Архивы: Анализ

Краткая История
Открытие Trichomonas vaginalis принадлежит французскому анатому Альфреду Донне, впервые описавшему паразита в вагинальном секрете женщин в 1836 году. Однако его патогенная роль была установлена лишь в 1916 году Хёэгом. До эры молекулярной диагностики основными методами выявления были:

1. Нативная микроскопия (влажный мазок):Быстрый, но низкочувствительный (40-60%) метод, зависящий от времени доставки и опыта лаборанта.
2. Окрашенные мазки (по Романовскому-Гимзе):Позволяет увидеть характерную грушевидную форму и ядро, чувствительность 50-70%.
3. Культуральный метод (посев на среды):«Золотой стандарт» XX века (среда Diamond, InPouch TV). Чувствительность 80-95%, но требует 3-7 дней.

Революцию произвело внедрение ПЦР-диагностики в 1990-х. Метод обеспечил:

• Чувствительность 95-98% и специфичность >99%
• Выявление атипичных/малосимптомных форм
• Диагностику у мужчин (где другие методы малоэффективны)
• Одновременное выявление с  gonorrhoeaeи C. trachomatis в мультиплексных тестах

Материал, используемый для исследования

• У женщин:
  • Соскоб из заднего свода влагалища (оптимально)
  • Соскоб из цервикального канала
  • Соскоб из уретры
  • Первая порция утренней мочи
• У мужчин:
  • Соскоб из уретры
  • Первая порция утренней мочи (предпочтительнее соскоба)
  • Эякулят
  • Секрет простаты
• Альтернативные материалы:Ректальный соскоб (при анальных контактах), слюна (редко).

Как подготовиться к анализу
Критически важные правила:

Пациент	Подготовка	Запрещено
Женщины	· Сдача на 5-7 день цикла · Вечерний туалет без спринцевания · Утром НЕ подмываться	· Вагинальные свечи/тампоны за 72 ч · Половые акты за 48 ч · УЗИ/кольпоскопия за 48 ч · Менструация
Мужчины	· Не мочиться 3 ч до забора · Утром НЕ подмываться	· Уретральные инстилляции за 72 ч · Половые акты за 48 ч · Массаж простаты за 7 дней
Все	· Отмена антитрихомонадных препаратов (метронидазол, тинидазол) за 4 недели	· Прием антибиотиков широкого спектра за 2 недели

Описание данного вещества
Trichomonas vaginalis – жгутиковое простейшее класса Parabasalia.

• Морфология:Грушевидная форма (9×7 мкм), 4 жгутика спереди, ундулирующая мембрана (до 2/3 длины тела), аксостиль.
• Жизненный цикл:Только трофозоитная стадия (цисты не образует). Размножается продольным делением.
• Патогенность:
  • Адгезины (AP65, AP51, AP33) для прикрепления к эпителию
  • Цистеиновые протеиназы (разрушают IgA, IgG, компоненты комплемента)
  • Гемолизины и фактор хемотаксиса (привлекают нейтрофилы)
  • Поглощение бактерий (микоплазмы) и вирусов (ВИЧ) с усилением их патогенности
• Эпидемиология:
  • Исключительно антропонозная инфекция
  • Передается половым путем (контактно-бытовой путь маловероятен)
  • Инкубационный период: 4-28 дней

Диагностика заболеваний
Трихомониаз – самое распространенное невирусное ИППП (187 млн случаев ежегодно, ВОЗ). Проявления:

• У женщин (50% симптомны):
  • Обильные пенистые желто-зеленые выделения
  • Вульвовагинит с «клубничной» шейкой матки (петехии)
  • Дизурия, зуд, диспареуния
  • Осложнения: ВЗОМТ, бесплодие, цервикальная неоплазия, преждевременные роды, низкий вес плода
• У мужчин (70-80% бессимптомны):
  • Уретрит (слизистые выделения, зуд)
  • Простатит, эпидидимит
  • Осложнения: стриктура уретры, бесплодие (снижение подвижности сперматозоидов)

Цель исследования
ПЦР-диагностика решает ключевые задачи:

1. Раннее выявление бессимптомных форм:Особенно у мужчин и женщин группы риска (с множественными партнерами).
2. Дифференциальная диагностика вульвовагинитов:Отличие от кандидоза, бактериального вагиноза, других ИППП.
3. Контроль эффективности лечения:Оценка эрадикации через 14-21 день после терапии.
4. Скрининг беременных:Профилактика осложнений беременности и инфицирования новорожденных (риск <5%).
5. Диагностика персистирующего/рецидивирующего трихомониаза:Выявление штаммов, устойчивых к метронидазолу.
6. Профилактика ВИЧ:Трихомониаз повышает риск заражения ВИЧ в 2-3 раза.

Что значат полученные результаты

• Положительный результат («ДНК обнаружена»):
  • Подтверждает наличие инвазии  vaginalisв урогенитальном тракте.
  • Требует лечения пациента и ВСЕХ половых партнеров за последние 3 месяца.
  • У беременных – необходимость терапии во 2-3 триместре (метронидазол).
  • Ложноположительные результаты редки (<1%) при использовании валидированных тест-систем.
• Отрицательный результат («ДНК не обнаружена»):
  • Исключает активную инфекцию с точностью >98%.
  • Не исключает:
    • Недавнюю инфекцию (<7 дней)
    • Неправильный забор материала
    • Прием противопротозойных препаратов
    • Очень низкую паразитарную нагрузку

Факторы, влияющие на результат

Группа факторов	Риски	Меры профилактики
Преаналитические	· Подмывание/спринцевание перед забором → ложноотрицательный · Прием метронидазола → ложноотрицательный · Менструальная кровь → ингибирование ПЦР	· Строгий контроль подготовки · Отсрочка анализа после антибиотиков
Аналитические	· Контаминация ампликонами → ложноположительный · Мутации в генах-мишенях (bp65, actin) → ложноотрицательный · Ингибиторы в образце (гемоглобин, слизь)	· Использование тестов с дублирующими мишенями · Внутренние контроли ПЦР · Современные системы очистки ДНК
Биологические	· Низкая концентрация паразитов (<10² копий/мл) · Локализация в железах Скина/парауретральных ходах	· Повторный анализ при клинических подозрениях · Использование высокочувствительных тестов

Лаборатория Бойченко гарантирует точность и достоверность результатов благодаря современному оборудованию и высоким стандартам качества.

Список литературы:

1. Kissinger P. Lancet Infect Dis. Trichomonas vaginalis: epidemiology and clinical outcomes.
2. Van Der Pol B. Clin Microbiol Rev. Diagnostic testing for Trichomonas vaginalis infection.
3. Рахматулина М.Р. Клиническая лабораторная диагностика урогенитального трихомониаза. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2020.
4. Workowski K.A. et al. MMWR Recomm Rep. CDC Sexually Transmitted Infections Treatment Guidelines.
5. Schwebke J.R. Emerg Infect Dis. Emerging drug resistance in Trichomonas vaginalis.

Лаборатория Бойченко гарантирует точность и достоверность результатов благодаря современному оборудованию и высоким стандартам качества.

Краткая История:
Chlamydia trachomatis (C. trachomatis) – облигатный внутриклеточный бактериальный патоген, известный человечеству давно, хотя его точная идентификация и понимание природы пришли позже. Исторически трахома (хроническая глазная инфекция, ведущая к слепоте) была описана еще в древних египетских и китайских текстах. В начале XX века были открыты включения в клетках конъюнктивы больных трахомой (тельца Провачека-Хальберштедтера), но сам возбудитель долгое время считался крупным вирусом. Лишь в 1960-х годах, благодаря развитию методов культивирования, C. trachomatis был окончательно признан бактерией, обладающей уникальным двухфазным жизненным циклом (элементарные и ретикулярные тельца). Долгое время диагностика основывалась на трудоемком и не очень чувствительном клеточном культивировании. Появление в 1980-х годах метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) произвело революцию в диагностике хламидийной инфекции, обеспечив высочайшую чувствительность и специфичность, а также возможность использования неинвазивных образцов.

Материал, используемый для исследования:

• Урогенитальный тракт (основной):
  • У женщин: соскоб эпителиальных клеток из цервикального канала, уретры, влагалища; первая порция утренней мочи (для некоторых тест-систем).
  • У мужчин: соскоб эпителиальных клеток из уретры; первая порция утренней мочи (наиболее предпочтительный неинвазивный материал).
• Прямая кишка:Соскоб эпителиальных клеток (при анальных контактах).
• Конъюнктива глаза:Соскоб эпителиальных клеток конъюнктивы (при подозрении на хламидийный конъюнктивит или трахому).
• Глотка:Соскоб эпителиальных клеток задней стенки глотки (при оральных контактах).

Как подготовиться к анализу:
Правильная подготовка критически важна для точности результата ПЦР на C. trachomatis:

1. Женщины:
   • Сдавать анализ не ранее 5-го дня менструального циклаи не позднее, чем за 5 дней до предполагаемого начала менструации. Идеально – середина цикла.
   • За 48 часов до анализа:Исключить использование вагинальных свечей, кремов, тампонов; спринцевания; трансвагинальное УЗИ; кольпоскопию.
   • За 24-36 часов до анализа:Воздержаться от половых контактов.
   • За 2-3 часа до взятия соскоба из уретры или цервикального канала:Не мочиться.
2. Мужчины:
   • За 24-36 часов до анализа:Воздержаться от половых контактов.
   • За 1.5-2 часа до взятия соскоба из уретры:Не мочиться.
   • При сдаче мочи: Собирать первую порцию утренней мочи(первые 10-20 мл) в стерильный контейнер сразу после сна, до утреннего туалета. Предварительная гигиена наружных половых органов (без использования антисептиков!).
3. Общие для всех:
   • За 2-4 недели до анализа:Сообщить врачу о приеме любых антибиотиков (особенно тетрациклинов, макролидов, фторхинолонов). Возможно, потребуется перенос исследования.
   • За 1-2 дня до анализа:Исключить прием алкоголя.
   • В день сдачи:Не проводить гигиену половых органов с использованием антибактериального мыла/геля. Лучше использовать просто воду.

Описание данного вещества:
Chlamydia trachomatis – это мелкая грамотрицательная бактерия, обладающая уникальным среди бактерий жизненным циклом, протекающим строго внутри клеток хозяина (эпителиальных клеток слизистых оболочек). Цикл включает две основные формы:

1. Элементарное тельце (ЭТ):Мелкая (0.2-0.3 мкм), метаболически неактивная, высокоустойчивая внеклеточная форма. Отвечает за заражение новых клеток хозяина. Содержит плотную, богатую дисульфидными связями наружную мембрану.
2. Ретикулярное тельце (РТ):Более крупная (0.5-1.5 мкм), метаболически активная, внутриклеточная репродуктивная форма. Не инфицирует клетки. Делится бинарным делением внутри фагосомы (включения). Через 48-72 часа после заражения РТ реорганизуются в сотни новых ЭТ, которые разрывают клетку хозяина и инфицируют соседние клетки.
   trachomatis имеет несколько сероваров (биоваров):

• Серовары A, B, Ba, C:Вызывают трахому (хроническое воспаление конъюнктивы и роговицы, ведущее к слепоте).
• Серовары D-K:Вызывают урогенитальный хламидиоз (уретрит, цервицит, эндометрит, сальпингит, эпидидимит, простатит), конъюнктивит новорожденных, пневмонию новорожденных, проктит, фарингит. Наиболее распространенные патогены для человека в развитых странах.
• Серовары L1, L2, L2a, L3:Вызывают венерическую лимфогранулему (LGV) – более инвазивную форму, характеризующуюся изъязвлениями, лимфаденитом и системными проявлениями.

Диагностика заболеваний:
ПЦР является золотым стандартом диагностики острой и хронической инфекции, вызванной C. trachomatis сероваров D-K и LGV. Он позволяет выявить ДНК бактерии в клиническом материале даже при очень малом количестве возбудителя и при бессимптомном течении. Диагностируемые заболевания:

1. Урогенитальный хламидиоз:Уретрит (мужчины, женщины), цервицит, эндометрит, сальпингит (воспаление маточных труб), тубоовариальный абсцесс, пельвиоперитонит у женщин; эпидидимит, орхит, простатит у мужчин.
2. Осложнения урогенитального хламидиоза:
   • Бесплодие (мужское и женское) вследствие рубцевания маточных труб или семявыносящих протоков.
   • Синдром Рейтера (реактивный артрит, уретрит, конъюнктивит).
   • Хроническая тазовая боль.
   • Внематочная беременность.
3. Конъюнктивит:У взрослых (серовары D-K) и новорожденных (заражение при прохождении через инфицированные родовые пути).
4. Пневмония новорожденных.
5. Проктит(воспаление прямой кишки).
6. Фарингит.
7. Венерическая лимфогранулема (LGV)(серовары L1-L3): Характеризуется язвами, выраженным паховым/тазовым лимфаденитом, проктоколитом, системными симптомами.

Цель исследования:

1. Первичная диагностика:Выявление наличия ДНК C. trachomatis в клиническом материале для подтверждения инфицирования, особенно при наличии симптомов (выделения, боль, жжение, дизурия) или при обследовании половых партнеров инфицированного.
2. Скрининг:Активное выявление бессимптомной инфекции у групп высокого риска:
   • Сексуально активные женщины до 25 лет (ежегодно).
   • Женщины старше 25 лет с факторами риска (новый половой партнер, несколько партнеров, незащищенный секс, ИППП в анамнезе).
   • Беременные (при постановке на учет).
   • Мужчины, практикующие секс с мужчинами (MSM).
   • Пациенты перед гинекологическими/урологическими операциями (аборт, ВМС, ЭКО, гистероскопия).
3. Контроль излеченности:Проводится не ранее, чем через 3-4 недели после окончания курса антибиотикотерапии. Более раннее тестирование может дать ложноположительный результат из-за детекции остаточной нежизнеспособной ДНК.
4. Дифференциальная диагностика:Отличить хламидийную инфекцию от других ИППП (гонорея, трихомониаз, микоплазмоз) и неспецифических воспалительных процессов.
5. Установление причины бесплодия или невынашивания беременности.
6. Диагностика LGV:При подозрении на эту форму (тяжелое течение, язвы, лимфоаденопатия).

Что значат полученные результаты:

• «ДНК Chlamydia trachomatis ОБНАРУЖЕНА» (Положительный результат):
  • Указывает на наличие генетического материала (ДНК) C. trachomatis в исследуемом образце.
  • Означает текущую инфекцию(острую или хроническую, активную или персистирующую).
  • Требует обязательного лечения пациента и его половых партнеров за последние 60 дней (или последнего партнера) независимо от наличия симптомов.
  • Не указывает на стадию инфекции, давность заражения или количество бактерий.
  • Не является прямым показателем жизнеспособности бактерий(особенно при контроле лечения – может детектировать погибшие бактерии).
• «ДНК Chlamydia trachomatis НЕ ОБНАРУЖЕНА» (Отрицательный результат):
  • Указывает на отсутствие детектируемого количества ДНК C. trachomatis в исследуемом образце.
  • Не полностью исключает инфицирование.Возможные причины ложноотрицательного результата:
    • Очень низкая концентрация возбудителя в месте взятия материала (особенно при хронической инфекции).
    • Неправильный забор материала (не попали в очаг воспаления).
    • Несоблюдение правил подготовки (мочеиспускание перед соскобом у мужчин, спринцевания у женщин).
    • Недавний прием эффективных антибиотиков.
    • Ошибка на преаналитическом этапе (транспортировка, хранение).
    • Локализация инфекции в участке, откуда материал не брался (например, глубокие отделы половых путей).
  • При наличии клинических симптомов или высоком риске заражения отрицательный результат требует повторного тестирования или использования альтернативных методов (например, ПЦР в режиме реального времени для количественной оценки, исследование другого типа материала).

Факторы, влияющие на результат:

1. Нарушение правил подготовки:
   • Мочеиспускание менее чем за 1.5-2 часа до взятия уретрального соскоба (у мужчин) или менее чем за 2-3 часа (у женщин) – смывает возбудителя.
   • Спринцевания, использование вагинальных средств перед забором гинекологического материала – удаляют/инактивируют возбудителя.
   • Прием антибиотиков (особенно против хламидий) перед анализом – снижает количество бактерий ниже порога детекции.
   • Половые контакты менее чем за 24-36 часов до анализа – может повлиять на концентрацию.
2. Ошибки забора материала:
   • Неправильная техника взятия соскоба (недостаточное количество эпителиальных клеток, взятие только слизи/гноя).
   • Забор материала не из основного очага поражения.
   • Использование нестерильных инструментов или контейнеров.
   • Загрязнение образца посторонней ДНК (перчатки, оборудование, слюна при фарингеальном соскобе).
3. Ошибки транспортировки и хранения:
   • Нарушение температурного режима (образцы для ПЦР обычно хранятся и транспортируются при +2…+8°С).
   • Длительное хранение до начала анализа.
   • Замораживание/размораживание нестабилизированных образцов.
   • Использование неподходящих транспортных сред.
4. Ошибки на этапе лабораторного анализа:
   • Нарушение протокола выделения ДНК (неполная лизис клеток, потеря ДНК).
   • Ингибиторы ПЦР в образце (гемоглобин, гепарин, слизь, компоненты мочи, бактериальные полисахариды) – могут подавлять реакцию.
   • Контаминация ампликонами (продуктами ПЦР) из предыдущих реакций или положительных контрольных образцов (ложноположительный результат). Борются с этим строгим разделением зон, УФ-облучением, использованием ампликон-специфичных ферментов (UNG).
   • Отказ оборудования или реагентов.
5. Биологические факторы:
   • Локализация инфекции (например, эндометрит при отрицательном цервикальном соскобе).
   • Стадия инфекции (периодическое выделение возбудителя при хронической форме).
   • Вариации в геноме C. trachomatis (очень редки, но теоретически могут повлиять на гибридизацию праймеров/зондов).

Заключение:
ПЦР-диагностика Chlamydia trachomatis – это высокочувствительный и специфичный метод, ставший основой для выявления одной из самых распространенных бактериальных ИППП в мире. Его точность критически зависит от соблюдения правил подготовки, забора материала и проведения лабораторного анализа. Своевременная диагностика и лечение хламидиоза предотвращают тяжелые осложнения, такие как бесплодие, внематочная беременность, хронические боли и реактивный артрит. Отрицательный результат при наличии симптомов или высоком риске требует перепроверки. Положительный результат всегда требует лечения пациента и его партнеров.

Лаборатория Бойченко гарантирует точность и достоверность результатов благодаря современному оборудованию и высоким стандартам качества.

