный генетический тест, играющий ключевую роль в диагностике и оценке риска серонегативных спондилоартритов. Интерпретация результата всегда должна проводиться врачом (ревматологом, офтальмологом, терапевтом) исключительно в контексте клинической картины пациента и данных других исследований. Положительный результат – не приговор, а важный ориентир для диагностики и наблюдения. Отрицательный результат существенно снижает вероятность классического ССА, но не исключает диагноз полностью при наличии убедительных клинических признаков.

Лаборатория Бойченко гарантирует точность и достоверность результатов благодаря современному оборудованию и высоким стандартам качества.

Список литературы (HLA-B27):

1. Ревматология. Национальное руководство / Под ред. Е.Л. Насонова, В.А. Насоновой. — М.: ГЭОТАР-Медиа, 2021. — Глава 4. «Спондилоартриты».
2. Клинические рекомендации «Анкилозирующий спондилит (болезнь Бехтерева)». Ассоциация ревматологов России, 2023.
3. Практическое руководство по лабораторной диагностике аутоиммунных заболеваний / Под ред. Н.А. Мухина. — М.: Литтерра, 2019. — Глава 7. «Генетические маркеры в ревматологии».
4. Khan, M. A. (2002). Update on spondyloarthropathies. Annals of Internal Medicine, *136*(12), 896–907. (Обзорная статья, описывающая роль HLA-B27).
5. Brown, M. A., & Wordsworth, B. P. (2017). Genetics in ankylosing spondylitis – current state of the art and translation into clinical outcomes. Best Practice & Research Clinical Rheumatology, *31*(6), 763-776. (Современные данные о генетике, включая HLA-B27).

Краткая История:
Лактазная недостаточность (ЛН) – неспособность переваривать молочный сахар лактозу – известна давно, но ее генетическая природа стала понятна относительно недавно. У большинства млекопитающих активность фермента лактазы, расщепляющей лактозу, снижается после прекращения молочного вскармливания. Однако у части человеческой популяции, преимущественно в регионах с давней историей молочного животноводства, возникла и закрепилась генетическая мутация (полиморфизм), обеспечивающая сохранение высокой активности лактазы во взрослом возрасте (лактазная персистенция). В конце XX века ученые идентифицировали ключевой однонуклеотидный полиморфизм (SNP) C/T(-13910) в регуляторной области гена MCM6, расположенного рядом с геном лактазы (LCT) на 2-й хросомосоме. Генотип СС(-13910) ассоциирован с первичной взрослой гиполактазией, а генотипы CT(-13910) и TT(-13910) – с лактазной персистенцией. Разработка ПЦР-методов позволила надежно и быстро определять этот полиморфизм, ставший основным генетическим маркером первичной ЛН у взрослых.

Материал, используемый для исследования:

• Основной материал: Буккальный эпителий (соскоб клеток со слизистой оболочки внутренней поверхности щеки). Собирается специальной стерильной цитощеткой или зондом.

Как подготовиться к анализу:
Подготовка к забору буккального эпителия проста и неинвазивна:

1. Не есть, не пить, не жевать жвачку, не курить минимум за 1 час до процедуры. Это необходимо для предотвращения загрязнения образца остатками пищи, напитков или слюны.
2. Не чистить зубы и не использовать ополаскиватель для рта минимум за 1 час до забора материала. Компоненты зубной пасты и ополаскивателей могут ингибировать ПЦР.
3. Перед процедурой: Можно прополоскать рот чистой водой за 10-15 минут до забора (если не было приема пищи), но тщательно сплюнуть воду. Непосредственно перед забором материал должен быть сухим.
4. Забор материала: Медицинский работник аккуратно проведет цитощеткой или зондом по внутренней поверхности щеки несколько раз, слегка надавливая, чтобы собрать достаточное количество слущенных эпителиальных клеток. Процедура безболезненна, может вызвать легкий дискомфорт или рвотный рефлекс у чувствительных людей.
5. После забора: Щетка/зонд помещается в специальный контейнер со стабилизирующим раствором для транспортировки в лабораторию. Непосредственно после забора можно есть и пить.