Список литературы:

1. Centers for Disease Control and Prevention (CDC). Sexually Transmitted Infections Treatment Guidelines, 2021: Chlamydial Infections. MMWR Recomm Rep2021;70(No. RR-4):1–187.
2. Workowski, K. A., Bachmann, L. H., Chan, P. A., Johnston, C. M., Muzny, C. A., Park, I., … & Bolan, G. A. (2021). Sexually transmitted infections treatment guidelines, 2021. Morbidity and Mortality Weekly Report: Recommendations and Reports, *70*(4), 1-187.
3. Gaydos, C. A., & Quinn, T. C. (2020). Urine nucleic acid amplification tests for the diagnosis of sexually transmitted infections in clinical practice. Current opinion in infectious diseases, *33*(1), 62–68.
4. Российское общество дерматовенерологов и косметологов (РОДВК). Федеральные клинические рекомендации по ведению больных инфекциями, передаваемыми половым путем. Урогенитальная хламидийная инфекция. Москва, 2020 (Актуализация).
5. Chernesky, M., & Jang, D. (2019). APTIMA transcription-mediated amplification assays for Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae. Expert review of molecular diagnostics, *19*(9), 803–815.

 

ДНК Gardnerella vaginalis (гарднерелла вагиналис) методом ПЦР (качественное определение)

 

Краткая История

Gardnerella vaginalis была впервые описана в 1955 году американскими исследователями Германом Гарднером и Чарльзом Дюксом, которые выделили бактерию из влагалищных выделений женщин с бактериальным вагинозом (БВ) и первоначально назвали её Haemophilus vaginalis . Долгое время G. vaginalis считалась единственной причиной бактериального вагиноза. Однако в 1980-1990-х годах с развитием молекулярно-биологических методов (ПЦР, секвенирование 16S рРНК) было установлено, что бактериальный вагиноз — это полимикробный синдром, в котором участвуют не только G. vaginalis, но и другие облигатные анаэробы: Atopobium vaginae, Megasphaera spp., BVAB1, BVAB2, Prevotella spp., Mobiluncus spp. и другие . В 2000-х годах были разработаны и внедрены в клиническую практику коммерческие тест-системы для диагностики бактериального вагиноза методом ПЦР в реальном времени (Real-Time PCR), позволяющие не только выявлять ДНК G. vaginalis, но и оценивать её количественное соотношение с лактобациллами (нормальной микрофлорой влагалища) . Сегодня определение ДНК Gardnerella vaginalis методом ПЦР является высокочувствительным и специфичным методом лабораторной диагностики бактериального вагиноза, особенно в случаях бессимптомного течения, стертой клинической картины и рецидивирующих форм.

 

Материал, используемый для исследования

• • Тип образца:Урогенитальный соскоб (эпителиальные клетки слизистых оболочек урогенитального тракта).
  • Локализация забора материала (в зависимости от пола и клинических проявлений):

• У женщин:Соскоб из заднего свода влагалища, из цервикального канала, из уретры (реже) .
• У мужчин:Соскоб из уретры (на глубину 2-4 см), первая порция утренней мочи (при трудностях с взятием соскоба), секрет предстательной железы, эякулят .
  • Тип пробирки/системы сбора:Специальная пробирка с транспортной средой для ПЦР (содержит консервант, предотвращающий деградацию ДНК и рост бактерий). Используются коммерческие системы: «Инцит-тампон» (Incyte Swab), пробирки с транспортной средой для ПЦР (например, «ДНК-сорб», «АмплиСенс», «Эппендорф») . Важно: Обычные мазки на стекле для ПЦР не пригодны (необходим транспорт для сохранения ДНК).
  • Объем материала:Достаточное количество эпителиальных клеток (визуально – соскоб должен содержать видимый биоматериал). Недостаточное количество клеток – причина ложноотрицательных результатов.
  • Обработка:После взятия материала тампон/зонд тщательно споласкивается в транспортной среде (несколько вращательных движений), затем отжимается о стенки пробирки и удаляется. Пробирка плотно закрывается и маркируется (ФИО пациента, дата, время взятия). Доставка в лабораторию осуществляется в день взятия (или в течение 12 часов при хранении при +2…+8°C). Замораживание не допускается. Стабильность ДНК в транспортной среде при комнатной температуре – до 21 дня (в зависимости от системы сбора), при +2…+8°C – до 24-48 часов .

 

Как подготовиться к анализу

Подготовка к анализу критически важна для получения достоверного результата (исключение контаминации, ложноотрицательных и ложноположительных результатов):

 

Женщины:

• Исследование рекомендуется проводить до менструации или через 2-5 дней после её окончания.
• За 3 днядо взятия материала исключить: половые контакты, вагинальные спринцевания, использование вагинальных свечей, таблеток, кремов, гелей, тампонов .
• За 3-5 днейдо взятия материала прекратить использование антибактериальных препаратов местно (вагинально) и системно (внутрь, инъекционно) – после консультации с врачом (нельзя отменять жизненно важные препараты!) .
• В день взятия материала не проводить гигиенические процедуры с использованием антисептиков для подмывания (только чистая вода).

 

Мужчины:

• За 3 днядо взятия материала исключить половые контакты.
• За 3-5 днейдо взятия материала прекратить прием антибактериальных препаратов (после консультации с врачом).
• Перед взятием соскоба из уретры не мочиться в течение 3 часов.
• Накануне и в день взятия материала не использовать антисептики для туалета половых органов.

 

Общие требования:

• За 2-3 неделидо исследования исключить прием антибиотиков (системно) – по согласованию с врачом. Если пациент принимает антибиотики по поводу другого заболевания, исследование следует отложить до окончания курса.
• Сообщить врачу о наличии острых инфекционных заболеваний (лихорадка, ОРВИ, ангина) – анализ следует отложить на 2-4 недели после выздоровления.
• Исключить употребление алкоголя за 24 часа до исследования.
• В день взятия материала не курить за 1-2 часа (по возможности).

 

Описание данного вещества (Gardnerella vaginalis и метод ПЦР)

Gardnerella vaginalis – это грамвариабельная (грамположительная или грамотрицательная в зависимости от стадии роста), факультативно-анаэробная, неподвижная, палочковидная бактерия, не образующая спор . Она является частью нормальной микрофлоры влагалища у здоровых женщин, но в небольших количествах (до 10^3-10^4 КОЕ/мл). При нарушении микробиоценоза влагалища (снижении количества лактобацилл, повышении pH > 4,5) G. vaginalis начинает активно размножаться, становясь доминирующим микроорганизмом, и является одной из основных причин бактериального вагиноза (БВ) .

 

Роль G. vaginalis в бактериальном вагинозе:

• Вытесняет нормальную микрофлору (лактобациллы), продуцирующие перекись водорода и молочную кислоту.
• Повышает pH влагалища (создает благоприятную среду для других анаэробов – Atopobium vaginae, Prevotella, Mobiluncus, BVAB2 и др.).
• Продуцирует ферменты (сиалидазу, муциназу), разрушающие защитный слизистый барьер.
• Выделяет летучие амины (путресцин, кадаверин, триметиламин), которые придают характерный «рыбный» запах влагалищным выделениям .

Важно: Бактериальный вагиноз – это полимикробный синдром. Обнаружение только G. vaginalis без других анаэробов может быть вариантом нормы (бессимптомное носительство) . Для клинически значимого БВ характерно наличие G. vaginalis в сочетании с Atopobium vaginae, BVAB2, Megasphaera и снижением количества лактобацилл .

 

Метод ПЦР (полимеразная цепная реакция):

• Качественная ПЦР:Определяет наличие (обнаружено/не обнаружено) ДНК G. vaginalis в образце. Не позволяет оценить количество бактерий. Чувствительность метода – 10-100 копий ДНК в пробе (или 1 нг ДНК) .
• Количественная ПЦР (Real-Time PCR):Позволяет не только обнаружить ДНК G. vaginalis, но и определить её количество (КОЕ/мл или геном-эквивалент/мл), а также соотношение G. vaginalis / лактобациллы. Это более информативно для диагностики клинически значимого БВ. Например, коммерческая тест-система ATRiDA (мультиплексная ПЦР) оценивает соотношение G. vaginalis и Atopobium vaginae к общей бактериальной нагрузке и лактобациллам .
• Специфичность:Высокая (95-100%). Современные праймеры специфичны к ДНК G. vaginalis и не перекрестно реагируют с другими микроорганизмами (лактобациллы, кишечная палочка, стафилококки) .
• Чувствительность:Очень высокая (90-100%). ПЦР может выявлять G. vaginalis даже при очень низкой концентрации (например, при бессимптомном носительстве) .

 

Диагностика заболеваний

Качественное (и количественное) определение ДНК G. vaginalis используется для:

1. Диагностики бактериального вагиноза (БВ) у женщин:Это основное показание. Особенно когда клиническая картина неясна (стертые симптомы, отсутствие характерного «рыбного» запаха), при рецидивирующих формах БВ, при бессимптомном течении (скрининг беременных, обследование перед внутриматочными процедурами) . ПЦР имеет более высокую чувствительность, чем классические методы (критерии Амселя, микроскопия мазка по Ньюдженту) .
2. Дифференциальной диагностики вагинальных инфекций:Отличить бактериальный вагиноз от кандидозного вульвовагинита (молочницы), трихомониаза, аэробного вагинита. Часто используется мультиплексная ПЦР (одновременное выявление G. vaginalis, Atopobium vaginae, Candida spp., Trichomonas vaginalis, Mycoplasma genitalium, Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae) .
3. Обследования пациенток с патологическими выделениями из влагалища (бели, сероватые/белые выделения с «рыбным» запахом, зуд, жжение, дискомфорт при половом акте).
4. Обследования беременных (скрининг):Бактериальный вагиноз, вызванный G. vaginalis и другими анаэробами, ассоциирован с повышенным риском преждевременных родов, преждевременного разрыва плодных оболочек, хориоамнионита (воспаления плодных оболочек), послеродового эндометрита, рождения детей с низкой массой тела . Выявление G. vaginalis (особенно в высоком титре) у беременных требует лечения (во II и III триместрах) для снижения риска осложнений.
5. Обследования перед гинекологическими операциями и манипуляциями:Перед абортом, гистероскопией, установкой внутриматочной спирали (ВМС), биопсией эндометрия. Бактериальный вагиноз повышает риск восходящей инфекции и воспалительных осложнений .
6. Обследования пациенток с рецидивирующим бактериальным вагинозом:Для выяснения причины рецидивов (персистенция G. vaginalis, устойчивость к метронидазолу, наличие других анаэробов, неэффективность лечения полового партнера). У некоторых штаммов G. vaginalis выявляется устойчивость к метронидазолу, клиндамицину, ампициллину .
7. Обследования мужчин (реже):При наличии симптомов уретрита (жжение, резь при мочеиспускании, выделения из уретры), простатита, эпидидимита неясной этиологии. G. vaginalis может вызывать эти заболевания у мужчин, но значительно реже, чем у женщин . Чаще у мужчин – бессимптомное носительство (транзиторное, до 2-3 дней) .

 

Цель исследования

Основные цели качественного (и количественного) определения ДНК Gardnerella vaginalis:

1. Лабораторное подтверждение бактериального вагиноза (БВ)у женщин с клиническими проявлениями (патологические выделения, зуд, неприятный запах).
2. Скрининг бактериального вагинозау беременных (для профилактики преждевременных родов и других осложнений), перед гинекологическими операциями и манипуляциями, у пациенток с рецидивирующими воспалительными заболеваниями органов малого таза.
3. Дифференциальная диагностикавагинальных инфекций (БВ vs кандидоз vs трихомониаз vs аэробный вагинит) – в составе мультиплексной ПЦР.
4. Обследование пациенток с рецидивирующим БВ(после неоднократных курсов лечения) – для выявления персистенции G. vaginalis, оценки антибиотикорезистентности (по возможности), подбора рациональной терапии.
5. Обследование половых партнеров(мужчин) при рецидивирующем БВ у женщины (хотя эффективность лечения половых партнеров остается спорной, но в некоторых случаях рекомендуется).
6. Оценка эффективности лечения(в динамике, через 4-6 недель после окончания курса терапии). Цель – отрицательный результат ПЦР (или снижение количества G. vaginalis до нормальных значений – < 10^3-10^4 КОЕ/мл при количественном исследовании).

 

Что значат полученные результаты

Интерпретация результатов качественного определения ДНК G. vaginalis всегда проводится врачом-гинекологом, урологом, дерматовенерологом в контексте клинической картины (наличие симптомов), данных осмотра (pH влагалища, наличие «рыбного» запаха при добавлении KOH, «ключевые клетки» при микроскопии), а также с учетом результатов других тестов (общий мазок, выявление других возбудителей – Candida, Trichomonas, Chlamydia, Mycoplasma). Референсное значение – «не обнаружено» (для качественной ПЦР) .

 

Референсные значения (качественная ПЦР):

• Отрицательный результат («не обнаружено»):ДНК Gardnerella vaginalis в исследуемом образце не обнаружена (или концентрация ниже предела чувствительности метода, обычно < 10^2-10^3 КОЕ/мл). Бактериальный вагиноз маловероятен. Однако при отрицательном результате, но наличии типичных клинических симптомов (выделения с рыбным запахом, зуд), необходимо исключить другие причины (аэробный вагинит, десквамативный воспалительный вагинит, атрофический вагинит) или провести количественное ПЦР-исследование (возможно, концентрация G. vaginalis низкая, но другие анаэробы – Atopobium, Prevotella, BVAB2 – могут быть причиной БВ) .
• Положительный результат («обнаружено»):ДНК Gardnerella vaginalis обнаружена в исследуемом образце. Указывает на наличие G. vaginalis в урогенитальном тракте. Однако НЕ ВСЕГДА означает бактериальный вагиноз! vaginalis может присутствовать в норме у 30-50% здоровых женщин (бессимптомное носительство) . Клиническое значение зависит от:

• Количества G. vaginalis(при качественной ПЦР не оценивается – требуется количественный тест).
• Наличия других анаэробов(Atopobium vaginae, BVAB2, Megasphaera, Prevotella) – при БВ обычно есть сочетание.
• Соотношения G. vaginalis / лактобациллы(при количественной ПЦР).
• Клинических симптомов(выделения, зуд, запах) и pH влагалища (> 4,5).

 

Интерпретация в зависимости от клинической ситуации:

• Положительный результат + наличие симптомов (выделения с «рыбным» запахом, зуд/жжение, pH > 4,5, «ключевые клетки» в мазке):

• Интерпретация:Бактериальный вагиноз. Требует лечения (метронидазол, клиндамицин – перорально или вагинально) . При рецидивирующем течении – длительные курсы, лечение полового партнера (спорно), поддержание лактобациллярной флоры (пробиотики).
  • Положительный результат + отсутствие симптомов (случайная находка при скрининге):
• Интерпретация:Бессимптомное носительство G. vaginalis (вариант нормы). Лечение обычно не требуется (за исключением беременных и перед гинекологическими операциями/манипуляциями). У беременных – решение о лечении принимает врач (риск преждевременных родов) .
  • Отрицательный результат + наличие симптомов (выделения, зуд):
• Интерпретация:Бактериальный вагиноз маловероятен. Следует исключать другие причины:
  • Кандидоз (Candida spp.) – творожистые выделения, зуд.
  • Трихомониаз (Trichomonas vaginalis) – пенистые выделения, зуд, гиперемия, «земляничный» вид шейки матки.
  • Аэробный вагинит (Streptococcus spp., Staphylococcus aureus, E. coli) – гнойные выделения, воспаление.
  • Десквамативный воспалительный вагинит.
  • Атрофический вагинит (у женщин в постменопаузе).
• Рекомендуется мультиплексная ПЦР (на Candida, Trichomonas, Chlamydia, Mycoplasma) и микробиологическое исследование (посев).
  • Количественная ПЦР (соотношение G. vaginalis / лактобациллы):
• Соотношение > 1 (G. vaginalis преобладает над лактобациллами):Высокая вероятность БВ (особенно в сочетании с симптомами) .
• Соотношение < 1 (лактобациллы преобладают над G. vaginalis):Норма или бессимптомное носительство. Клинически значимый БВ маловероятен.
• Мультиплексная ПЦР (ATRiDA и аналоги):Оценка нагрузки G. vaginalis и Atopobium vaginae. Высокая нагрузка обоих (более 10^5-10^6 КОЕ/мл) – высокая вероятность БВ. Чувствительность 96,9%, специфичность 70,2% (положительный результат может быть при асимптомном дисбиозе) .

 

Важные нюансы интерпретации:

• Ложноположительный результат:Возможен при контаминации образца (несоблюдение правил асептики, загрязнение реагентов), при низком пороге детекции (обнаружение минимальных количеств ДНК, не имеющих клинического значения – бессимптомное носительство) .
• Ложноотрицательный результат:Возможен при неправильном взятии материала (недостаточное количество эпителиальных клеток), при длительном хранении образца (деградация ДНК), при подавлении ПЦР (ингибиторы в образце), при очень низкой концентрации G. vaginalis (ниже предела чувствительности), при приеме антибиотиков до анализа .
• Бактериальный вагиноз – полимикробный синдром:Обнаружение только G. vaginalis (без Atopobium vaginae, BVAB2, Prevotella) не является достаточным для диагноза БВ. Наиболее точная диагностика – мультиплексная ПЦР на 3-5 анаэробов + лактобациллы .
• Лечение половых партнеров:Эффективность лечения половых партнеров (мужчин) для предотвращения рецидивов БВ у женщин остается спорной. В большинстве рекомендаций лечение партнера не требуется (за исключением рецидивирующих форм, по решению врача) .
• Антибиотикорезистентность G. vaginalis:Некоторые штаммы G. vaginalis устойчивы к метронидазолу (40-50% и более) и другим антибиотикам (ампициллин, тетрациклин) . При рецидивах после лечения метронидазолом рекомендуется провести тест на антибиотикочувствительность (если лаборатория это выполняет) или использовать альтернативные препараты (клиндамицин, тинидазол).

 

Факторы, влияющие на результат

На результат качественного определения ДНК G. vaginalis могут влиять различные преаналитические, аналитические и биологические факторы:

• Преаналитические (до взятия материала):

• Прием антибиотиковза 2-3 недели до анализа – приводит к ложноотрицательным результатам (подавление роста/разрушение ДНК) .
• Использование вагинальных свечей, кремов, спринцеванийза 3-5 дней до анализа – может смывать эпителиальные клетки и удалять ДНК возбудителя (ложноотрицательный результат) .
• Половой акт за 3 дня до анализа– может временно изменять микробиоту влагалища .
• Менструация– кровь содержит ингибиторы ПЦР, может вызывать ложноположительные (контаминация) или ложноотрицательные результаты. Анализ сдают после окончания менструации .
• Недостаточное количество эпителиальных клетокв соскобе – основная причина ложноотрицательных результатов (G. vaginalis ассоциирована с эпителием) .
• Несоблюдение правил асептикипри взятии материала – контаминация образца посторонней ДНК (ложноположительный результат) .