Описание данного вещества (Ген LCT / Полиморфизм C/T(-13910)):

• Ген LCT: Расположен на длинном плече 2-й хромосомы (2q21). Кодирует фермент лактазу-флоризингидролазу, который вырабатывается в энтероцитах (клетках слизистой) тонкого кишечника. Его основная функция – расщепление дисахарида лактозы (молочного сахара) на моносахариды глюкозу и галактозу, которые затем всасываются в кровь.
• Полиморфизм C/T(-13910): Это замена одного нуклеотида (цитозина (С) на тимин (Т)) в позиции -13910 относительно стартового сайта транскрипции гена LCT. На самом деле этот полиморфизм находится не в самом гене LCT, а в интроне 13 соседнего гена MCM6, но он играет ключевую роль в регуляции экспрессии гена LCT.
  • Аллель С(-13910): Ассоциирован со снижением экспрессии гена LCT после периода грудного вскармливания. У гомозигот (СС) активность лактазы во взрослом возрасте очень низкая (первичная лактазная недостаточность).
  • Аллель Т(-13910): Ассоциирован с сохранением высокой экспрессии гена LCT во взрослом возрасте (лактазная персистенция). Гетерозиготы (СТ) обычно сохраняют достаточную активность лактазы для переваривания умеренного количества лактозы.

Диагностика заболеваний:
Генетический тест на полиморфизм C/T(-13910) гена LCT методом ПЦР по буккальному эпителию используется для диагностики первичной (врожденной, взрослого типа) лактазной недостаточности. Это состояние обусловлено генетически запрограммированным снижением активности лактазы, которое обычно проявляется в подростковом или взрослом возрасте. Тест не диагностирует:

• Вторичную лактазную недостаточность: Возникает из-за повреждения слизистой тонкого кишечника (энтероцитов) при различных заболеваниях (кишечные инфекции, целиакия, болезнь Крона, лучевой энтерит, прием некоторых лекарств). Активность лактазы снижается временно и обычно восстанавливается после лечения основного заболевания.
• Врожденную лактазную недостаточность: Крайне редкое аутосомно-рецессивное заболевание, проявляющееся с рождения тяжелой диареей при кормлении грудным молоком. Вызвано мутациями в самом гене LCT, а не полиморфизмом C/T(-13910).

Цель исследования:

1. Подтверждение генетической причины непереносимости лактозы: Установить, являются ли симптомы непереносимости молочных продуктов (вздутие, метеоризм, диарея, боли в животе после употребления молока) следствием первичной (наследственной) лактазной недостаточности.
2. Дифференциальная диагностика: Отличить первичную ЛН от вторичной ЛН и от других состояний, вызывающих схожие симптомы (синдром раздраженного кишечника, пищевые аллергии, целиакия).
3. Определение генетической предрасположенности: Выявить носительство аллеля, связанного с персистенцией лактазы или гиполактазией, даже при отсутствии выраженных симптомов.
4. Индивидуализация диеты: Получение объективного генетического обоснования для рекомендаций по ограничению или исключению лактозосодержащих продуктов из рациона.
5. Прогноз для детей: При наличии семейного анамнеза ЛН определение генотипа у ребенка может помочь прогнозировать развитие непереносимости в будущем и корректировать питание.

Что значат полученные результаты:

• Генотип С/С (гомозигота по аллелю С):
  • Указывает на первичную лактазную недостаточность (взрослого типа).
  • Активность фермента лактазы во взрослом возрасте очень низкая.
  • Высокая вероятность развития симптомов непереносимости лактозы при употреблении молока и молочных продуктов, содержащих лактозу.
  • Рекомендовано соблюдение безлактозной или низколактозной диеты.
• Генотип С/Т (гетерозигота):
  • Указывает на частичную лактазную недостаточность.
  • Активность лактазы снижена, но обычно достаточна для переваривания небольших или умеренных количеств лактозы.
  • Симптомы непереносимости могут возникать при употреблении больших порций молочных продуктов или проявляться не всегда/не у всех.
  • Рекомендуется индивидуальный подбор диеты с ограничением лактозы по переносимости. Часто допустимы кисломолочные продукты (йогурт, кефир, сыры), где часть лактозы уже расщеплена бактериями.
• Генотип Т/Т (гомозигота по аллелю Т):
  • Указывает на лактазную персистенцию.
  • Активность фермента лактазы во взрослом возрасте сохраняется высокой.
  • Отсутствует генетическая предрасположенность к первичной лактазной недостаточности. Симптомы непереносимости лактозы при этом генотипе маловероятны и, если присутствуют, требуют поиска других причин (вторичная ЛН, СРК, аллергия и др.).

Факторы, влияющие на результат:

1. Качество образца буккального эпителия:
   • Недостаточное количество клеток: Если соскоб проведен некачественно и собрано мало клеток, выделение ДНК может быть неудачным.
   • Загрязнение: Прием пищи, напитков, жевание жвачки, курение, чистка зубов менее чем за час до забора приводят к загрязнению образца, что может помешать выделению ДНК или ингибировать ПЦР.
   • Неправильное хранение/транспортировка: Отсутствие стабилизирующего раствора, длительная транспортировка при неподходящей температуре может привести к деградации ДНК.
2. Технические ошибки ПЦР: Хотя метод надежен, ошибки на этапах выделения ДНК, подготовки реакционной смеси, амплификации или детекции теоретически возможны (очень редко при соблюдении протоколов).
3. Редкие генетические варианты: Стандартный тест на C/T(-13910) выявляет основной полиморфизм, ответственный за ЛН у большинства европеоидных популяций. Однако существуют другие, менее распространенные полиморфизмы (например, G/A(-22018) или полиморфизмы у представителей африканских или коренных американских популяций), которые также влияют на активность лактазы, но данным конкретным тестом не определяются.
4. Химеризм/Мозаицизм: Присутствие в организме клеток с разным генетическим материалом (например, после трансплантации костного мозга) может дать ложный результат при исследовании буккального эпителия, если донор и реципиент имеют разные генотипы по LCT.
5. Эпигенетические факторы: В редких случаях экспрессия гена LCT может модулироваться факторами, не затрагивающими саму последовательность ДНК, но влияющими на ее «считываемость». ПЦР на полиморфизм этого не выявляет.

Заключение:
Генетический тест на лактазную недостаточность по буккальному эпителию – это удобный, неинвазивный и высокоинформативный метод подтверждения первичной (наследственной) непереносимости лактозы. Его результаты помогают врачу (гастроэнтерологу, терапевту, диетологу) установить причину симптомов, дифференцировать первичную ЛН от вторичной и дать персонализированные рекомендации по питанию. Понимание своего генотипа позволяет осознанно управлять диетой и улучшать качество жизни.

Лаборатория Бойченко гарантирует точность и достоверность результатов благодаря современному оборудованию и высоким стандартам качества.

Список литературы (Лактазная недостаточность, буккальный эпителий):

1. Шульпекова Ю.О. Непереносимость лактозы: клиника, диагностика, подходы к лечению // РМЖ. Гастроэнтерология. – 2019. – Т. 3. – № 1(I). – С. 11-17.
2. Хавкин А.И., Комарова О.Н. Лактазная недостаточность у детей и взрослых // Лечащий врач. – 2017. – № 5. – С. 26-30.
3. Клинические рекомендации «Синдром мальабсорбции лактозы у взрослых». Научное общество гастроэнтерологов России, 2020.
4. Enattah, N. S., Sahi, T., Savilahti, E., Terwilliger, J. D., Peltonen, L., & Järvelä, I. (2002). Identification of a variant associated with adult-type hypolactasia. Nature Genetics, *30*(2), 233–237. (Ключевая статья об открытии полиморфизма).
5. Mattar, R., de Campos Mazo, D. F., & Carrilho, F. J. (2012). Lactose intolerance: diagnosis, genetic, and clinical factors. Clinical and Experimental Gastroenterology, *5*, 113–121. (Обзор методов диагностики).