 

Аналитические (на этапе лабораторного исследования):

• Контаминация реагентов и лабораторной посудыампликонами (продуктами ПЦР) – ложноположительный результат. Современные лаборатории используют системы с УФ-деконтаминацией и раздельные зоны для выделения ДНК и амплификации .
• Ингибиторы ПЦРв образце (кровь, слизь, препараты для местного лечения) – ложноотрицательный результат .
• Нарушение температурного режима хранения транспортной среды(замораживание, перегрев) – деградация ДНК (ложноотрицательный результат) .
• Чувствительность тест-системы:Разные коммерческие наборы имеют разную чувствительность (10-100 копий ДНК). Высокочувствительные тесты (например, вложенная ПЦР – nested PCR) могут выявлять очень низкие концентрации G. vaginalis, что может приводить к гипердиагностике (обнаружение бессимптомного носительства) .
• Нарушение калибровки ПЦР-анализатора:Неправильная калибровка флуоресцентного детектора (для Real-Time PCR) – искажение результатов .

 

Биологические факторы:

• Бессимптомное носительство G. vaginalis– самый частый фактор ложноположительных результатов (в интерпретации – положительный ПЦР, но нет клиники). Встречается у 30-50% здоровых женщин .
• Беременность– может влиять на состав микрофлоры влагалища (повышение риска БВ, но также и бессимптомного носительства).
• Гормональный фон– у женщин в постменопаузе (низкий эстрадиол) снижается количество лактобацилл, повышается pH, увеличивается риск БВ и бессимптомного носительства G. vaginalis.
• Наличие других инфекций (Chlamydia, Mycoplasma, Ureaplasma)– могут изменять микробиоту влагалища и влиять на колонизацию G. vaginalis.

Лаборатория Бойченко гарантирует точность и достоверность результатов благодаря современному оборудованию и высоким стандартам качества.

---

Список литературы:

1. 高剑云,陈建忠,周坚红.采用套式PCR检测细菌性阴道病病原体加德纳菌及细菌耐药性测定[J].中国卫生检验杂志.2010,20(05):1124-1126.
2. Speksnijder A., Gruteke P., Jonker D. et al. Improved diagnostics of bacterial vaginosis with molecular techniques. Sexually Transmitted Infections. 2011;87(Suppl 1):A81.
3. Incyte Diagnostics. Gardnerella vaginalis Test Directory.
4. 阴道加德纳菌PCR检测试剂盒. 杭州博日科技. 2024.
5. Клинические рекомендации Министерства здравоохранения РФ «Бактериальный вагиноз». 2021.
6. van der Veer C., van Houdt R., van Dam A. et al. Accuracy of a commercial multiplex PCR for the diagnosis of bacterial vaginosis. Journal of Medical Microbiology. 2018;67(9):1265-1270.
7. Synevo Laboratory. PCR. Gardnerella vaginalis (u/g scraping, qualitative determination).
8. OHSU Lab Services. Vaginal Pathogens DNA Probe.
9. Verstraelen H., Verhelst R. et al. Throwing the dice for the diagnosis of vaginal complaints? Annals of Clinical Microbiology and Antimicrobials. 2006.
10. Медицинская лаборатория НАКФФ. Gardnerella vaginalis, качественное определение ДНК. 2021.

 

ДНК Candida albicans (кандида альбиканс) методом ПЦР (качественное определение)

 

Краткая История

Candida albicans впервые была описана в 1847 году французским биологом Шарлем Филиппом Робеном (Charles Philippe Robin) как гриб, вызывающий молочницу у человека. Долгое время диагностика кандидозной инфекции основывалась на микроскопии мазков и культуральном посеве (выращивание грибов на среде Сабуро). Однако эти методы имели ограничения: низкая чувствительность (особенно при смешанных инфекциях), длительность (2-5 дней для посева), невозможность дифференцировать Candida albicans от других видов Candida (C. glabrata, C. krusei, C. tropicalis, C. parapsilosis), которые могут быть устойчивы к флуконазолу. В 1980-1990-х годах с развитием полимеразной цепной реакции (ПЦР) стало возможным быстрое (4-6 часов) и высокочувствительное выявление ДНК Candida albicans, а также дифференциация различных видов Candida с помощью специфических праймеров. В 2000-х годах были разработаны коммерческие тест-системы для мультиплексной ПЦР (одновременное выявление Candida albicans, Candida glabrata, Candida krusei, Candida tropicalis, Candida parapsilosis). Сегодня ПЦР на Candida albicans является методом выбора для быстрой диагностики кандидозного вульвовагинита (молочницы), кандидозного баланопостита, кандидозного стоматита, кандидоза пищевода, а также для идентификации возбудителя при кандидемии и инвазивном кандидозе (в комплексе с посевом крови).

 

Материал, используемый для исследования

• • Тип образца:Урогенитальный соскоб (эпителиальные клетки слизистых оболочек), соскоб со слизистой полости рта (при стоматите), мокрота (при кандидозе бронхов/легких), биоптат тканей (при инвазивном кандидозе), кровь (при кандидемии – используется ПЦР в реальном времени с детекцией в динамике), моча (при кандидозе мочевыводящих путей).
  • Локализация забора материала (в зависимости от клинических проявлений):

• У женщин (урогенитальный кандидоз):Соскоб из заднего свода влагалища, из цервикального канала, из уретры.
• У мужчин (кандидозный баланопостит, уретрит):Соскоб из уретры (на глубину 2-4 см), с головки полового члена (с очагов поражения), секрет предстательной железы.
• При кандидозном стоматите (молочница полости рта):Соскоб со слизистой щек, языка, нёба (с налетов).
• При кандидозе пищевода:Биоптат слизистой пищевода (при эндоскопии).
• При кандидемии (генерализованный кандидоз):Венозная кровь (5-10 мл, в специальные пробирки с консервантом для ПЦР).
  • Тип пробирки/системы сбора:Специальная пробирка с транспортной средой для ПЦР (содержит консервант, предотвращающий деградацию ДНК и рост грибов). Используются коммерческие системы: «Инцит-тампон», пробирки с транспортной средой для ПЦР (например, «ДНК-сорб», «АмплиСенс», «Эппендорф»). Важно: Обычные мазки на стекле для ПЦР не пригодны (необходим транспорт для сохранения ДНК). Для крови используются специальные вакуумные пробирки с ЭДТА (цитрат не подходит, так как ингибирует ПЦР).
  • Объем материала:Достаточное количество эпителиальных клеток (для соскоба) или 5-10 мл крови (для кандидемии). Недостаточное количество клеток – причина ложноотрицательных результатов.
  • Обработка:После взятия материала тампон/зонд тщательно споласкивается в транспортной среде (несколько вращательных движений), затем отжимается о стенки пробирки и удаляется. Пробирка плотно закрывается и маркируется (ФИО пациента, дата, время взятия, локализация). Доставка в лабораторию осуществляется в день взятия (или в течение 12 часов при хранении при +2…+8°C). Замораживание не допускается. Стабильность ДНК в транспортной среде при комнатной температуре – до 21 дня (в зависимости от системы сбора), при +2…+8°C – до 24-48 часов.

 

Как подготовиться к анализу

Подготовка к анализу критически важна для получения достоверного результата (исключение ложноотрицательных результатов и контаминации):

 

Женщины (урогенитальный соскоб):

• Исследование рекомендуется проводить до менструации или через 2-5 дней после её окончания.
• За 3 днядо взятия материала исключить: половые контакты, вагинальные спринцевания, использование вагинальных свечей, таблеток, кремов, гелей, тампонов (противогрибковые препараты особенно важны!).
• За 5-7 днейдо взятия материала прекратить использование антимикотических (противогрибковых) препаратов местно (вагинально) и системно (внутрь, инъекционно) – после консультации с врачом (нельзя отменять жизненно важные препараты!).
• В день взятия материала не проводить гигиенические процедуры с использованием антисептиков для подмывания (только чистая вода).

 

Мужчины (урогенитальный соскоб):

• За 3 днядо взятия материала исключить половые контакты.
• За 5-7 днейдо взятия материала прекратить прием антимикотических препаратов (после консультации с врачом).
• Перед взятием соскоба из уретры не мочиться в течение 3 часов.
• Накануне и в день взятия материала не использовать антисептики для туалета половых органов.

 

При кандидозном стоматите (соскоб из полости рта):

• За 2-3 часа до взятия материала не есть, не пить, не чистить зубы, не использовать ополаскиватели для рта.
• За 5-7 дней прекратить использование местных антимикотиков (пастилки, спреи, гели) и системных противогрибковых препаратов.

 

Общие требования:

• За 2-3 неделидо исследования исключить прием антибиотиков (системно) – по согласованию с врачом (антибиотики не влияют на грибы, но изменяют микробиоту, что может снижать колонизацию Candida). Если пациент принимает антибиотики по поводу другого заболевания, исследование следует отложить до окончания курса.
• Сообщить врачу о наличии острых инфекционных заболеваний (лихорадка, ОРВИ, ангина) – анализ следует отложить на 2-4 недели после выздоровления.
• Исключить употребление алкоголя за 24 часа до исследования.
• В день взятия материала не курить за 1-2 часа (по возможности).

 

Описание данного вещества (Candida albicans и метод ПЦР)

Candida albicans – это диморфный (существующий в двух формах: дрожжевой и мицелиальной) гриб рода Candida, семейства Saccharomycetaceae. Является наиболее частым (70-80% случаев) возбудителем кандидозной инфекции у человека. C. albicans входит в состав нормальной микрофлоры влагалища (у 30-50% здоровых женщин), полости рта (у 30-60% здоровых людей), кишечника (у 50-80% здоровых людей) в небольших количествах (до 10^3-10^4 КОЕ/мл). При нарушении иммунитета, дисбиозе (прием антибиотиков, гормональные изменения, сахарный диабет, беременность, стресс, иммуносупрессия) C. albicans начинает активно размножаться, переходит из дрожжевой формы (комменсал) в мицелиальную (инвазивную), проникает в слизистые оболочки и вызывает кандидоз.

 

Факторы вирулентности C. albicans:

• Адгезия:Способность прикрепляться к эпителиальным клеткам (через интегрины, маннан, белки семейства ALS).
• Переход в мицелиальную форму:Образование псевдомицелия и гиф (нитей), которые проникают в ткани.
• Продукция ферментов:Секреция гидролаз (протеазы, фосфолипазы, липазы), разрушающих ткани и защитные барьеры.
• Фенотипическое переключение (switching):Способность менять морфологию (гладкие, шероховатые, звездчатые колонии) для уклонения от иммунного ответа.
• Образование биопленок:На поверхности слизистых, катетеров, протезов.

 

Клинические формы кандидозной инфекции:

• Поверхностный кандидоз (наиболее частый):Кандидозный вульвовагинит (молочница) у женщин, кандидозный баланопостит у мужчин, кандидозный стоматит (молочница полости рта), кандидоз кожи (межпальцевая эрозия, опрелости), кандидоз ногтей (паронихии, онихомикоз).
• Инвазивный кандидоз (тяжелый, у иммунокомпрометированных):Кандидоз пищевода, кандидоз бронхов и легких, кандидоз мочевыводящих путей (пиелонефрит, цистит), кандидозный перитонит (при перитонеальном диализе).
• Генерализованный кандидоз (кандидемия, сепсис):Грибы в крови, поражение внутренних органов (печень, селезенка, почки, мозг, сердце, глаза). Высокая летальность (40-60%).

 

Метод ПЦР (полимеразная цепная реакция):

• Качественная ПЦР:Определяет наличие (обнаружено/не обнаружено) ДНК Candida albicans в образце. Не позволяет оценить количество грибов. Чувствительность метода – 10-100 копий ДНК в пробе (или 1 нг ДНК). Позволяет дифференцировать C. albicans от других видов Candida (C. glabrata, C. krusei, C. tropicalis, C. parapsilosis) с помощью специфических праймеров (например, к гену 5.8S рРНК, ITS1/ITS2 регионы).
• Количественная ПЦР (Real-Time PCR):Позволяет не только обнаружить ДНК Candida albicans, но и определить её количество (КОЕ/мл или геном-эквивалент/мл). Это важно для дифференциации бессимптомного носительства (низкое количество, < 10^3 КОЕ/мл) от клинически значимого кандидоза (высокое количество, > 10^4 КОЕ/мл). В мультиплексных тест-системах (например, ATRiDA, Femoflor, Androflor) оценивается соотношение Candida spp. к лактобациллам.
• Специфичность:Высокая (98-100%). Современные праймеры специфичны к ДНК C. albicans и не перекрестно реагируют с другими видами Candida (хотя с C. dubliniensis может быть перекрестная реакция, так как они генетически близки) и с другими грибами (Aspergillus, Cryptococcus).
• Чувствительность:Очень высокая (90-100%). ПЦР может выявлять ДНК C. albicans даже при очень низкой концентрации (например, при бессимптомном носительстве).

 

Диагностика заболеваний

Качественное (и количественное) определение ДНК Candida albicans используется для:

1. Диагностики кандидозного вульвовагинита (молочницы) у женщин:Это основное показание. Особенно когда клиническая картина неясна (стертые симптомы, атипичные выделения), при рецидивирующем кандидозе (более 4 эпизодов в год), при хроническом кандидозе, при смешанных инфекциях (сочетание с бактериальным вагинозом, трихомониазом, хламидиозом). ПЦР имеет более высокую чувствительность, чем микроскопия мазка (особенно при малом количестве псевдомицелия).
2. Дифференциальной диагностики вульвовагинита:Отличить кандидоз от бактериального вагиноза (Gardnerella vaginalis, Atopobium vaginae), трихомониаза (Trichomonas vaginalis), аэробного вагинита (Streptococcus spp., Staphylococcus aureus, E. coli). Часто используется мультиплексная ПЦР (одновременное выявление Candida albicans, Gardnerella vaginalis, Atopobium vaginae, Trichomonas vaginalis, Mycoplasma genitalium, Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae).
3. Диагностики кандидозного баланопостита и уретрита у мужчин:При наличии симптомов (покраснение головки полового члена, белый налет, зуд, жжение при мочеиспускании, выделения из уретры). ПЦР позволяет быстро подтвердить грибковую этиологию и исключить бактериальные инфекции.
4. Диагностики кандидозного стоматита (молочницы полости рта):У детей (часто), у взрослых с иммунодефицитом (ВИЧ, сахарный диабет, длительный прием антибиотиков, глюкокортикоидов, химиотерапия). ПЦР соскоба с налетов на слизистой рта является высокочувствительным методом.
5. Диагностики кандидоза пищевода, бронхов, легких, мочевыводящих путей (инвазивный кандидоз):У пациентов с иммунодефицитом (ВИЧ с CD4 < 200, онкогематологические заболевания, после трансплантации органов, длительный прием глюкокортикоидов/иммуносупрессоров). Образцы: биоптат пищевода (эндоскопия), мокрота/бронхоальвеолярный лаваж (БАЛ), моча (средняя порция или катетеризационная). ПЦР (особенно количественная) имеет высокую диагностическую ценность (чувствительность 80-95% для инвазивного кандидоза).
6. Диагностики кандидемии и генерализованного кандидоза (сепсис):У пациентов отделений реанимации и интенсивной терапии (ОРИТ), у онкогематологических больных, у пациентов с катетерами (центральные венозные катетеры, мочевые катетеры). ПЦР крови (Real-Time PCR) позволяет выявить ДНК Candida albicans за 4-6 часов (посев крови дает результат через 2-5 дней, чувствительность 50-70%). Однако ПЦР крови не может дифференцировать жизнеспособные грибы от нежизнеспособных (после лечения), поэтому используется в комплексе с посевом и определением (1,3)-β-D-глюкана (маркер инвазивного кандидоза).
7. Обследования пациенток с рецидивирующим кандидозным вульвовагинитом (РКВВ):Для выяснения причины рецидивов: персистенция C. albicans (один и тот же штамм), наличие устойчивых видов (C. glabrata, C. krusei, C. tropicalis), устойчивость к флуконазолу, сопутствующие заболевания (сахарный диабет, ВИЧ). ПЦР с видовой идентификацией позволяет подобрать рациональную антимикотическую терапию.

 

Цель исследования

Основные цели качественного (и количественного) определения ДНК Candida albicans:

1. Лабораторное подтверждение кандидозной инфекции(кандидозный вульвовагинит, баланопостит, стоматит, кандидоз пищевода, бронхов, мочевыводящих путей) у пациентов с клиническими проявлениями (творожистые выделения, зуд, жжение, белый налет на слизистых).
2. Дифференциальная диагностикавульвовагинита (отличие кандидоза от бактериального вагиноза, трихомониаза, аэробного вагинита) – в составе мультиплексной ПЦР.
3. Выявление этиологии рецидивирующего кандидозного вульвовагинита (РКВВ)– определение вида Candida (C. albicans vs C. glabrata, C. krusei, C. tropicalis, C. parapsilosis) для выбора терапии (C. glabrata часто устойчива к флуконазолу).
4. Диагностика инвазивного кандидоза и кандидемииу иммунокомпрометированных пациентов (в комплексе с посевом крови и определением (1,3)-β-D-глюкана).
5. Скрининг кандидоза у беременных (не рекомендуется рутинно, но проводится при наличии симптомов):Кандидоз во время беременности может приводить к осложнениям (хориоамнионит, преждевременные роды, внутриутробное инфицирование плода). Лечение обязательно (во II и III триместрах допустимы местные формы – клотримазол, миконазол, сертаконазол).
6. Обследование половых партнеров (мужчин) при рецидивирующем кандидозе у женщины:Часто мужчины являются бессимптомными носителями C. albicans и могут быть источником реинфекции. Лечение полового партнера рекомендуется при рецидивирующем кандидозе (особенно если ПЦР у мужчины положительная).
7. Оценка эффективности лечения (в динамике):Контроль ПЦР через 2-4 недели после окончания курса антимикотической терапии. Цель – отрицательный результат (или снижение количества C. albicans до < 10^3 КОЕ/мл при количественном исследовании). При сохраняющейся положительной ПЦР – подозрение на устойчивость к препарату или реинфекцию.