Краткая История:
История понимания лактазной недостаточности и открытия ключевого генетического маркера C/T(-13910) описана в предыдущей статье (по буккальному эпителию). Определение этого полиморфизма методом ПЦР стало стандартом диагностики первичной ЛН. Изначально и наиболее часто для генетических тестов использовалась венозная кровь как источник ДНК. Кровь остается «золотым стандартом» для многих ДНК-тестов благодаря высокой концентрации и качеству выделяемой ДНК. Развитие технологий позволило использовать и альтернативные материалы, такие как буккальный эпителий, но анализ по крови сохраняет свою актуальность и высокую точность для диагностики лактазной недостаточности.

Материал, используемый для исследования:

• Основной материал: Венозная кровь (цельная кровь, стабилизированная антикоагулянтом ЭДТА (K2 или K3 ЭДТА) в специальной вакуумной пробирке (типа «Vacuette EDTA»).

Как подготовиться к анализу:
Подготовка к сдаче крови на генетический анализ стандартна:

1. Сдавать кровь рекомендуется утром, натощак. Период голодания должен составлять 8-12 часов (обычно ночной сон). В это время можно пить только чистую негазированную воду.
2. Накануне исследования: Придерживаться обычного рациона, но избегать переедания и употребления очень жирной пищи. Исключить алкогольные напитки.
3. Питьевой режим перед сдачей: Утром в день анализа можно пить воду (негазированную, несладкую).
4. Физические и эмоциональные нагрузки: За 30 минут до сдачи крови необходимо исключить физическое напряжение (бег, быстрый подъем по лестнице), эмоциональное возбуждение. Рекомендуется спокойно посидеть в процедурном кабинете.
5. Лекарственные препараты: Обычно не влияют на результат генетического теста (так как не меняют структуру ДНК). Однако обязательно сообщите врачу, направившему вас на исследование, и процедурной медсестре о всех принимаемых лекарствах.
6. Курение: Не курить минимум за 1 час до исследования.

Описание данного вещества (Ген LCT / Полиморфизм C/T(-13910)):
(См. подробное описание в статье по буккальному эпителию — раздел идентичен, так как исследуется тот же самый ген и полиморфизм).
Ключевой момент: Анализ выявляет однонуклеотидный полиморфизм (SNP) C/T в позиции -13910 относительно гена лактазы (LCT). Генотип СС ассоциирован с первичной лактазной недостаточностью взрослого типа, СТ — с частичной недостаточностью, ТТ — с лактазной персистенцией.

Диагностика заболеваний:
(См. раздел в статье по буккальному эпителию — назначение теста идентично).
Тест диагностирует первичную (врожденную, взрослого типа) лактазную недостаточность путем выявления генетической предрасположенности. Не диагностирует вторичную ЛН или врожденную алактазию.

Цель исследования:
(См. раздел в статье по буккальному эпителию — цели идентичны):
Подтверждение генетической причины ЛН, дифференциальная диагностика, определение предрасположенности, персонализация диеты, прогноз.

Что значат полученные результаты:
(Интерпретация генотипов СС, СТ, ТТ полностью идентична интерпретации, описанной в статье по анализу буккального эпителия).

Факторы, влияющие на результат:

1. Качество образца крови:
   • Гемолиз: Сильное разрушение эритроцитов при заборе или транспортировке делает образец непригодным для выделения ДНК.
   • Недостаточный объем: Мало крови — мало лейкоцитов — мало ДНК.
   • Неправильный антикоагулянт: Использование пробирок не с ЭДТА (например, с цитратом или гепарином) может помешать выделению ДНК или ингибировать ПЦР.
   • Неправильное хранение/транспортировка: Кровь должна транспортироваться и храниться при рекомендованной температуре (обычно +2…+8°C) и в течение определенного срока до выделения ДНК. Замораживание цельной крови с ЭДТА нежелательно.
2. Технические ошибки ПЦР: Аналогичны рискам при любом ПЦР-анализе (ошибки на преаналитическом или аналитическом этапе), но риск минимален в аккредитованных лабораториях.
3. Редкие генетические варианты: Тест специфичен к полиморфизму C/T(-13910). Он не выявляет другие, менее распространенные полиморфизмы, влияющие на активность лактазы в других популяциях.
4. Химеризм/Мозаицизм: После трансплантации костного мозга или стволовых клеток кровь пациента содержит лейкоциты донора. Если донор и реципиент имеют разные генотипы по LCT, результат анализа крови будет отражать генотип донора, а не реципиента. В этом случае анализ крови не пригоден для определения собственного генотипа пациента. Буккальный эпителий или другой тканеспецифичный материал будут более надежны. После переливания крови лейкоциты донора также временно присутствуют в кровотоке реципиента, что может исказить результат, если переливание было недавним. Рекомендуется сдавать кровь не ранее, чем через 1 месяц после последнего переливания.
5. Очень высокий лейкоцитоз или лейкопения: Крайние значения количества лейкоцитов в крови теоретически могут затруднить выделение достаточного количества ДНК, но на практике это редко является проблемой для современных методов.

Заключение:
Анализ крови на лактазную недостаточность методом ПЦР – это высоконадежный и точный метод диагностики первичной ЛН. Он особенно важен в случаях, когда использование буккального эпителия затруднено или когда есть подозрение на химеризм (после трансплантаций). Результат предоставляет объективные генетические данные для понимания причины симптомов непереносимости молочных продуктов и формирования индивидуальной диетической стратегии.

Лаборатория Бойченко гарантирует точность и достоверность результатов благодаря современному оборудованию и высоким стандартам качества.

Список литературы (Лактазная недостаточность, кровь):

1. Циммерман Я.С. Гастроэнтерология: Руководство. — М.: ГЭОТАР-Медиа, 2020. — Гл. «Синдромы мальдигестии и мальабсорбции».
2. Ивашкин В.Т., Шелыгин Ю.А. (ред.) Рациональная фармакотерапия заболеваний органов пищеварения. — М.: Литтерра, 2011. — Раздел о ферментной недостаточности.
3. Heyman, M. B. (2006). Lactose intolerance in infants, children, and adolescents. Pediatrics, *118*(3), 1279–1286. (Рассматривает диагностику, включая генетические тесты).
4. Swallow, D. M. (2003). Genetics of lactase persistence and lactose intolerance. Annual Review of Genetics, *37*(1), 197–219. (Фундаментальный обзор генетики ЛН).
5. Misselwitz, B., Pohl, D., Frühauf, H., Fried, M., Vavricka, S. R., & Fox, M. (2013). Lactose malabsorption and intolerance: pathogenesis, diagnosis and treatment. United European Gastroenterology Journal, *1*(3), 151–159. (Обзор современных подходов к диагностике и лечению).

Краткая История:
Фолаты (витамин B9) и связанные с ними метаболические пути (фолатный цикл) критически важны для синтеза ДНК, репарации, метилирования и других фундаментальных клеточных процессов. В 1960-70-х годах было установлено, что дефекты метаболизма фолатов, в частности повышение уровня гомоцистеина, ассоциированы с повышенным риском сердечно-сосудистых заболеваний, дефектов нервной трубки у плода и других осложнений беременности. В 1980-90-х годах были идентифицированы ключевые ферменты фолатного цикла: метилентетрагидрофолатредуктаза (MTHFR), метионинсинтаза (MTR), метионинсинтаза редуктаза (MTRR). Были открыты частые полиморфизмы в генах, кодирующих эти ферменты (особенно C677T и A1298C в гене MTHFR), которые влияют на их активность. Развитие ПЦР-технологий позволило быстро и точно определять эти генетические варианты у пациентов, открыв путь к персонализированной оценке риска и коррекции дефицита фолатов.