 

Что значат полученные результаты

Интерпретация результатов качественного определения ДНК Candida albicans всегда проводится врачом-гинекологом, урологом, дерматовенерологом, стоматологом, терапевтом в контексте клинической картины (наличие симптомов), данных осмотра (творожистые выделения, гиперемия, белый налет), а также с учетом результатов других тестов (общий мазок, pH влагалища, выявление других возбудителей – Gardnerella, Trichomonas, Chlamydia, Mycoplasma). Референсное значение – «не обнаружено» (для качественной ПЦР) или менее 10^3 КОЕ/мл (для количественной ПЦР – бессимптомное носительство).

 

Референсные значения (качественная ПЦР):

• Отрицательный результат («не обнаружено»):ДНК Candida albicans в исследуемом образце не обнаружена (или концентрация ниже предела чувствительности метода, обычно < 10^2-10^3 КОЕ/мл). Кандидозная инфекция маловероятна. Однако при отрицательном результате, но наличии типичных клинических симптомов (зуд, творожистые выделения), необходимо исключить другие виды Candida (C. glabrata, C. krusei, C. tropicalis, C. parapsilosis) с помощью мультиплексной ПЦР или посева.
• Положительный результат («обнаружено»):ДНК Candida albicans обнаружена в исследуемом образце. Указывает на наличие C. albicans в урогенитальном тракте (или другом локусе). Однако НЕ ВСЕГДА означает клинически значимый кандидоз! albicans может присутствовать в норме у 30-50% здоровых женщин (бессимптомное носительство). Клиническое значение зависит от:

• Количества C. albicans(при качественной ПЦР не оценивается – требуется количественный тест).
• Наличия симптомов(зуд, выделения, гиперемия, белый налет).
• Факторов риска(беременность, сахарный диабет, прием антибиотиков, глюкокортикоидов, иммунодефицит).

 

Интерпретация в зависимости от клинической ситуации:

• Положительный результат + наличие симптомов (зуд, творожистые выделения, гиперемия, белый налет на слизистых):

• Интерпретация:Кандидоз (молочница). Требует лечения антимикотиками (местно – клотримазол, миконазол, сертаконазол, эконазол; системно – флуконазол, итраконазол). При рецидивирующем течении – длительные курсы, лечение полового партнера, коррекция фоновых заболеваний (сахарный диабет, иммунодефицит).

 

Положительный результат + отсутствие симптомов (случайная находка при скрининге):

• Интерпретация:Бессимптомное носительство C. albicans (вариант нормы). Лечение обычно не требуется. Однако у беременных (риск преждевременных родов, инфицирования плода), перед гинекологическими операциями, у иммунокомпрометированных пациентов – лечение может быть рекомендовано.

 

Отрицательный результат + наличие симптомов (зуд, выделения):

• Интерпретация:Кандидоз маловероятен (но не исключен при низкой концентрации C. albicans или при кандидозе, вызванном другими видами Candida). Следует исключать:
  • Другие виды Candida (C. glabrata, C. krusei, C. tropicalis, C. parapsilosis) – требуется мультиплексная ПЦР или посев.
  • Бактериальный вагиноз (Gardnerella vaginalis, Atopobium vaginae).
  • Трихомониаз (Trichomonas vaginalis).
  • Аэробный вагинит (Streptococcus spp., Staphylococcus aureus, E. coli).
  • Дерматит, аллергическую реакцию, лихеноидные изменения.
• Рекомендуется мультиплексная ПЦР на Candida spp., Gardnerella, Trichomonas, Chlamydia, Mycoplasma.

 

Количественная ПЦР (соотношение Candida / лактобациллы):

• Количество C. albicans < 10^3 КОЕ/мл:Бессимптомное носительство. Лечение не требуется (кроме особых случаев – беременность, иммунодефицит).
• Количество C. albicans 10^3 – 10^4 КОЕ/мл:Пограничное значение. Может соответствовать бессимптомному носительству или легкому кандидозу (при наличии симптомов – лечение).
• Количество C. albicans > 10^4 КОЕ/мл:Клинически значимый кандидоз (особенно при наличии симптомов). Требует лечения.
• Соотношение Candida / лактобациллы > 1 (преобладание Candida):Высокая вероятность кандидоза.

 

Важные нюансы интерпретации:

• Виды Candida и устойчивость к флуконазолу: albicans в 90-95% случаев чувствительна к флуконазолу (стандартный препарат). C. glabrata часто устойчива к флуконазолу (40-60%), требует использования эхинокандинов (каспофунгин, микафунгин) или амфотерицина В. C. krusei устойчива к флуконазолу (врожденная резистентность), требует лечения вориконазолом, каспофунгином, амфотерицином В. Поэтому видовая идентификация Candida критически важнапри рецидивирующем кандидозе и неэффективности флуконазола.
• Рецидивирующий кандидозный вульвовагинит (РКВВ):Определение как минимум 4 эпизодов в год. Причины: персистенция одного штамма C. albicans (неэффективность лечения, короткий курс), устойчивость к флуконазолу (C. glabrata, C. krusei), реинфекция от полового партнера (у мужчин часто бессимптомное носительство), фоновые заболевания (сахарный диабет, ВИЧ, гипотиреоз, анемия, гиповитаминоз), гормональные нарушения (беременность, прием оральных контрацептивов, ЗГТ), длительный прием антибиотиков, глюкокортикоидов, иммуносупрессоров. Требуется комплексное обследование.
• Кандидоз у мужчин:Часто протекает бессимптомно (носительство) или с минимальными симптомами (легкое покраснение головки, редкий белый налет). Лечение рекомендуется при планировании беременности (для профилактики рецидивов у женщины), при симптомах (зуд, жжение, дискомфорт), при рецидивирующем кандидозе у партнерши. Препараты: флуконазол 150 мг однократно (или 1 раз в 3 дня, 2-3 дозы) + местные формы (клотримазол крем 1-2 раза в день 7-14 дней).
• Ложноположительный результат:Возможен при контаминации образца (несоблюдение правил асептики, загрязнение реагентов), при низком пороге детекции (обнаружение минимальных количеств ДНК, не имеющих клинического значения – бессимптомное носительство).
• Ложноотрицательный результат:Возможен при неправильном взятии материала (недостаточное количество эпителиальных клеток), при длительном хранении образца (деградация ДНК), при подавлении ПЦР (ингибиторы в образце – кровь, слизь, препараты для местного лечения), при очень низкой концентрации C. albicans (ниже предела чувствительности), при приеме антимикотиков до анализа, при наличии других видов Candida (C. glabrata, C. krusei, C. tropicalis), на которые праймеры могут не работать (если ПЦР специфична только к C. albicans).

 

Факторы, влияющие на результат

На результат качественного определения ДНК Candida albicans могут влиять различные преаналитические, аналитические и биологические факторы:

Преаналитические (до взятия материала):

• Прием антимикотиков (противогрибковых препаратов)за 5-7 дней до анализа – приводит к ложноотрицательным результатам (разрушение ДНК, подавление роста) . Это самый частый фактор ложноотрицательных результатов.
• Прием антибиотиковза 2-3 недели до анализа – снижает количество грибов (за счет подавления конкурирующей микрофлоры, но не действует на Candida). Может приводить к ложноотрицательным результатам (при низкой концентрации C. albicans).
• Использование вагинальных свечей, кремов, спринцеванийза 3-5 дней до анализа – может смывать эпителиальные клетки и удалять ДНК возбудителя (ложноотрицательный результат).
• Половой акт за 3 дня до анализа– может временно изменять микробиоту влагалища.
• Менструация– кровь содержит ингибиторы ПЦР, может вызывать ложноположительные (контаминация) или ложноотрицательные результаты. Анализ сдают после окончания менструации.
• Недостаточное количество эпителиальных клетокв соскобе – основная причина ложноотрицательных результатов (C. albicans ассоциирована с эпителием).
• Несоблюдение правил асептикипри взятии материала – контаминация образца посторонней ДНК (ложноположительный результат).

 

Аналитические (на этапе лабораторного исследования):

• Контаминация реагентов и лабораторной посудыампликонами (продуктами ПЦР) – ложноположительный результат. Современные лаборатории используют системы с УФ-деконтаминацией и раздельные зоны для выделения ДНК и амплификации.
• Ингибиторы ПЦРв образце (кровь, слизь, препараты для местного лечения) – ложноотрицательный результат.
• Нарушение температурного режима хранения транспортной среды(замораживание, перегрев) – деградация ДНК (ложноотрицательный результат).
• Чувствительность тест-системы:Разные коммерческие наборы имеют разную чувствительность (10-100 копий ДНК). Высокочувствительные тесты могут выявлять очень низкие концентрации C. albicans, что может приводить к гипердиагностике (обнаружение бессимптомного носительства).
• Специфичность праймеров:Некоторые праймеры могут давать перекрестные реакции с C. dubliniensis (генетически близкий вид) или с другими видами Candida. Использование родоспецифических праймеров (например, к гену ITS1/ITS2) позволяет дифференцировать виды.

 

Биологические факторы:

• Бессимптомное носительство C. albicans– самый частый фактор ложноположительных результатов (в интерпретации – положительный ПЦР, но нет клиники). Встречается у 30-50% здоровых женщин.
• Беременность– повышает колонизацию C. albicans (из-за изменения гормонального фона, повышения pH влагалища). Часто бессимптомное носительство.
• Сахарный диабет (особенно декомпенсированный, HbA1c > 7-8%)– повышает колонизацию C. albicans (глюкоза в выделениях – питательная среда для грибов).
• ВИЧ-инфекция (с CD4 < 200)– высокий риск кандидоза (в том числе инвазивного), но также и бессимптомного носительства.
• Гормональный фон– у женщин в постменопаузе (низкий эстрадиол) снижается количество лактобацилл, повышается pH, увеличивается риск кандидоза.

Лаборатория Бойченко гарантирует точность и достоверность результатов благодаря современному оборудованию и высоким стандартам качества.

---

Список литературы:

1. Клинические рекомендации Министерства здравоохранения РФ «Кандидозный вульвовагинит». 2021.
2. Клинические рекомендации Министерства здравоохранения РФ «Кандидоз кожи и слизистых оболочек». 2021.
3. Клинические рекомендации Министерства здравоохранения РФ «Инвазивный кандидоз». 2020.
4. Pappas P.G., Kauffman C.A., Andes D.R. et al. Clinical Practice Guideline for the Management of Candidiasis: 2016 Update by the Infectious Diseases Society of America. Clinical Infectious Diseases. 2016;62(4):e1-e50.
5. Sobel J.D. Recurrent vulvovaginal candidiasis. American Journal of Obstetrics and Gynecology. 2016;214(1):15-21.

 

ДНК микобактерий туберкулеза (Mycobacterium tuberculosis complex) методом ПЦР (качественное и количественное определение)

 

Краткая История

Туберкулез — одно из древнейших инфекционных заболеваний человека, известное со времен Гиппократа (V век до н.э.). Возбудитель туберкулеза — Mycobacterium tuberculosis — был открыт 24 марта 1882 года немецким микробиологом Робертом Кохом (Robert Koch), который окрасил бактерии по разработанному им методу (окраска по Цилю-Нильсену) и доказал их этиологическую роль в развитии заболевания. За это открытие Кох был удостоен Нобелевской премии по физиологии и медицине в 1905 году. В течение почти 100 лет «золотым стандартом» диагностики туберкулеза оставались бактериоскопия (микроскопия мазка) и культуральный метод (посев на питательные среды Левенштейна-Йенсена, Финна-II, Миддлбрука), которые имеют высокую специфичность, но низкую чувствительность (бактериоскопия — 30-60%) и требуют длительного времени (посев — 4-8 недель). В 1980-х годах с развитием полимеразной цепной реакции (ПЦР) (изобретена Кэри Муллисом в 1983 году, Нобелевская премия по химии 1993 года) стало возможным быстрое (4-6 часов) и высокочувствительное выявление ДНК микобактерий туберкулеза непосредственно в клиническом материале (мокрота, моча, ликвор, биоптаты). В 1990-2000-х годах были разработаны коммерческие тест-системы для ПЦР в реальном времени (Real-Time PCR), позволяющие не только обнаруживать ДНК M. tuberculosis complex (M. tuberculosis, M. bovis, M. africanum, M. canettii, M. microti, M. pinnipedii), но и определять устойчивость к рифампицину (мутации в гене rpoB) и изониазиду (мутации в генах katG, inhA), а также проводить генотипирование для эпидемиологического мониторинга. Сегодня ПЦР на микобактерии туберкулеза является методом выбора для экспресс-диагностики туберкулеза (особенно при бактериоскопически негативных формах, внелегочном туберкулезе, туберкулезном менингите, у ВИЧ-инфицированных пациентов).

 

Материал, используемый для исследования

• • Тип образца:Клинический материал в зависимости от предполагаемой локализации туберкулезного процесса.
  • Локализация забора материала (в зависимости от клинических проявлений):

• Легочный туберкулез (основная локализация, 80-85% случаев):Мокрота (утренняя, 5-10 мл, лучше индуцированная — после ингаляции гипертонического раствора хлорида натрия), бронхоальвеолярный лаваж (БАЛ) — при бронхоскопии, биоптат легкого (при трудной диагностике).
• Туберкулезный менингит:Ликвор (спинномозговая жидкость) — 1-2 мл, полученный при люмбальной пункции.
• Туберкулез мочеполовой системы:Утренняя порция мочи (средняя струя, 50-100 мл, лучше 3 дня подряд), эякулят (у мужчин), соскоб из уретры, биоптат почки.
• Туберкулез периферических лимфатических узлов:Пунктат лимфатического узла (1-2 мл), биоптат лимфоузла.
• Туберкулез кожи, костей, суставов, глаз:Биоптат тканей, экссудат, синовиальная жидкость, пунктат абсцесса.
• Туберкулез кишечника, брюшины:Биоптат кишечника (при колоноскопии), асцитическая жидкость (5-10 мл).
• Миллиарный туберкулез, туберкулезный сепсис:Кровь (5-10 мл, в пробирки с ЭДТА или цитратом, но лучше использовать специальные пробирки для ПЦР крови — с консервантом, предотвращающим деградацию ДНК).
  • Тип пробирки/системы сбора:Специальная пробирка с транспортной средой для ПЦР (содержит консервант, предотвращающий деградацию ДНК и рост бактерий). Для мокроты и мочи — стерильные пластиковые контейнеры с широким горлом. Для ликвора — стерильные пробирки (1,5-2 мл). Для крови — вакуумные пробирки с ЭДТА (фиолетовая крышечка) или цитратом (синяя крышечка), но лучше — специальные пробирки для ПЦР (с консервантом).
  • Объем материала:Мокрота — 5-10 мл; моча — 50-100 мл (центрифугируется); ликвор — 1-2 мл; кровь — 5-10 мл. Достаточное количество материала критически важно для чувствительности.
  • Обработка:После взятия материал должен быть доставлен в лабораторию в течение 1-2 часов (при комнатной температуре) или храниться при +2…+8°C не более 24-48 часов. Замораживание допускается (до нескольких месяцев при -20°C или -70°C), но снижает чувствительность. Перед ПЦР материал обрабатывают (деконтаминация, лизис клеток, выделение ДНК). Крайне важно: Микобактерии туберкулеза очень устойчивы во внешней среде, имеют плотную клеточную стенку, богатую липидами (миколовые кислоты), что затрудняет лизис и выделение ДНК. Требуется специальная пробоподготовка (лизис ферментами — протеиназа К, лизирующий буфер, нагревание до 95-100°C).

 

Как подготовиться к анализу

Подготовка к анализу на ДНК микобактерий туберкулеза зависит от типа клинического материала:

• Мокрота (основной материал):

• Собирается утренняя мокрота(натощак, после пробуждения, перед чисткой зубов и приемом пищи).
• Перед сбором прополоскать рот кипяченой водой (для удаления остатков пищи и микрофлоры полости рта).
• Сделать 2-3 глубоких вдоха и выдоха, затем глубокий вдох и откашлять мокротуиз глубоких отделов бронхов (не слюну!).
• Собрать 5-10 мл мокроты в стерильный пластиковый контейнер с широким горлом.
• При отсутствии мокроты (сухой кашель) — провести ингаляцию гипертонического раствора хлорида натрия (3-5%)через небулайзер в течение 15-20 минут для индукции мокроты.
• За 2-3 днядо сбора мокроты исключить прием антибиотиков (особенно рифампицина, изониазида, стрептомицина, фторхинолонов, аминогликозидов) — после консультации с врачом (нельзя отменять жизненно важные препараты!).
• В день сбора мокроты не использовать противокашлевые препараты.

 

Моча (при подозрении на туберкулез мочеполовой системы):

• Собирается утренняя порция мочи(средняя струя, после туалета наружных половых органов) в стерильный пластиковый контейнер (50-100 мл).
• За 2-3 дня исключить прием антибиотиков.
• Женщинам не рекомендуется сдавать анализ во время менструации.

 

Ликвор (спинномозговая жидкость) — при подозрении на туберкулезный менингит:

• Люмбальную пункцию проводит врач (невролог, нейрохирург, инфекционист) по показаниям. Анализ ликвора на ПЦР является экспресс-методом (результат через 4-6 часов).

 

Кровь (при подозрении на генерализованный туберкулез, миллиарный туберкулез, туберкулезный сепсис):

• Венозную кровь (5-10 мл) собирают в пробирку с ЭДТА (фиолетовая крышечка) или в специальную пробирку для ПЦР. За 2-3 дня исключить прием антибиотиков.

 

Общие требования:

• За 2-4 неделидо исследования (по возможности) исключить прием антибиотиков, особенно противотуберкулезных (рифампицин, изониазид, стрептомицин, этамбутол, пиразинамид, фторхинолоны, аминогликозиды) — они снижают концентрацию возбудителя и могут давать ложноотрицательный результат.
• Сообщить врачу о наличии острых инфекционных заболеваний (пневмония, бронхит, ОРВИ) — анализ следует отложить на 2-4 недели после выздоровления.
• Исключить употребление алкоголя за 24 часа до исследования.

 

Описание данного вещества (Mycobacterium tuberculosis complex и метод ПЦР)

Mycobacterium tuberculosis complex (MTC) — это группа генетически близких видов микобактерий, вызывающих туберкулез у человека и животных. В комплекс входят:

• Mycobacterium tuberculosis(основной возбудитель туберкулеза у человека, 95-98% случаев).
• Mycobacterium bovis(вызывает туберкулез у крупного рогатого скота, может заражать человека через некипяченое молоко).
• Mycobacterium africanum(вызывает туберкулез в Западной Африке).
• Mycobacterium canettii(редкий вид, вызывает туберкулез у людей с иммунодефицитом).
• Mycobacterium microti(вызывает туберкулез у полевок, редко у человека).
• Mycobacterium pinnipedii(вызывает туберкулез у тюленей).