Материал, используемый для исследования:

• Основной материал: Венозная кровь (цельная кровь с антикоагулянтом ЭДТА (K2 или K3 ЭДТА) в вакуумной пробирке).
• Альтернативный материал (в некоторых лабораториях): Буккальный эпителий (соскоб со щеки).

Как подготовиться к анализу:
Подготовка аналогична подготовке к сдаче крови на генетический тест (как в анализе на ЛН по крови):

1. Сдавать кровь рекомендуется утром, натощак (8-12 часов голодания). Пить воду можно.
2. Накануне: Избегать пищевых перегрузок, исключить алкоголь.
3. Физический и эмоциональный покой: За 30 минут до сдачи крови избегать нагрузок и стресса.
4. Лекарственные препараты: Крайне важно! Многие препараты влияют на уровень гомоцистеина и фолатов в крови, но не меняют ДНК. Однако некоторые препараты (например, метотрексат, противосудорожные) могут влиять на метаболизм фолатов. Обязательно сообщите врачу обо всех принимаемых лекарствах и БАДах. Отмена препаратов обычно не требуется, но информация важна для интерпретации.
5. Курение: Не курить минимум за 1 час до исследования (курение повышает гомоцистеин).
6. Для буккального эпителия: Требования аналогичны тесту на ЛН (не есть, не пить, не чистить зубы за 1 час до забора).

Описание данного вещества (Фолатный цикл и ключевые гены):
Фолатный цикл – это сложная сеть биохимических реакций, в которых фолиевая кислота (витамин B9) и ее активные формы (тетрагидрофолаты, THF) участвуют:

1. Синтез ДНК/РНК: Обеспечение переноса одноуглеродных групп для синтеза пуринов и пиримидинов.
2. Метилирование: Перенос метильной группы (-CH3) на различные молекулы. Ключевая реакция — реметилирование гомоцистеина в метионин, катализируемое ферментом метионинсинтазой (MTR). Эта реакция требует витамина B12 (кобаламина) в качестве кофактора. Образованный метионин превращается в S-аденозилметионин (SAM) — универсальный донор метильных групп для метилирования ДНК, РНК, белков, липидов, нейротрансмиттеров.
3. Метаболизм аминокислот: Конверсия гомоцистеина в метионин и в цистатионин (через транссульфурацию).

Ключевые исследуемые гены и полиморфизмы:

• MTHFR (5,10-метилентетрагидрофолатредуктаза):
  • Полиморфизм C677T (rs1801133): Замена C>T в позиции 677. Генотип ТТ приводит к термолабильному варианту фермента со сниженной активностью (до 30% от нормы). Это уменьшает конверсию 5,10-метилен-THF в 5-метил-THF – основную циркулирующую форму фолата и донора метильной группы для реметилирования гомоцистеина. Результат: повышение уровня гомоцистеина (ГЦ), снижение уровня фолатов и метионина.
  • Полиморфизм A1298C (rs1801131): Замена A>C в позиции 1298. Влияние на активность фермента менее выражено, чем у C677T. Генотип СС может умеренно снижать активность MTHFR. Наибольший эффект наблюдается при комбинации 677T и 1298C аллелей в транс-положении (на разных хромосомах).
• MTR (Метионин Синтаза, кодируется геном MTR):
  • Полиморфизм A2756G (rs1805087): Замена A>G в позиции 2756. Генотип GG (реже AG) ассоциирован со сниженной активностью фермента MTR. Это нарушает реметилирование гомоцистеина в метионин, приводя к накоплению гомоцистеина.
• MTRR (Метионин Синтаза Редуктаза, кодируется геном MTRR):
  • Полиморфизм A66G (rs1801394): Замена A>G в позиции 66. Генотип GG (реже AG) связан со сниженной активностью фермента MTRR. MTRR необходим для восстановления кобаламина (B12) в активную форму, которая требуется ферменту MTR. Снижение активности MTRR косвенно нарушает работу MTR и повышает уровень гомоцистеина, особенно при сопутствующем дефиците витамина B12.
• Другие гены: Иногда исследуют полиморфизмы в генах RFC1 (транспортер фолатов), TCN2 (транспортер витамина B12), CBS (цистатионин-бета-синтаза).

Диагностика заболеваний/Оценка риска:
Генетический тест «Фолатный цикл» не диагностирует конкретное заболевание, а оценивает генетическую предрасположенность к нарушениям метаболизма фолатов и гомоцистеина, что связано с повышенным риском:

1. Гипергомоцистеинемия: Повышенный уровень гомоцистеина в крови – независимый фактор риска атеросклероза, тромбозов, сердечно-сосудистых заболеваний (инфаркт миокарда, инсульт).
2. Осложнения беременности:
   • Дефекты нервной трубки у плода (анэнцефалия, spina bifida).
   • Невынашивание беременности (выкидыши, замершая беременность).
   • Преэклампсия, отслойка плаценты.
   • Задержка внутриутробного развития плода (ЗВУР).
3. Венозные тромбоэмболические осложнения (ТЭЛА, тромбоз глубоких вен).
4. Когнитивные нарушения, депрессия: Связь с нарушением метилирования в мозге.
5. Некоторые онкологические заболевания: Нарушение синтеза и репарации ДНК.
6. Макроцитарная анемия: Хотя чаще связана с дефицитом B12 или фолатов, генетические нарушения могут способствовать ее развитию или устойчивости к лечению.

Цель исследования:

1. Оценка индивидуального риска развития гипергомоцистеинемии и связанных с ней патологий (ССЗ, тромбозы, осложнения беременности).
2. Выявление причины гипергомоцистеинемии (особенно при нормальном или пограничном уровне витаминов B9/B12).
3. Планирование беременности:
   • Оценка риска дефектов нервной трубки и других осложнений.
   • Определение необходимости и оптимальных доз приема фолиевой кислоты и других витаминов (B6, B12) до зачатия и во время беременности. Носителям неблагоприятных генотипов часто требуются высокие дозы или активные формы фолатов.
4. Объяснение невынашивания беременности или неудач ЭКО.
5. Персонализация профилактики сердечно-сосудистых заболеваний и тромбозов.
6. Выбор тактики лечения при выявленной гипергомоцистеинемии (определение необходимых доз витаминов).
7. Дифференциальная диагностика анемий.

Что значат полученные результаты:
Результат представляет собой описание выявленных генотипов по каждому исследуемому полиморфизму (например, MTHFR C677T: CT; MTHFR A1298C: AA; MTR A2756G: AG; MTRR A66G: GG). Интерпретацию обязательно должен проводить врач (генетик, гематолог, акушер-гинеколог, кардиолог, терапевт), учитывая клиническую картину, анамнез, уровень гомоцистеина, витаминов B9 и B12 в крови.

• Наличие «рисковых» аллелей (677T, 1298C, 2756G, 66G):
  • Указывает на генетическую предрасположенность к снижению активности соответствующих ферментов фолатного цикла.
  • Повышает вероятность развития гипергомоцистеинемии, особенно при сочетании нескольких неблагоприятных аллелей или при сопутствующих факторах (дефицит витаминов B9, B6, B12 в пище; курение; болезни почек; прием некоторых лекарств; пожилой возраст; гипотиреоз).
  • Повышает риск ассоциированных патологий (ССЗ, тромбозы, осложнения беременности).
  • Требует внимания к уровню гомоцистеина и витаминов группы B. Часто необходимы дополнительные анализы (ГЦ, B9, B12).
  • Определяет необходимость превентивных мер: Назначение высоких доз фолиевой кислоты (4-5 мг/сут), активной формы фолата (метилфолат), витамина B12 (цианокобаламин, метилкобаламин), витамина B6 (пиридоксин) для коррекции потенциального метаболического дефекта и снижения ГЦ. Дозы и длительность приема определяет врач.
• Отсутствие «рисковых» аллелей (генотипы CC для MTHFR 677, AA для MTHFR 1298, AA для MTR 2756, AA для MTRR 66):
  • Генетическая предрасположенность к нарушениям фолатного цикла по данным исследуемым полиморфизмам отсутствует или минимальна.
  • Не исключает гипергомоцистеинемию по другим причинам (дефицит витаминов, болезни почек и др.).
  • Стандартные дозы фолиевой кислоты (400 мкг/сут) обычно достаточны при планировании беременности.