 

Характеристики микобактерий туберкулеза:

• Кислотоустойчивость:Бактерии имеют плотную клеточную стенку, богатую липидами (миколовые кислоты, фтиоцерановый димикоцеросат), что придает им устойчивость к кислотам, щелочам, спиртам, детергентам, многим антибиотикам, а также устойчивость во внешней среде (выживают в мокроте до 6-12 месяцев, в пыли до 3-4 месяцев).
• Медленный рост:Время генерации 18-24 часа (для сравнения: у E. coli — 20 минут). На плотных питательных средах (Левенштейна-Йенсена) колонии появляются через 4-8 недель.
• Облигатный аэроб:Требует кислород для роста, поэтому поражает преимущественно верхние отделы легких (верхушки), а также почки, кости, мозговые оболочки.
• Внутриклеточный паразит:Размножается внутри макрофагов, уклоняясь от иммунного ответа (подавляет фаголизосомальное слияние, выживает в фагосомах).

 

Метод ПЦР (полимеразная цепная реакция):

• Качественная ПЦР:Определяет наличие (обнаружено/не обнаружено) ДНК микобактерий туберкулеза в клиническом образце. Чувствительность метода — 10-100 копий ДНК в пробе (или 1-10 бактерий). Позволяет обнаружить M. tuberculosis в мокроте при бактериоскопии (микроскопия мазка) «+» (10-100 бактерий в поле зрения) и даже «-» (единичные бактерии).
• Количественная ПЦР (Real-Time PCR):Позволяет не только обнаружить ДНК микобактерий туберкулеза, но и определить их количество (КОЕ/мл или геном-эквивалент/мл). Важно для оценки эффективности лечения (снижение ДНК на фоне противотуберкулезной терапии), а также для дифференциации активного туберкулеза (высокое количество) от латентной инфекции (низкое количество, но ДНК может вообще не определяться в крови/мокроте при латентной форме).
• Мультиплексная ПЦР (с детекцией мутаций устойчивости):Позволяет одновременно выявить ДНК M. tuberculosis complex и определить устойчивость к рифампицину (мутации в гене rpoB — 95% случаев устойчивости) и изониазиду (мутации в генах katG, inhA). Это критически важно для назначения правильного режима химиотерапии (для лекарственно-чувствительного туберкулеза — 4 препарата: изониазид, рифампицин, этамбутол, пиразинамид; для МЛУ-ТБ — препараты резерва).
• Специфичность:Очень высокая (98-100%) при использовании специфических праймеров к участкам ДНК, уникальным для M. tuberculosis complex (например, к гену IS6110 (вставка 6110) — многокопийный элемент, присутствующий у M. tuberculosis complex, но отсутствующий у нетуберкулезных микобактерий (NTM) — M. avium, M. intracellulare, M. kansasii, M. abscessus, M. chelonae и др.). IS6110 позволяет повысить чувствительность (до 1-10 бактерий) благодаря наличию 10-25 копий на геном.
• Чувствительность:Очень высокая (90-98% для легочного туберкулеза с бактериоскопией «+»; 60-80% для бактериоскопии «-»; 40-60% для внелегочного туберкулеза). Чувствительность зависит от типа материала, стадии заболевания, приема антибиотиков.

 

Диагностика заболеваний

Качественное (и количественное) определение ДНК микобактерий туберкулеза используется для:

1. Экспресс-диагностики туберкулеза легких (легочный туберкулез):Это основное показание. ПЦР позволяет получить результат через 4-6 часов (посев — 4-8 недель, бактериоскопия — 1-2 дня). Особенно важна при бактериоскопически негативных формах (мазок «-»), когда в мокроте мало бактерий (< 10^4 КОЕ/мл), но клинические и рентгенологические признаки туберкулеза есть. ПЦР рекомендуется проводить в дополнение к бактериоскопии и посеву (не вместо них!).
2. Диагностики внелегочного туберкулеза (туберкулезный менингит, туберкулез мочеполовой системы, туберкулез лимфатических узлов, костей, суставов, кишечника, брюшины):При внелегочных формах бактериоскопия часто отрицательна (мало бактерий, трудность получения материала). ПЦР имеет чувствительность 40-80% (зависит от материала и стадии). Для туберкулезного менингита ПЦР ликвора — метод выбора (чувствительность 50-80%, специфичность 95-100%).
3. Диагностики туберкулеза у ВИЧ-инфицированных пациентов:У ВИЧ-инфицированных (особенно с CD4 < 200) часто развиваются внелегочные и диссеминированные формы туберкулеза (миллиарный туберкулез, туберкулезный менингит, туберкулез лимфоузлов), бактериоскопия мокроты часто отрицательна (из-за низкой бактериальной нагрузки). ПЦР (кровь, ликвор, пунктаты) значительно повышает выявляемость.
4. Диагностики туберкулеза у детей:У детей (особенно раннего возраста) часто трудно получить мокроту (заменяют промывными водами желудка), бактериоскопия малоинформативна (низкая бактериальная нагрузка). ПЦР (промывные воды желудка, индуцированная мокрота, биоптаты) повышает выявляемость.
5. Определения лекарственной устойчивости (МЛУ-ТБ, ШЛУ-ТБ):Мультиплексная ПЦР (например, GeneXpert MTB/RIF, Hain GenoType MTBDRplus) позволяет выявить устойчивость к рифампицину (RIF) и изониазиду (INH) за 2-4 часа. Это критически важно для назначения правильной терапии (при МЛУ-ТБ требуется 5-6 препаратов резерва, длительность лечения 18-24 месяца).
6. Мониторинга эффективности противотуберкулезной терапии (количественная ПЦР):Определение количества ДНК M. tuberculosis в мокроте в динамике (до лечения, через 2 недели, 1, 2, 4, 6 месяцев). Снижение ДНК в 2-4 log (в 100-10000 раз) через 2-4 недели — благоприятный прогноз. Сохранение высокого уровня ДНК через 2-3 месяца — неэффективность лечения (устойчивость). Однако ПЦР не дифференцирует живые бактерии от мертвых (ДНК может сохраняться 2-4 недели после гибели бактерий), поэтому для контроля излеченности «золотым стандартом» остается посев (отрицательный через 2-6 месяцев).
7. Дифференциальной диагностики туберкулеза и нетуберкулезных микобактериозов (NTM):Нетуберкулезные микобактерии (M. avium, M. intracellulare, M. kansasii, M. abscessus, M. chelonae) вызывают заболевания, сходные с туберкулезом, у иммунокомпрометированных пациентов (ВИЧ, муковисцидоз, ХОБЛ). ПЦР со специфическими праймерами к IS6110 (присутствует только у M. tuberculosis complex) позволяет их дифференцировать.

 

Цель исследования

Основные цели качественного (и количественного) определения ДНК микобактерий туберкулеза:

1. Экспресс-диагностика туберкулеза легких (особенно бактериоскопически негативных форм, ВИЧ-ассоциированного туберкулеза, туберкулеза у детей).
2. Диагностика внелегочного туберкулеза(менингит, мочеполовой туберкулез, туберкулез лимфатических узлов, костей, кишечника, брюшины).
3. Выявление лекарственной устойчивости (МЛУ-ТБ, ШЛУ-ТБ)к рифампицину и изониазиду (GeneXpert MTB/RIF, Hain GenoType MTBDRplus) для назначения правильной терапии.
4. Мониторинг эффективности противотуберкулезной терапии(количественная ПЦР в динамике).
5. Дифференциальная диагностика туберкулеза и нетуберкулезных микобактериозов (NTM).
6. Эпидемиологический мониторинг (генотипирование, молекулярное типирование)— для выявления вспышек туберкулеза, отслеживания путей передачи, дифференциации рецидива от реинфекции.
7. Скрининг контактных лиц (в очагах туберкулезной инфекции)— ПЦР мокроты у бессимптомных контактных лиц может выявить ранние формы туберкулеза (до развития симптомов).

 

Что значат полученные результаты

Интерпретация результатов определения ДНК микобактерий туберкулеза всегда проводится врачом-фтизиатром, пульмонологом, инфекционистом в контексте клинической картины (кашель > 2-3 недель, лихорадка, ночная потливость, потеря веса, кровохарканье), данных рентгенографии/КТ органов грудной клетки (инфильтрат, каверна, диссеминация), туберкулиновых проб (проба Манту, Диаскинтест), а также с учетом результатов бактериоскопии и посева. Референсное значение – «не обнаружено» (для качественной ПЦР) .

 

Референсные значения (качественная ПЦР):

• Отрицательный результат («не обнаружено»):ДНК микобактерий туберкулеза в исследуемом образце не обнаружена (или концентрация ниже предела чувствительности метода, обычно < 10-100 копий ДНК). Туберкулез маловероятен (но не исключен при низкой бактериальной нагрузке, ранней стадии, внелегочных формах, приеме антибиотиков). Чувствительность ПЦР не 100% (90-98% для легочного туберкулеза с бактериоскопией «+», 60-80% для бактериоскопии «-», 40-60% для внелегочного). При отрицательном результате, но высоком клиническом подозрении на туберкулез, рекомендуется повторить исследование через 2-4 недели (или исследовать другой материал).
• Положительный результат («обнаружено»):ДНК микобактерий туберкулеза обнаружена в исследуемом образце. Указывает на наличие M. tuberculosis complex в организме. С высокой вероятностью соответствует активному туберкулезу (особенно при наличии клинических и рентгенологических симптомов). Однако возможны ложноположительные результаты (контаминация лабораторной посуды, реагентов) и выявление ДНК у пациентов с латентной туберкулезной инфекцией (ЛТИ) без активного заболевания (редко, при очень высокой чувствительности ПЦР).

 

Количественная ПЦР (Real-Time PCR, количество ДНК в КОЕ/мл или геном-эквивалент/мл):

• < 10^2 – 10^3 КОЕ/мл (низкая бактериальная нагрузка):Сомнительный результат. Может соответствовать ранней стадии туберкулеза, латентной инфекции (редко), низкой эффективности отхаркивания (мало бактерий в мокроте), приему антибиотиков. Требует повторного исследования (мокрота, БАЛ, биоптат) через 2-4 недели.
• 10^3 – 10^5 КОЕ/мл (умеренная бактериальная нагрузка):Характерна для активного туберкулеза с бактериоскопией «+» (1-10 бактерий в поле зрения). Требует лечения.
• > 10^5 КОЕ/мл (высокая бактериальная нагрузка):Характерна для активного деструктивного туберкулеза (каверны, массивное бактериовыделение), бактериоскопия «++» или «+++». Высокая эпидемиологическая опасность (заразность для окружающих). Требует госпитализации и интенсивной терапии.
• Динамика (снижение на 2-4 log через 2-4 недели лечения):Благоприятный прогноз, эффективность терапии.
• Отсутствие снижения или рост через 2-3 месяца:Неэффективность лечения, подозрение на лекарственную устойчивость (МЛУ-ТБ, ШЛУ-ТБ). Требуется определение лекарственной чувствительности.

 

Интерпретация в зависимости от клинической ситуации:

• Положительный ПЦР + клинические симптомы (кашель > 2-3 недель, лихорадка, ночная потливость, потеря веса, кровохарканье) + рентгенологические изменения (инфильтрат, каверна, диссеминация):

• Интерпретация:Активный туберкулез легких (или другой локализации). Требует госпитализации (при бактериовыделении), назначения противотуберкулезной терапии (I режим: изониазид, рифампицин, этамбутол, пиразинамид), изоляции (при легочной форме), эпидемиологического расследования (выявление контактных лиц).

 

Положительный ПЦР + отсутствие симптомов (случайная находка при скрининге контактных лиц, флюорография без патологии):

• Интерпретация:Возможна латентная туберкулезная инфекция (ЛТИ) (редко ДНК в мокроте/крови), или ранняя стадия (до развития симптомов), или ложноположительный результат. Требует тщательного обследования (Диаскинтест, проба Манту, КТ органов грудной клетки, повторная ПЦР через 1-3 месяца). При ЛТИ лечение не всегда требуется (только у лиц с высоким риском реактивации: ВИЧ, контактные, дети, пациенты с иммуносупрессией).

 

Положительный ПЦР + ВИЧ-инфекция (особенно CD4 < 200):

• Интерпретация:Туберкулез (часто внелегочный, диссеминированный, с низкой бактериальной нагрузкой) . Требует немедленного начала противотуберкулезной терапии (I режим) и антиретровирусной терапии (АРТ) через 2-8 недель после начала лечения туберкулеза.

 

Положительный ПЦР + бактериоскопия «-» (микроскопия мазка отрицательная):

• Интерпретация:Бактериоскопически негативный туберкулез (мало бактерий, < 10^4 КОЕ/мл). ПЦР позволяет подтвердить диагноз. Требует лечения (I режим).

 

Отрицательный ПЦР + бактериоскопия «+» (микроскопия положительная):

• Интерпретация:Возможно, ПЦР ложноотрицательна (ингибиторы в образце, неправильное хранение, прием антибиотиков). Рекомендуется повторить ПЦР, провести посев. Лечение назначается на основании клинико-рентгенологических данных и бактериоскопии.

 

Отрицательный ПЦР + высокое клиническое подозрение на туберкулез (рентгенологические изменения, контакт с больным туберкулезом, положительные пробы Манту/Диаскинтест):

• Интерпретация:Туберкулез не исключен (чувствительность ПЦР 60-90%). Рекомендуется:
  • Повторить ПЦР через 2-4 недели.
  • Исследовать другой материал (БАЛ, биоптат, ликвор, мочу).
  • Провести посев (4-8 недель).
  • Назначить пробное лечение (по решению фтизиатрической комиссии).

 

Важные нюансы интерпретации:

• Ложноположительный результат:Возможен при контаминации образца (несоблюдение правил асептики, загрязнение лабораторной посуды и реагентов ампликонами), при низком пороге детекции (обнаружение единичных копий ДНК, не имеющих клинического значения). Частота ложноположительных результатов в хорошо организованных лабораториях составляет менее 1-2%.
• Ложноотрицательный результат:Возможен при неправильном взятии материала (мало мокроты, слюна вместо мокроты), при длительном хранении (деградация ДНК), при наличии ингибиторов ПЦР в образце (кровь, слизь, лекарства), при очень низкой бактериальной нагрузке (< 10-100 бактерий в пробе), при приеме противотуберкулезных антибиотиков до анализа, при внелегочных формах (низкое содержание бактерий в исследуемом материале). Частота ложноотрицательных результатов: 10-40% (зависит от типа материала и стадии заболевания).
• ПЦР не дифференцирует живые бактерии от мертвых:ДНК может сохраняться 2-4 недели после гибели бактерий (после начала лечения). Поэтому положительная ПЦР через 1-2 месяца лечения не обязательно означает неэффективность (может быть ДНК мертвых бактерий). Для контроля излеченности «золотой стандарт» – посев (отрицательный через 2-6 месяцев). Количественная ПЦР (снижение ДНК) более информативна, чем качественная.
• GeneXpert MTB/RIF (Xpert MTB/RIF) – автоматизированная ПЦР в реальном времени:Позволяет одновременно выявить ДНК M. tuberculosis complex и мутации устойчивости к рифампицину (rpoB). Чувствительность: 95-98% для бактериоскопии «+», 60-80% для бактериоскопии «-». Результат через 2-4 часа. Рекомендован ВОЗ для первичной диагностики туберкулеза (особенно у ВИЧ-инфицированных, детей, при внелегочных формах).
• Дифференциация M. tuberculosis complex и нетуберкулезных микобактерий (NTM):Если ПЦР с праймерами к IS6110 отрицательная, а клинические и рентгенологические признаки «туберкулеза» есть – следует подозревать NTM (M. avium, M. intracellulare, M. kansasii, M. abscessus, M. chelonae). Требуется ПЦР с другими праймерами (специфичными к NTM) или посев на среду Левенштейна-Йенсена с последующей идентификацией.

 

Факторы, влияющие на результат

На результат определения ДНК микобактерий туберкулеза могут влиять различные преаналитические, аналитические и биологические факторы:

 

Преаналитические (до взятия материала):

• Прием противотуберкулезных антибиотиков(рифампицин, изониазид, стрептомицин, этамбутол, пиразинамид, фторхинолоны, аминогликозиды) за 2-4 недели до анализа – приводит к ложноотрицательным результатам (снижение бактериальной нагрузки, разрушение ДНК). Это самый частый фактор ложноотрицательных результатов.
• Неправильный сбор материала:Сбор слюны вместо мокроты (ложноотрицательный), недостаточный объем мочи (менее 50 мл), длительное хранение при комнатной температуре (деградация ДНК).
• Недостаточное количество материала:Мокроты менее 5 мл, ликвора менее 1 мл.
• Несоблюдение правил асептикипри взятии материала – контаминация образца микобактериями из внешней среды (ложноположительный результат).

 

Аналитические (на этапе лабораторного исследования):

• Контаминация реагентов и лабораторной посудыампликонами (продуктами ПЦР) – ложноположительный результат. Современные лаборатории используют системы с УФ-деконтаминацией и раздельные зоны для выделения ДНК и амплификации.
• Ингибиторы ПЦРв образце (кровь, слизь, гемоглобин, мочевая кислота, препараты для местного лечения) – ложноотрицательный результат. Требуется специальная пробоподготовка (очистка ДНК).
• Нарушение температурного режима хранения транспортной среды(замораживание, перегрев) – деградация ДНК (ложноотрицательный результат).
• Чувствительность тест-системы:Разные коммерческие наборы имеют разную чувствительность (10-100 копий ДНК). Высокочувствительные тесты (например, на основе IS6110, многокопийного элемента) более чувствительны, но могут выявлять очень низкие концентрации ДНК, не имеющие клинического значения (контаминация).
• Недостаточный лизис клеток:Микобактерии туберкулеза имеют плотную клеточную стенку, богатую липидами (миколовые кислоты), что затрудняет лизис и выделение ДНК. Требуется специальная пробоподготовка (протеиназа К, детергенты, нагревание).

 

Биологические факторы:

• Латентная туберкулезная инфекция (ЛТИ):ДНК M. tuberculosis может обнаруживаться в крови/мокроте у пациентов с ЛТИ (при очень высокой чувствительности ПЦР), но они не заразны и не имеют симптомов. Дифференциальная диагностика с активным туберкулезом проводится на основании клинико-рентгенологических данных, Диаскинтеста, посева.
• ВИЧ-инфекция (с CD4 < 200):У таких пациентов часто низкая бактериальная нагрузка, что снижает чувствительность ПЦР (ложноотрицательные результаты). Рекомендуется использовать GeneXpert MTB/RIF (более чувствительный).
• Внелегочный туберкулез:Низкая концентрация микобактерий в материале (ликвор, моча, пунктаты, биоптаты) снижает чувствительность ПЦР (40-60%).
• Туберкулез у детей:Часто низкая бактериальная нагрузка, трудность получения мокроты (замена на промывные воды желудка). Чувствительность ПЦР ниже, чем у взрослых.