Факторы, влияющие на результат:

1. Качество образца ДНК: Те же факторы, что и для других ПЦР-тестов по крови или буккальному эпителию (гемолиз, недостаточный объем, загрязнение, неправильное хранение/транспортировка).
2. Технические ошибки ПЦР: Редкие ошибки на этапах анализа.
3. Ограниченный набор исследуемых полиморфизмов: Стандартные панели обычно включают MTHFR C677T, A1298C, MTR A2756G, MTRR A66G. Существуют другие, менее изученные или популяционно-специфичные полиморфизмы в этих и других генах фолатного цикла, которые могут влиять на метаболизм, но данным тестом не определяются.
4. Химеризм (после трансплантации костного мозга/стволовых клеток): Анализ крови будет отражать генотип донора. Буккальный эпителий более надежен для определения собственного генотипа реципиента.
5. Эпигенетика и факторы среды: Экспрессия генов фолатного цикла может регулироваться эпигенетически (метилирование ДНК, модификации гистонов). На метаболизм фолатов и гомоцистеина сильно влияют диета (поступление B9, B6, B12, метионина), образ жизни (курение, алкоголь), состояние здоровья (функция почек, щитовидной железы), прием лекарств. Генетический тест показывает предрасположенность, но не гарантирует развитие нарушений или их отсутствие. Сочетание генетики и среды определяет реальный риск.

Заключение:
Генетическое исследование полиморфизмов фолатного цикла – мощный инструмент персонализированной медицины. Оно позволяет выявить людей с повышенной потребностью в фолиевой кислоте и других витаминах группы B, спланировать эффективную профилактику серьезных осложнений (особенно при беременности), скорректировать терапию гипергомоцистеинемии и снизить риски сердечно-сосудистых и тромботических событий. Интерпретация результатов требует комплексного подхода и обязательной консультации специалиста.

Лаборатория Бойченко гарантирует точность и достоверность результатов благодаря современному оборудованию и высоким стандартам качества.

Список литературы (Фолатный цикл):

1. Громова О.А., Торшин И.Ю. Фолаты и полиморфизмы генов фолатного цикла. — М.: МЦНМО, 2012. (Специализированная монография).
2. Клинические рекомендации «Гипергомоцистеинемия». Национальное гематологическое общество, 2021 (или актуальный год).
3. Документация по ведению беременности (Приказы Минздрава РФ) — разделы о назначении фолиевой кислоты при планировании и во время беременности, особенно у групп риска.
4. Frosst, P., Blom, H. J., Milos, R., Goyette, P., Sheppard, C. A., Matthews, R. G., … & Rozen, R. (1995). A candidate genetic risk factor for vascular disease: a common mutation in methylenetetrahydrofolate reductase. Nature Genetics, *10*(1), 111-113. (Классическая статья о полиморфизме MTHFR C677T).
5. Bailey, L. B., & Berry, R. J. (2005). Folic acid supplementation and the occurrence of congenital heart defects, orofacial clefts, multiple births, and miscarriage. The American Journal of Clinical Nutrition, *81*(5), 1213S-1217S. (Обзор влияния фолатов на профилактику врожденных дефектов).