Лаборатория Бойченко гарантирует точность и достоверность результатов благодаря современному оборудованию и высоким стандартам качества.

---

Список литературы:

1. Клинические рекомендации Министерства здравоохранения РФ «Туберкулез у взрослых». 2022.
2. Клинические рекомендации Министерства здравоохранения РФ «Туберкулез у детей». 2021.
3. Клинические рекомендации Министерства здравоохранения РФ «Внелегочный туберкулез». 2020.
4. World Health Organization (WHO). WHO consolidated guidelines on tuberculosis. Module 3: Diagnosis – Rapid diagnostics for tuberculosis detection. 2021.
5. Lawn S.D., Nicol M.P. Xpert MTB/RIF assay: development, evaluation and implementation of a new rapid molecular diagnostic for tuberculosis and rifampicin resistance. Future Microbiology. 2011;6(9):1067-1082.

 

ДНК Mycoplasma genitalium (микоплазма гениталиум) методом ПЦР (качественное и количественное определение)

 

Краткая История

Mycoplasma genitalium была впервые выделена в 1980 году из уретры двух мужчин с негонококковым уретритом группой исследователей под руководством Дэвида Тейлора-Робинсона (David Taylor-Robinson) в Великобритании. Долгое время M. genitalium оставалась «забытой» инфекцией из-за трудностей культивирования (микоплазмы не растут на стандартных бактериологических средах, требуют специальных питательных сред с холестерином, сывороткой, дрожжевым экстрактом, а M. genitalium растет очень медленно – 2-6 месяцев, что делает культуральный метод непригодным для рутинной диагностики). В 1990-2000-х годах, с развитием полимеразной цепной реакции (ПЦР), стало возможным быстрое (4-6 часов) и высокочувствительное выявление ДНК M. genitalium в урогенитальных образцах (соскоб из уретры, цервикального канала, первая порция мочи, эякулят). В 2010-2020-х годах были разработаны коммерческие тест-системы для ПЦР в реальном времени (Real-Time PCR) и мультиплексной ПЦР (одновременное выявление M. genitalium, Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae, Mycoplasma hominis, Ureaplasma urealyticum, Trichomonas vaginalis), а также тесты для определения мутаций устойчивости к макролидам (азитромицин) и фторхинолонам (моксифлоксацин). Сегодня ПЦР на M. genitalium является «золотым стандартом» диагностики инфекции, вызванной этим микроорганизмом, особенно у пациентов с персистирующим или рецидивирующим уретритом, цервицитом, а также при бесплодии и невынашивании беременности.

 

Материал, используемый для исследования

• • Тип образца:Урогенитальный соскоб (эпителиальные клетки слизистых оболочек), первая порция утренней мочи (для мужчин), эякулят, секрет предстательной железы.
  • Локализация забора материала (в зависимости от пола и клинических проявлений):

• У женщин:Соскоб из цервикального канала (эндоцервикальный соскоб) – основной материал, соскоб из уретры (при наличии симптомов уретрита), из заднего свода влагалища (реже).
• У мужчин:Первая порция утренней мочи (10-20 мл) – неинвазивный и высокочувствительный метод (предпочтителен для скрининга), соскоб из уретры (на глубину 2-4 см, более чувствителен, чем моча, но инвазивен), эякулят (при подозрении на простатит, эпидидимит), секрет предстательной железы.
  • Тип пробирки/системы сбора:Специальная пробирка с транспортной средой для ПЦР (содержит консервант, предотвращающий деградацию ДНК и рост бактерий). Используются коммерческие системы: «Инцит-тампон» (Incyte Swab), пробирки с транспортной средой для ПЦР (например, «ДНК-сорб», «АмплиСенс», «Эппендорф»). Для мочи – стерильный пластиковый контейнер с широким горлом (10-20 мл). Важно: Обычные мазки на стекле для ПЦР не пригодны (необходим транспорт для сохранения ДНК).
  • Объем материала:Достаточное количество эпителиальных клеток (для соскоба) или 10-20 мл первой порции утренней мочи. Недостаточное количество клеток – причина ложноотрицательных результатов.
  • Обработка:После взятия материала тампон/зонд тщательно споласкивается в транспортной среде (несколько вращательных движений), затем отжимается о стенки пробирки и удаляется. Пробирка плотно закрывается и маркируется (ФИО пациента, дата, время взятия, локализация). Доставка в лабораторию осуществляется в день взятия (или в течение 12 часов при хранении при +2…+8°C). Замораживание не допускается. Стабильность ДНК в транспортной среде при комнатной температуре – до 21 дня (в зависимости от системы сбора), при +2…+8°C – до 24-48 часов.

 

Как подготовиться к анализу

Подготовка к анализу критически важна для получения достоверного результата (исключение ложноотрицательных результатов и контаминации):

 

Женщины:

• Исследование рекомендуется проводить до менструации или через 2-5 дней после её окончания.
• За 3 днядо взятия материала исключить: половые контакты, вагинальные спринцевания, использование вагинальных свечей, таблеток, кремов, гелей, тампонов.
• За 5-7 днейдо взятия материала прекратить использование антибактериальных препаратов местно (вагинально) и системно (внутрь, инъекционно) – после консультации с врачом (нельзя отменять жизненно важные препараты!).
• В день взятия материала не проводить гигиенические процедуры с использованием антисептиков для подмывания (только чистая вода).

 

Мужчины:

• За 3 днядо взятия материала исключить половые контакты.
• За 5-7 днейдо взятия материала прекратить прием антибактериальных препаратов (после консультации с врачом).
• Для соскоба из уретры:Перед взятием материала не мочиться в течение 3-4 часов.
• Для первой порции утренней мочи:Собирают первую утреннюю порцию мочи (10-20 мл) после ночного сна (за 3-4 часа до сбора мочи не мочиться). Собирают в стерильный пластиковый контейнер.
• Накануне и в день взятия материала не использовать антисептики для туалета половых органов.

 

Общие требования:

• За 2-3 неделидо исследования исключить прием антибиотиков (системно) – по согласованию с врачом (особенно макролидов – азитромицин, джозамицин, кларитромицин, эритромицин; тетрациклинов – доксициклин; фторхинолонов – левофлоксацин, моксифлоксацин, офлоксацин; аминогликозидов; азидов). Mycoplasma genitalium очень чувствительна к макролидам и тетрациклинам, и даже короткий курс антибиотиков может привести к ложноотрицательному результату.
• Сообщить врачу о наличии острых инфекционных заболеваний (лихорадка, ОРВИ, ангина) – анализ следует отложить на 2-4 недели после выздоровления.
• Исключить употребление алкоголя за 24 часа до исследования.
• В день взятия материала не курить за 1-2 часа (по возможности).

 

Описание данного вещества (Mycoplasma genitalium и метод ПЦР)

Mycoplasma genitalium – это грамотрицательная, факультативно-анаэробная, очень мелкая бактерия (0,3-0,6 мкм), не имеющая клеточной стенки (что делает её устойчивой к пенициллинам, цефалоспоринам и другим антибиотикам, действующим на синтез клеточной стенки). Относится к классу Mollicutes («мягкокожие»). M. genitalium является облигатным паразитом человека (не растет вне организма), колонизирует эпителий мочеполового тракта (уретры, цервикального канала, эндометрия, маточных труб, предстательной железы).

 

Особенности M. genitalium:

• Минимальный геном:Размер генома – 580-600 тысяч пар оснований (один из самых маленьких среди свободноживущих организмов, в 2-3 раза меньше, чем у Chlamydia trachomatis). Кодирует всего 470-500 белков.
• Отсутствие клеточной стенки:Придает пластичность (фильтруется через бактериальные фильтры), устойчивость к β-лактамным антибиотикам, атипичную форму колоний (напоминают «яичницу-глазунью»).
• Скорость роста:Очень медленная (время генерации 16-24 часа), колонии на специальных средах (SP-4) появляются через 2-6 месяцев (непригодно для рутинной диагностики).
• Патогенность:Прикрепляется к эпителиальным клеткам с помощью терминального органеллы (структура, напоминающая «шейку»), выделяет нуклеазы, фосфолипазы, эндотоксины, вызывает хроническое воспаление, повреждение ресничек эпителия, апоптоз клеток. Способна проникать внутрь клеток (внутриклеточная персистенция), что затрудняет эрадикацию антибиотиками.

 

Клинические проявления инфекции M. genitalium:

 

У мужчин:

• Негонококковый уретрит (НГУ):Уретральные выделения (слизисто-гнойные, часто скудные), дизурия (жжение, резь при мочеиспускании), зуд, дискомфорт. M. genitalium выявляется у 15-25% мужчин с НГУ (второй по частоте после Chlamydia trachomatis).
• Хронический простатит, эпидидимит (редко).
• Бесплодие (снижение подвижности сперматозоидов, агглютинация, повреждение ДНК сперматозоидов).

 

У женщин:

• Цервицит (воспаление шейки матки):Слизисто-гнойные выделения, контактная кровоточивость (кровь после полового акта, осмотра). Часто бессимптомное течение (у 50-70% женщин).
• Уретрит (уретральный синдром):Дизурия, учащенное мочеиспускание.
• Эндометрит, сальпингит (воспаление маточных труб):Боли внизу живота, нарушение менструального цикла, межменструальные кровотечения.
• Бесплодие (трубное бесплодие, спаечный процесс, нарушение имплантации эмбриона), привычное невынашивание беременности, преждевременные роды.

 

Особенности:

• У 50-70% женщин и 30-50% мужчин инфекция протекает бессимптомно(бессимптомное носительство).
• genitalium является облигатным патогеном(в отличие от M. hominis и Ureaplasma, которые могут быть частью нормальной микрофлоры у здоровых людей). Обнаружение M. genitalium всегда требует лечения.

 

Метод ПЦР (полимеразная цепная реакция):

• Качественная ПЦР:Определяет наличие (обнаружено/не обнаружено) ДНК M. genitalium в образце. Не позволяет оценить количество бактерий. Чувствительность метода – 10-100 копий ДНК в пробе (или 1-10 бактерий). Специфичность – 98-100%.
• Количественная ПЦР (Real-Time PCR):Позволяет не только обнаружить ДНК M. genitalium, но и определить её количество (КОЕ/мл или геном-эквивалент/мл). Это важно для оценки эффективности лечения (снижение ДНК на фоне антибиотикотерапии), а также для дифференциации активной инфекции (высокое количество) от низкого носительства (редко).
• Мультиплексная ПЦР (сочетанное выявление нескольких возбудителей):Одновременное выявление M. genitalium, Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae, Mycoplasma hominis, Ureaplasma urealyticum, Trichomonas vaginalis, Gardnerella vaginalis. Позволяет быстро (4-6 часов) получить полную картину урогенитальной инфекции.
• ПЦР для выявления мутаций устойчивости:Определение мутаций в генах 23S rRNA (устойчивость к макролидам – азитромицин, джозамицин, кларитромицин, эритромицин) и в генах parC, gyrA (устойчивость к фторхинолонам – моксифлоксацин, левофлоксацин, офлоксацин). Это критически важно для выбора правильной терапии, так как M. genitalium быстро приобретает устойчивость к антибиотикам (особенно к азитромицину, который ранее был препаратом выбора).
• Специфичность:Высокая (98-100%). Современные праймеры специфичны к ДНК M. genitalium и не перекрестно реагируют с другими микоплазмами (M. hominis, M. pneumoniae, M. fermentans), уреаплазмами, хламидиями, гонококками.
• Чувствительность:Очень высокая (90-98% для соскоба из уретры/цервикального канала; 80-90% для первой порции мочи у мужчин). Чувствительность зависит от типа материала, стадии заболевания, приема антибиотиков.

 

Диагностика заболеваний

Качественное (и количественное) определение ДНК Mycoplasma genitalium используется для:

1. Диагностики негонококкового уретрита (НГУ) у мужчин:Это основное показание. У мужчин с симптомами уретрита (выделения, дизурия), у которых не выявлены N. gonorrhoeae и C. trachomatis. M. genitalium является причиной 15-25% случаев НГУ. ПЦР позволяет быстро подтвердить этиологию.
2. Диагностики персистирующего и рецидивирующего уретрита у мужчин:У мужчин, у которых после лечения (например, доксициклином, который неэффективен против M. genitalium) симптомы сохраняются или возвращаются. ПЦР позволяет выявить M. genitalium (часто устойчивый к доксициклину) и назначить правильный антибиотик (азитромицин или моксифлоксацин).
3. Диагностики цервицита у женщин:У женщин с симптомами цервицита (слизисто-гнойные выделения, контактная кровоточивость), а также у женщин с «идиопатическими» болями внизу живота, межменструальными кровотечениями. M. genitalium выявляется у 10-30% женщин с цервицитом.
4. Обследования при бесплодии и привычном невынашивании беременности: genitalium ассоциирована с трубным бесплодием (спаечный процесс в маточных трубах), эндометритом (нарушение имплантации эмбриона), привычным невыкидышем (особенно на ранних сроках), преждевременными родами. Обнаружение M. genitalium у бесплодных пар или женщин с привычным невынашиванием требует лечения.
5. Скрининга инфекций, передаваемых половым путем (ИППП):Рекомендуется проводить обследование на M. genitalium (вместе с C. trachomatis, N. gonorrhoeae, T. vaginalis) у сексуально активных молодых людей (до 25-30 лет), у лиц с несколькими половыми партнерами, практикующих незащищенный секс, у пациентов с другими ИППП. Однако ВОЗ не рекомендует рутинный скрининг бессимптомных лиц (в отличие от хламидиоза и гонореи) из-за высокого риска развития антибиотикорезистентности при необоснованном лечении.
6. Обследования перед планированием беременности (прегравидарная подготовка):У женщин, планирующих беременность, для выявления и лечения M. genitalium до наступления беременности (для снижения риска невынашивания, преждевременных родов, внутриутробного инфицирования).
7. Контроля излеченности после лечения:ПЦР (качественная или количественная) через 3-4 недели после окончания курса антибиотиков (более раннее исследование может дать ложноотрицательный результат? – наоборот, может быть ложноположительный? Через 3-4 недели после лечения, если ДНК сохраняется – лечение неэффективно). Цель – отрицательный результат (или снижение ДНК в 100-1000 раз при количественной ПЦР).
8. Выявления устойчивости к антибиотикам (макролидам, фторхинолонам):ПЦР с детекцией мутаций в генах 23S rRNA (устойчивость к азитромицину) и parC/gyrA (устойчивость к моксифлоксацину). Результат позволяет назначить рациональную терапию (избегая неэффективных препаратов). Особенно важно при рецидивирующем течении, неэффективности азитромицина.

 

Цель исследования

Основные цели качественного (и количественного) определения ДНК Mycoplasma genitalium:

1. Диагностика негонококкового уретрита (НГУ) у мужчин(особенно при отрицательных результатах на C. trachomatis и N. gonorrhoeae).
2. Диагностика персистирующего и рецидивирующего уретрита у мужчин(после неэффективного лечения доксициклином или другими антибиотиками).
3. Диагностика цервицита у женщин(особенно при отрицательных результатах на C. trachomatis и N. gonorrhoeae).
4. Обследование при бесплодии (женском и мужском), привычном невынашивании беременности, преждевременных родах.
5. Выявление антибиотикорезистентности (к макролидам и фторхинолонам)для выбора рациональной терапии.
6. Контроль излеченности после лечения(через 3-4 недели после окончания курса антибиотиков).
7. Обследование половых партнеров(при выявлении M. genitalium у одного из партнеров, второй партнер также должен быть обследован и пролечен, даже при отсутствии симптомов).

 

Что значат полученные результаты

Интерпретация результатов определения ДНК Mycoplasma genitalium всегда проводится врачом-дерматовенерологом, урологом, гинекологом, инфекционистом в контексте клинической картины (наличие уретрита, цервицита, болей внизу живота, выделений, нарушений фертильности), а также с учетом результатов других тестов (выявление C. trachomatis, N. gonorrhoeae, T. vaginalis, Ureaplasma, Mycoplasma hominis). Референсное значение – «не обнаружено» (для качественной ПЦР) .

 

Референсные значения (качественная ПЦР):

• Отрицательный результат («не обнаружено»):ДНК Mycoplasma genitalium в исследуемом образце не обнаружена (или концентрация ниже предела чувствительности метода, обычно < 10-100 копий ДНК). Инфекция M. genitalium маловероятна. Однако при отрицательном результате, но наличии клинических симптомов (уретрит, цервицит, бесплодие), необходимо исключать другие причины (C. trachomatis, N. gonorrhoeae, T. vaginalis, M. hominis, Ureaplasma, а также неинфекционные причины).
• Положительный результат («обнаружено»):ДНК Mycoplasma genitalium обнаружена в исследуемом образце. Указывает на наличие активной инфекции M. genitalium (облигатный патоген!). В отличие от M. hominis и Ureaplasma, которые могут быть частью нормальной микрофлоры у здоровых людей, обнаружение M. genitalium всегда требует лечения (даже при отсутствии симптомов – бессимптомное носительство).

 

Количественная ПЦР (Real-Time PCR, количество ДНК в КОЕ/мл или геном-эквивалент/мл):

• < 10^2 – 10^3 КОЕ/мл (низкая бактериальная нагрузка):Может соответствовать бессимптомному носительству (редко), ранней стадии инфекции, или приему антибиотиков до анализа. Лечение рекомендуется (M. genitalium – облигатный патоген).
• 10^3 – 10^5 КОЕ/мл (умеренная бактериальная нагрузка):Характерна для клинически выраженной инфекции (уретрит, цервицит, эндометрит). Требует лечения.
• > 10^5 КОЕ/мл (высокая бактериальная нагрузка):Характерна для активного воспаления (особенно при уретрите, простатите, эндометрите, сальпингите). Высокий риск осложнений (бесплодие, невынашивание). Требует интенсивной терапии.
• Динамика (снижение на 2-4 log через 3-4 недели после лечения):Благоприятный прогноз, эффективность терапии.
• Отсутствие снижения или рост через 3-4 недели:Неэффективность лечения, подозрение на устойчивость к антибиотикам. Требуется определение лекарственной чувствительности (ПЦР мутаций устойчивости).

 

Интерпретация в зависимости от клинической ситуации:

 

Положительный ПЦР + симптомы уретрита/цервицита (выделения, дизурия, боли):

• Интерпретация:Активная инфекция M. genitalium (негонококковый уретрит, цервицит). Требует лечения антибиотиками (с учетом устойчивости). До получения результатов теста на резистентность – эмпирическая терапия: азитромицин 500 мг в первый день, затем 250 мг 2-4 дня (5-дневный курс, не однократно 1 г, так как у M. genitalium длительный цикл репликации), или моксифлоксацин 400 мг 7-14 дней. При выявлении мутаций устойчивости к макролидам – моксифлоксацин. Обследование и лечение полового партнера (партнеров).

 

Положительный ПЦР + отсутствие симптомов (случайная находка при скрининге):

• Интерпретация:Бессимптомное носительство M. genitalium (облигатный патоген). Лечение рекомендуется, так как бессимптомное носительство может приводить к осложнениям (бесплодие, невынашивание у женщин, простатит, эпидидимит у мужчин), а также к передаче инфекции половому партнеру. Лечение – по тем же схемам, что и при симптомной инфекции.

 

Положительный ПЦР + бесплодие (женское или мужское) или привычное невынашивание беременности:

• Интерпретация: genitalium может быть этиологической причиной бесплодия (трубное бесплодие, эндометрит, снижение подвижности сперматозоидов). Требует лечения обоих партнеров (с учетом антибиотикорезистентности). После лечения – повторное обследование через 3-4 недели (ПЦР отрицательная). Планирование беременности рекомендуется не ранее, чем через 3 месяца после лечения.

 

Отрицательный ПЦР + симптомы уретрита/цервицита:

• Интерпретация:Инфекция M. genitalium маловероятна. Следует исключать другие причины:
  • Chlamydia trachomatis (ПЦРили ИФА).
  • Neisseria gonorrhoeae (ПЦР, посев, бактериоскопия).
  • Trichomonas vaginalis (ПЦР, микроскопиямазка).
  • Mycoplasma hominis, Ureaplasma urealyticum (ПЦР– могут быть причиной уретрита/цервицита, особенно у иммунокомпрометированных).
  • Вирусы (герпес, аденовирус, цитомегаловирус – редко).
  • Неинфекционные причины (реактивный артрит, болезнь Рейтера, травма, аллергия).
• Рецидивирующий уретрит (после лечения доксициклином, азитромицином):

• Интерпретация:Подозрение на M. genitalium с устойчивостью к макролидам или тетрациклинам. Рекомендуется ПЦР с определением мутаций устойчивости (23S rRNA – к макролидам; parC/gyrA – к фторхинолонам). При устойчивости к макролидам – назначить моксифлоксацин 400 мг 7-14 дней. При устойчивости к макролидам и фторхинолонам – альтернативные схемы (пристинамицин, доксициклин + левофлоксацин, или новые антибиотики – гепоксинацин, золифлодацин – по показаниям).

 

Важные нюансы интерпретации:

• genitalium – облигатный патоген!В отличие от M. hominis и Ureaplasma, которые могут быть частью нормальной микрофлоры влагалища у здоровых женщин (10-30%), M. genitalium не является комменсалом. Обнаружение M. genitalium (даже в низком титре, даже при отсутствии симптомов) всегда требует лечения. Исключение – случайная находка при скрининге у лиц без факторов риска (редко).
• Антибиотикорезистентность M. genitalium – глобальная проблема:Устойчивость к азитромицину (макролидам) достигает 40-60% в некоторых регионах (Северная Америка, Европа, Австралия, Азия). Устойчивость к моксифлоксацину (фторхинолонам) – 10-20%. Лечение должно основываться на результатах тестирования на резистентность (ПЦР мутаций). Эмпирическое лечение азитромицином (1 г однократно) не рекомендуется (высокий риск неудачи). Рекомендуется 5-дневный курс азитромицина (500 мг в первый день, затем 250 мг 2-4 дня) или доксициклин 100 мг 2 раза 7 дней с последующим азитромицином, или сразу моксифлоксацин (при подозрении на устойчивость).
• Ложноположительный результат:Возможен при контаминации образца (несоблюдение правил асептики, загрязнение реагентов). Частота ложноположительных результатов в хорошо организованных лабораториях составляет менее 1%.
• Ложноотрицательный результат:Возможен при неправильном взятии материала (недостаточное количество эпителиальных клеток), при длительном хранении образца (деградация ДНК), при подавлении ПЦР (ингибиторы в образце – кровь, слизь, препараты для местного лечения), при очень низкой концентрации M. genitalium (ниже предела чувствительности), при приеме антибиотиков до анализа (особенно макролидов и тетрациклинов).
• Контроль излеченности:ПЦР (качественная или количественная) через 3-4 недели после окончания курса антибиотиков. Более раннее исследование (через 1-2 недели) может дать ложноположительный результат (ДНК погибших бактерий) или ложноотрицательный (если антибиотики еще подавляют, но не эрадицировали возбудителя). «Золотой стандарт» – 3-4 недели.
• Обследование половых партнеров:При выявлении M. genitalium у одного из партнеров, второй партнер также должен быть обследован (ПЦР) и пролечен (даже при отсутствии симптомов) . В противном случае высок риск реинфекции (порочный круг). Лечение партнеров проводят одновременно (чтобы избежать повторного заражения).

 

Факторы, влияющие на результат

На результат определения ДНК Mycoplasma genitalium могут влиять различные преаналитические, аналитические и биологические факторы:

 

Преаналитические (до взятия материала):

• Прием антибиотиковза 2-4 недели до анализа – приводит к ложноотрицательным результатам (снижение бактериальной нагрузки, разрушение ДНК). Это самый частый фактор ложноотрицательных результатов. Особенно важно: макролиды (азитромицин, джозамицин, кларитромицин, эритромицин), тетрациклины (доксициклин), фторхинолоны (моксифлоксацин, левофлоксацин, офлоксацин), аминогликозиды, азиды.
• Использование вагинальных свечей, кремов, спринцеванийза 3-5 дней до анализа – может смывать эпителиальные клетки и удалять ДНК возбудителя (ложноотрицательный результат).
• Половой акт за 3 дня до анализа– может временно изменять микробиоту урогенитального тракта.
• Менструация– кровь содержит ингибиторы ПЦР, может вызывать ложноотрицательные результаты. Анализ сдают после окончания менструации.
• Недостаточное количество эпителиальных клетокв соскобе – основная причина ложноотрицательных результатов (M. genitalium ассоциирована с эпителием). Для мужчин – предпочтительнее первая порция утренней мочи (неинвазивно, чувствительность 80-90%).
• Несоблюдение правил асептикипри взятии материала – контаминация образца посторонней ДНК (ложноположительный результат).

 

Аналитические (на этапе лабораторного исследования):

• Контаминация реагентов и лабораторной посудыампликонами (продуктами ПЦР) – ложноположительный результат. Современные лаборатории используют системы с УФ-деконтаминацией и раздельные зоны для выделения ДНК и амплификации.
• Ингибиторы ПЦРв образце (кровь, слизь, препараты для местного лечения) – ложноотрицательный результат. Требуется специальная пробоподготовка (очистка ДНК).
• Нарушение температурного режима хранения транспортной среды(замораживание, перегрев) – деградация ДНК (ложноотрицательный результат).
• Чувствительность тест-системы:Разные коммерческие наборы имеют разную чувствительность (10-100 копий ДНК). Высокочувствительные тесты могут выявлять очень низкие концентрации ДНК, но это не проблема для M. genitalium (облигатный патоген, любое количество требует лечения).
• Специфичность праймеров:Должна быть высокой, чтобы не перекрестно реагировать с M. hominis, M. pneumoniae, Ureaplasma. Современные коммерческие наборы имеют высокую специфичность (98-100%).

 

Биологические факторы:

• Бессимптомное носительство: genitalium может длительно персистировать в урогенитальном тракте без симптомов. Тем не менее, обнаружение M. genitalium требует лечения (облигатный патоген).
• Гормональный фон (беременность, постменопауза):Может влиять на колонизацию M. genitalium (но не отменяет необходимости лечения).
• ВИЧ-инфекция (иммуносупрессия):У ВИЧ-инфицированных M. genitalium может вызывать более тяжелые формы уретрита/цервицита, чаще рецидивировать. Лечение обязательно.

Лаборатория Бойченко гарантирует точность и достоверность результатов благодаря современному оборудованию и высоким стандартам качества.

---

Список литературы:

1. Клинические рекомендации Министерства здравоохранения РФ «Урогенитальный уретрит (негонококковый)». 2021.
2. Клинические рекомендации Министерства здравоохранения РФ «Цервицит». 2020.
3. Клинические рекомендации Министерства здравоохранения РФ «Бесплодие (мужское и женское)». 2021.
4. Workowski K.A., Bachmann L.H., Chan P.A. et al. Sexually Transmitted Infections Treatment Guidelines, 2021. MMWR Recommendations and Reports. 2021;70(4):1-187.
5. Jensen J.S., Bradshaw C.S. Management of Mycoplasma genitalium infections – can we hit a moving target? BMC Infectious Diseases. 2015;15:343.

 

ДНК Mycoplasma hominis (микоплазма гоминис) методом ПЦР (качественное и количественное определение)

 

Краткая История

Mycoplasma hominis была впервые выделена в 1937 году у женщин с послеродовой лихорадкой. Долгое время M. hominis считалась комменсалом (частью нормальной микрофлоры) урогенитального тракта человека, не вызывающей заболеваний. Однако в 1970-1980-х годах были опубликованы исследования, доказывающие роль M. hominis в развитии бактериального вагиноза (БВ), негонококкового уретрита (НГУ), пиелонефрита, послеродового и постабортного эндометрита, а также в осложнениях беременности (хориоамнионит, преждевременные роды). Долгое время диагностика M. hominis основывалась на культуральном методе (посев на специальные среды – агар SP-4, А-7, Аргам), который требует 2-5 дней и не всегда доступен в рутинных лабораториях. В 1990-2000-х годах, с развитием полимеразной цепной реакции (ПЦР), стало возможным быстрое (4-6 часов) и высокочувствительное выявление ДНК M. hominis в урогенитальных образцах (соскоб из уретры, цервикального канала, влагалища, первая порция мочи). В 2000-2010-х годах были разработаны коммерческие тест-системы для мультиплексной ПЦР (одновременное выявление M. hominis, Ureaplasma urealyticum, Ureaplasma parvum, Mycoplasma genitalium, Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae, Trichomonas vaginalis, Gardnerella vaginalis, Atopobium vaginae). Однако интерпретация результатов ПЦР на M. hominis сложнее, чем для M. genitalium, так как M. hominis может быть как частью нормальной микрофлоры (у 20-50% здоровых женщин), так и патогеном (при дисбиозе, иммунодефиците). Сегодня ПЦР на M. hominis используется в комплексе с другими методами (микроскопия мазка, оценка pH влагалища, выявление Gardnerella vaginalis, Atopobium vaginae) для диагностики бактериального вагиноза, а также для обследования при негонококковом уретрите, бесплодии, невынашивании беременности.

 

Материал, используемый для исследования

• • Тип образца:Урогенитальный соскоб (эпителиальные клетки слизистых оболочек), первая порция утренней мочи (для мужчин), эякулят, секрет предстательной железы.
  • Локализация забора материала (в зависимости от пола и клинических проявлений):

• У женщин:Соскоб из заднего свода влагалища – основной материал (для диагностики бактериального вагиноза), соскоб из цервикального канала (при подозрении на эндометрит, сальпингит), соскоб из уретры (при симптомах уретрита).
• У мужчины:Первая порция утренней мочи (10-20 мл) – неинвазивный метод, соскоб из уретры (на глубину 2-4 см), эякулят (при подозрении на простатит, эпидидимит), секрет предстательной железы.
  • Тип пробирки/системы сбора:Специальная пробирка с транспортной средой для ПЦР (содержит консервант, предотвращающий деградацию ДНК и рост бактерий). Используются коммерческие системы: «Инцит-тампон» (Incyte Swab), пробирки с транспортной средой для ПЦР (например, «ДНК-сорб», «АмплиСенс», «Эппендорф»). Для мочи – стерильный пластиковый контейнер с широким горлом (10-20 мл). Важно: Обычные мазки на стекле для ПЦР не пригодны (необходим транспорт для сохранения ДНК).
  • Объем материала:Достаточное количество эпителиальных клеток (для соскоба) или 10-20 мл первой порции утренней мочи. Недостаточное количество клеток – причина ложноотрицательных результатов.
  • Обработка:После взятия материала тампон/зонд тщательно споласкивается в транспортной среде (несколько вращательных движений), затем отжимается о стенки пробирки и удаляется. Пробирка плотно закрывается и маркируется (ФИО пациента, дата, время взятия, локализация). Доставка в лабораторию осуществляется в день взятия (или в течение 12 часов при хранении при +2…+8°C). Замораживание не допускается. Стабильность ДНК в транспортной среде при комнатной температуре – до 21 дня (в зависимости от системы сбора), при +2…+8°C – до 24-48 часов.

 

Как подготовиться к анализу

Подготовка к анализу критически важна для получения достоверного результата (исключение ложноотрицательных результатов и контаминации):

 

Женщины:

• Исследование рекомендуется проводить до менструации или через 2-5 дней после её окончания.
• За 3 днядо взятия материала исключить: половые контакты, вагинальные спринцевания, использование вагинальных свечей, таблеток, кремов, гелей, тампонов.
• За 5-7 днейдо взятия материала прекратить использование антибактериальных препаратов местно (вагинально) и системно (внутрь, инъекционно) – после консультации с врачом (нельзя отменять жизненно важные препараты!).
• В день взятия материала не проводить гигиенические процедуры с использованием антисептиков для подмывания (только чистая вода).

 

Мужчины:

• За 3 днядо взятия материала исключить половые контакты.
• За 5-7 днейдо взятия материала прекратить прием антибактериальных препаратов (после консультации с врачом).
• Для соскоба из уретры:Перед взятием материала не мочиться в течение 3-4 часов.
• Для первой порции утренней мочи:Собирают первую утреннюю порцию мочи (10-20 мл) после ночного сна (за 3-4 часа до сбора мочи не мочиться). Собирают в стерильный пластиковый контейнер.
• Накануне и в день взятия материала не использовать антисептики для туалета половых органов.

 

Общие требования:

• За 2-3 неделидо исследования исключить прием антибиотиков (системно) – по согласованию с врачом (особенно тетрациклинов – доксициклин, макролидов – азитромицин, джозамицин, фторхинолонов – левофлоксацин, моксифлоксацин).
• Сообщить врачу о наличии острых инфекционных заболеваний (лихорадка, ОРВИ, ангина) – анализ следует отложить на 2-4 недели после выздоровления.
• Исключить употребление алкоголя за 24 часа до исследования.
• В день взятия материала не курить за 1-2 часа (по возможности).

 

Описание данного вещества (Mycoplasma hominis и метод ПЦР)

Mycoplasma hominis – это грамотрицательная, факультативно-анаэробная, очень мелкая бактерия (0,3-0,8 мкм), не имеющая клеточной стенки (что делает её устойчивой к пенициллинам, цефалоспоринам и другим антибиотикам, действующим на синтез клеточной стенки). Относится к классу Mollicutes («мягкокожие»). M. hominis является факультативным паразитом человека (может расти как на слизистых, так и в культуре), колонизирует эпителий урогенитального тракта (влагалища, уретры, цервикального канала, эндометрия, маточных труб, предстательной железы).

 

Особенности M. hominis:

• Отсутствие клеточной стенки:Придает пластичность, устойчивость к β-лактамным антибиотикам (пенициллины, цефалоспорины, карбапенемы), способность фильтроваться через бактериальные фильтры.
• Способность разлагать аргинин:Используется для идентификации (в отличие от Ureaplasma, которая разлагает мочевину).
• Скорость роста:Умеренная (колонии на специальных средах появляются через 2-5 дней).
• Патогенность (условно-патогенный микроорганизм):В норме может присутствовать в урогенитальном тракте (у 20-50% здоровых женщин, у 10-20% здоровых мужчин) в небольших количествах (до 10^3-10^4 КОЕ/мл). При нарушении микробиоценоза (снижение лактобацилл, повышение pH > 4,5), при иммунодефиците (ВИЧ, длительный прием глюкокортикоидов, цитостатиков), при травмах, операциях, внутриматочных вмешательствах M. hominis начинает активно размножаться и может вызывать воспалительные заболевания.

 

Клинические проявления инфекции M. hominis:

 

У женщин:

• Бактериальный вагиноз (БВ): hominis часто выявляется в ассоциации с Gardnerella vaginalis, Atopobium vaginae, Prevotella, Mobiluncus. Характерны серовато-белые выделения с «рыбным» запахом, pH влагалища > 4,5, наличие «ключевых клеток» в мазке. Самостоятельно (без других анаэробов) M. hominis редко вызывает БВ.
• Цервицит, эндометрит, сальпингит:Боли внизу живота, межменструальные кровотечения, гнойные выделения. M. hominis может вызывать воспалительные заболевания органов малого таза (ВЗОМТ), особенно после аборта, выкидыша, родов, внутриматочных вмешательств.
• Послеродовой и постабортный эндометрит:Лихорадка, боли внизу живота, гнойные лохии.
• Бесплодие (трубное бесплодие, спаечный процесс), привычное невынашивание беременности, преждевременные роды, хориоамнионит.

 

У мужчин:

• Негонококковый уретрит (НГУ):Уретральные выделения (слизисто-гнойные, часто скудные), дизурия (жжение, резь при мочеиспускании). Роль M. hominis в этиологии НГУ остается спорной (выявляется у 5-15% мужчин с НГУ, но также и у здоровых мужчин).
• Хронический простатит, эпидидимит (редко).
• Бесплодие (снижение подвижности сперматозоидов, агглютинация).

 

Внеурогенитальные проявления (редко, у иммунокомпрометированных):

• Инфекции новорожденных:Пневмония, менингит, сепсис (при прохождении через инфицированные родовые пути).
• Сепсис, абсцессы (после операций, травм), перитонит, артрит (у пациентов с гипогаммаглобулинемией).

 

Метод ПЦР (полимеразная цепная реакция):

• Качественная ПЦР:Определяет наличие (обнаружено/не обнаружено) ДНК M. hominis в образце. Не позволяет оценить количество бактерий. Чувствительность метода – 10-100 копий ДНК в пробе.
• Количественная ПЦР (Real-Time PCR):Позволяет не только обнаружить ДНК M. hominis, но и определить её количество (КОЕ/мл или геном-эквивалент/мл). Это критически важно для дифференциации бессимптомного носительства (низкое количество, < 10^4 КОЕ/мл) от клинически значимой инфекции (высокое количество, > 10^4-10^5 КОЕ/мл), а также для оценки эффективности лечения (снижение ДНК на фоне антибиотикотерапии).
• Мультиплексная ПЦР (сочетанное выявление нескольких возбудителей):Одновременное выявление M. hominis, Ureaplasma urealyticum, Ureaplasma parvum, Mycoplasma genitalium, Gardnerella vaginalis, Atopobium vaginae, Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae, Trichomonas vaginalis. Это наиболее информативный подход, так как M. hominis редко выступает как единственный патоген (чаще в ассоциации с другими анаэробами при бактериальном вагинозе).
• Специфичность:Высокая (95-98%). Современные праймеры специфичны к ДНК M. hominis и не перекрестно реагируют с другими микоплазмами (M. genitalium, M. pneumoniae, M. fermentans), уреаплазмами, хламидиями, гонококками.
• Чувствительность:Высокая (90-95% для соскоба из влагалища/цервикального канала/уретры). Чувствительность зависит от типа материала, стадии заболевания, приема антибиотиков.

 

Диагностика заболеваний

Качественное (и количественное) определение ДНК Mycoplasma hominis используется (в комплексе с другими методами) для:

1. Диагностики бактериального вагиноза (БВ):Это одно из основных показаний, но не самостоятельное. M. hominis выявляется при БВ у 50-80% женщин, но также и у 20-30% здоровых женщин. Поэтому диагноз БВ ставится на основании комплекса критериев Амселя (микроскопия мазка – наличие «ключевых клеток», pH > 4,5, положительный аминный тест, сероватые гомогенные выделения) или балльной оценки по Ньюдженту (микроскопия). ПЦР на M. hominis может использоваться как дополнительный тест (особенно при сомнительных результатах микроскопии), но не как основной. В мультиплексной ПЦР (например, Femoflor, ATRiDA) оценивают соотношение M. hominis / Gardnerella vaginalis / Atopobium vaginae / лактобациллы.
2. Диагностики негонококкового уретрита (НГУ) у мужчин:При наличии симптомов уретрита (выделения, дизурия) и отрицательных результатах на N. gonorrhoeae, C. trachomatis, M. genitalium, Ureaplasma urealyticum. M. hominis выявляется у 5-15% мужчин с НГУ. Однако у 10-20% здоровых мужчин M. hominis также может выявляться, поэтому необходимо количественное определение (> 10^4 КОЕ/мл – вероятно, этиологическая роль).
3. Обследования при воспалительных заболеваниях органов малого таза (ВЗОМТ) у женщин (эндометрит, сальпингит):Особенно после аборта, выкидыша, родов, внутриматочных вмешательств (гистероскопия, установка ВМС, биопсия эндометрия). M. hominis может вызывать эти осложнения.
4. Обследования при бесплодии и привычном невынашивании беременности: hominis ассоциирована с трубным бесплодием (спаечный процесс в маточных трубах), хроническим эндометритом (нарушение имплантации эмбриона), привычным невыкидышем (особенно на ранних сроках), преждевременными родами, хориоамнионитом. Обнаружение M. hominis (в высоком титре, > 10^4-10^5 КОЕ/мл) у бесплодных пар или женщин с привычным невынашиванием требует лечения.
5. Обследования беременных с угрозой прерывания беременности, преждевременными родами, хориоамнионитом.Лечение M. hominis у беременных (во II и III триместрах) проводится при высоком титре (> 10^4-10^5 КОЕ/мл) и наличии клинических симптомов (боли, выделения, лихорадка). Препараты выбора – джозамицин (Вильпрафен), клиндамицин (местно или внутрь), метронидазол (не действует на M. hominis, но эффективен при БВ).
6. Обследования иммунокомпрометированных пациентов (ВИЧ-инфекция, онкогематологические заболевания, длительный прием глюкокортикоидов, цитостатиков, после трансплантации):У этих пациентов M. hominis может вызывать тяжелые внеурогенитальные инфекции (пневмония, сепсис, артрит, абсцессы). ПЦР крови, мочи, ликвора, пунктатов помогает в диагностике.
7. Контроля излеченности после лечения:ПЦР (качественная или количественная) через 3-4 недели после окончания курса антибиотиков. Цель – отрицательный результат (или снижение количества M. hominis до < 10^3 КОЕ/мл при количественной ПЦР).

 

Цель исследования

Основные цели качественного (и количественного) определения ДНК Mycoplasma hominis:

1. Дополнительная диагностика бактериального вагиноза (БВ)(в комплексе с микроскопией мазка, pH-метрией, аминным тестом, выявлением Gardnerella vaginalis, Atopobium vaginae).
2. Диагностика негонококкового уретрита (НГУ) у мужчин(при отрицательных результатах на N. gonorrhoeae, C. trachomatis, M. genitalium, Ureaplasma urealyticum).
3. Диагностика воспалительных заболеваний органов малого таза (ВЗОМТ) у женщин(эндометрит, сальпингит), особенно после аборта, родов, внутриматочных вмешательств.
4. Обследование при бесплодии (женском и мужском), привычном невынашивании беременности, преждевременных родах, хориоамнионите.
5. Диагностика внеурогенитальных инфекций (пневмония, сепсис, артрит, абсцессы)у иммунокомпрометированных пациентов.
6. Контроль излеченности после лечения(через 3-4 недели после окончания курса антибиотиков).

 

Что значат полученные результаты

Интерпретация результатов определения ДНК Mycoplasma hominis всегда проводится врачом-гинекологом, урологом, дерматовенерологом, инфекционистом в контексте клинической картины (наличие выделений, зуда, болей, дизурии, нарушений фертильности), данных микроскопии мазка (pH влагалища, «ключевые клетки», лейкоциты, соотношение лактобацилл и коккобациллярной флоры), а также с учетом результатов других тестов (выявление G. vaginalis, A. vaginae, Ureaplasma, M. genitalium, C. trachomatis, N. gonorrhoeae, T. vaginalis). Референсное значение для качественной ПЦР – «не обнаружено» .

 

Референсные значения (качественная ПЦР):

• Отрицательный результат («не обнаружено»):ДНК Mycoplasma hominis в исследуемом образце не обнаружена (или концентрация ниже предела чувствительности метода, обычно < 10-100 копий ДНК). Инфекция M. hominis маловероятна (но не исключена при очень низкой концентрации).
• Положительный результат («обнаружено»):ДНК Mycoplasma hominis обнаружена в исследуемом образце. Указывает на наличие M. hominis в урогенитальном тракте. Однако НЕ ВСЕГДА означает заболевание, так как M. hominis может быть частью нормальной микрофлоры у здоровых женщин (20-50%) и мужчин (10-20%). Клиническое значение зависит от:

• Количества M. hominis(при качественной ПЦР не оценивается – требуется количественный тест).
• Наличия симптомов(выделения, зуд, боли, дизурия).
• Данных микроскопии мазка(pH, «ключевые клетки», лейкоциты).
• Наличия других возбудителей(G. vaginalis, A. vaginae, Ureaplasma, C. trachomatis, N. gonorrhoeae, M. genitalium, T. vaginalis).

 

Количественная ПЦР (Real-Time PCR, количество ДНК в КОЕ/мл или геном-эквивалент/мл):

• < 10^3 КОЕ/мл (низкая бактериальная нагрузка):Бессимптомное носительство (вариант нормы). Лечение обычно не требуется (за исключением беременных с высоким риском преждевременных родов, иммунокомпрометированных пациентов, перед внутриматочными процедурами). Рекомендуется динамическое наблюдение.
• 10^3 – 10^4 КОЕ/мл (пограничное значение):Сомнительный результат. Может соответствовать бессимптомному носительству или начальной стадии дисбиоза. Рекомендуется повторить анализ через 2-4 недели (или провести количественную ПЦР в динамике). При наличии симптомов – лечение.
• 10^4 – 10^5 КОЕ/мл (умеренная бактериальная нагрузка):Клинически значимая инфекция (особенно в сочетании с симптомами и/или дисбиозом). Вероятна этиологическая роль M. hominis в развитии уретрита, цервицита, бактериального вагиноза, эндометрита, простатита. Требует лечения (с учетом антибиотикорезистентности).
• > 10^5 КОЕ/мл (высокая бактериальная нагрузка):Активное воспаление, высокая вероятность этиологической роли M. hominis. Требует лечения. При беременности – высокий риск преждевременных родов, хориоамнионита.
• Динамика (снижение на 2-4 log через 3-4 недели после лечения):Благоприятный прогноз, эффективность терапии.
• Отсутствие снижения или рост через 3-4 недели:Неэффективность лечения, устойчивость к антибиотикам.

 

Интерпретация в зависимости от клинической ситуации:

• Положительный ПЦР + симптомы (выделения, зуд, дизурия, боли внизу живота) + микроскопия мазка (pH > 4,5, «ключевые клетки», лейкоцитоз):

• Интерпретация:Бактериальный вагиноз (у женщин) или негонококковый уретрит (у мужчин). hominis может быть одним из возбудителей (часто в ассоциации с G. vaginalis, A. vaginae, Prevotella). Требует лечения антибиотиками (метронидазол, клиндамицин, джозамицин). Лечение полового партнера не всегда требуется (для БВ – нет, для уретрита – да).

 

Положительный ПЦР + отсутствие симптомов + низкая бактериальная нагрузка (< 10^4 КОЕ/мл):

• Интерпретация:Бессимптомное носительство (вариант нормы). Лечение обычно не требуется. Однако у беременных (риск преждевременных родов), перед ЭКО, перед внутриматочными процедурами, у иммунокомпрометированных пациентов – лечение рекомендуется.

 

Положительный ПЦР + бесплодие или привычное невынашивание беременности (высокая нагрузка > 10^4 КОЕ/мл):

• Интерпретация: hominis может быть этиологической причиной бесплодия (хронический эндометрит, трубное бесплодие) или невынашивания (хронический эндометрит). Требует лечения обоих партнеров (джозамицин, клиндамицин, доксициклин – с учетом чувствительности). После лечения – повторное обследование через 3-4 недели (ПЦР отрицательная или низкая нагрузка).

 

Отрицательный ПЦР + симптомы бактериального вагиноза (выделения с запахом, pH > 4,5, «ключевые клетки»):

• Интерпретация:Бактериальный вагиноз, вызванный другими анаэробами (G. vaginalis, A. vaginae, Prevotella, Mobiluncus). Лечение метронидазолом или клиндамицином.

 

Отрицательный ПЦР + симптомы уретрита/цервицита:

• Интерпретация: hominis маловероятен как причина. Следует исключать C. trachomatis, N. gonorrhoeae, M. genitalium, Ureaplasma urealyticum, T. vaginalis.

 

Важные нюансы интерпретации:

• hominis – условно-патогенный микроорганизм.В отличие от M. genitalium (облигатный патоген), M. hominis может быть частью нормальной микрофлоры у 20-50% здоровых женщин. Поэтому обнаружение M. hominis НЕ ВСЕГДА требует лечения. Лечение показано только при:

• Наличии клинических симптомов (выделения, зуд, дизурия, боли внизу живота).
• Высокой бактериальной нагрузке (> 10^4-10^5 КОЕ/мл).
• Подтвержденном бактериальном вагинозе (критерии Амселя, Ньюджента).
• Бесплодии, привычном невынашивании (после исключения других причин).
• Беременности с высоким риском преждевременных родов (даже при низкой нагрузке).
• Иммунодефиците (ВИЧ, онкология, после трансплантации).
• Перед внутриматочными процедурами (ЭКО, гистероскопия, биопсия эндометрия, установка ВМС).
  • hominis часто встречается в ассоциации с G. vaginalis и A. vaginae при бактериальном вагинозе.Лечение должно быть направлено на весь комплекс анаэробов (метронидазол, клиндамицин). Джозамицин (Вильпрафен) активен против M. hominis, но не против G. vaginalis (кроме высоких доз), поэтому при БВ предпочтительнее метронидазол или клиндамицин.
  • Антибиотикорезистентность M. hominis: hominis устойчива к пенициллинам, цефалоспоринам, карбапенемам (нет клеточной стенки). Чувствительна к тетрациклинам (доксициклин), макролидам (азитромицин, джозамицин, кларитромицин), клиндамицину, аминогликозидам (гентамицин, амикацин), хлорамфениколу, фторхинолонам (левофлоксацин, моксифлоксацин). Однако в последние годы растет устойчивость к тетрациклинам и макролидам. При неэффективности лечения рекомендуется определение чувствительности (антибиотикограмма) или использование альтернативных препаратов (клиндамицин, доксициклин, фторхинолоны).
  • Контроль излеченности:Проводится через 3-4 недели после окончания курса антибиотиков (качественная или количественная ПЦР). Более раннее исследование (через 1-2 недели) может дать ложноположительный результат (ДНК погибших бактерий) или ложноотрицательный (если антибиотики еще подавляют, но не эрадицировали возбудителя). Цель лечения – отрицательный результат (или снижение до < 10^3 КОЕ/мл).
  • Лечение половых партнеров:Для M. hominis (в отличие от M. genitalium) лечение половых партнеров не всегда обязательно. При уретрите у мужчин – да, при бактериальном вагинозе у женщин – нет (БВ не считается ИППП, хотя может передаваться половым путем). Однако при рецидивирующем БВ, бесплодии, невынашивании – лечение партнера рекомендуется.

 

Факторы, влияющие на результат

На результат определения ДНК Mycoplasma hominis могут влиять различные преаналитические, аналитические и биологические факторы:

• Преаналитические (до взятия материала):

• Прием антибиотиковза 2-4 недели до анализа – приводит к ложноотрицательным результатам (снижение бактериальной нагрузки, разрушение ДНК). Это самый частый фактор ложноотрицательных результатов.
• Использование вагинальных свечей, кремов, спринцеванийза 3-5 дней до анализа – может смывать эпителиальные клетки и удалять ДНК возбудителя (ложноотрицательный результат).
• Половой акт за 3 дня до анализа– может временно изменять микробиоту урогенитального тракта.
• Менструация– кровь содержит ингибиторы ПЦР, может вызывать ложноотрицательные результаты. Анализ сдают после окончания менструации.
• Недостаточное количество эпителиальных клетокв соскобе – причина ложноотрицательных результатов.
• Несоблюдение правил асептикипри взятии материала – контаминация образца посторонней ДНК (ложноположительный результат).

 

Аналитические (на этапе лабораторного исследования):

• Контаминация реагентов и лабораторной посудыампликонами (продуктами ПЦР) – ложноположительный результат.
• Ингибиторы ПЦРв образце (кровь, слизь, препараты для местного лечения) – ложноотрицательный результат.
• Нарушение температурного режима хранения транспортной среды(замораживание, перегрев) – деградация ДНК (ложноотрицательный результат).
• Чувствительность тест-системы:Разные коммерческие наборы имеют разную чувствительность (10-100 копий ДНК).
• Специфичность праймеров:Должна быть высокой, чтобы не перекрестно реагировать с M. genitalium, M. pneumoniae, Ureaplasma.

 

Биологические факторы:

• Бессимптомное носительство M. hominis– самый частый фактор ложноположительных результатов (в интерпретации – положительный ПЦР, но нет клиники). Встречается у 20-50% здоровых женщин и 10-20% здоровых мужчин.
• Беременность– повышает колонизацию M. hominis (изменение гормонального фона, повышение pH влагалища). Часто бессимптомное носительство.
• ВИЧ-инфекция (иммуносупрессия)– может увеличивать риск клинически значимой инфекции M. hominis.
• Сопутствующие ИППП (C. trachomatis, N. gonorrhoeae, T. vaginalis, M. genitalium)– могут изменять микробиоту и влиять на колонизацию M. hominis.

Лаборатория Бойченко гарантирует точность и достоверность результатов благодаря современному оборудованию и высоким стандартам качества.

---

Список литературы:

1. Клинические рекомендации Министерства здравоохранения РФ «Бактериальный вагиноз». 2021.
2. Клинические рекомендации Министерства здравоохранения РФ «Урогенитальный уретрит (негонококковый)». 2021.
3. Клинические рекомендации Министерства здравоохранения РФ «Воспалительные заболевания органов малого таза». 2021.
4. Клинические рекомендации Министерства здравоохранения РФ «Бесплодие (женское и мужское)». 2021.
5. Workowski K.A., Bachmann L.H., Chan P.A. et al. Sexually Transmitted Infections Treatment Guidelines, 2021. MMWR Recommendations and Reports. 2021;70(4):1-187.

 

ДНК Neisseria gonorrhoeae (гонококк) методом ПЦР (качественное и количественное определение)

 

Краткая История

Гонорея — одно из древнейших инфекционных заболеваний человека, известное со времен античности (Гиппократ, V век до н.э., описывал «гоноррею» — от греч. «gonos» — семя и «rhoia» — истечение, ошибочно считая, что это истечение семени). Возбудитель гонореи — Neisseria gonorrhoeae (гонококк) — был открыт в 1879 году немецким врачом Альбертом Найссером (Albert Neisser), который обнаружил диплококки в гное из уретры больных гонореей. В 1885 году Эрнст Бумм (Ernst Bumm) выделил чистую культуру гонококка и доказал его этиологическую роль. Долгое время «золотым стандартом» диагностики гонореи оставалась бактериоскопия (микроскопия мазка, окрашенного по Граму) — обнаружение грамотрицательных диплококков внутри лейкоцитов. Однако чувствительность бактериоскопии составляет 80-90% для уретральных мазков у мужчин, но всего 50-70% для цервикальных мазков у женщин, и она не позволяет выявлять хронические и бессимптомные формы. Культуральный метод (посев на шоколадный агар с добавками) имеет 100% специфичность, но требует 48-72 часа, специальных питательных сред и условий (CO₂-инкубатор). В 1990-2000-х годах, с развитием полимеразной цепной реакции (ПЦР), стало возможным быстрое (4-6 часов) и высокочувствительное выявление ДНК N. gonorrhoeae в урогенитальных образцах (соскоб из уретры, цервикального канала, первая порция мочи, эякулят, соскоб из ротоглотки и ануса). В 2000-2010-х годах были разработаны коммерческие тест-системы для мультиплексной ПЦР (одновременное выявление N. gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, Mycoplasma genitalium, Trichomonas vaginalis), а также тесты для определения мутаций устойчивости к антибиотикам (цефалоспоринам, азитромицину, ципрофлоксацину, спектиномицину, тетрациклинам). Сегодня ПЦР на N. gonorrhoeae является методом выбора для экспресс-диагностики гонореи, особенно при бессимптомных формах, внеурогенитальных локализациях (ротоглотка, анус), у женщин, у детей.

 

Материал, используемый для исследования

• • Тип образца:Урогенитальный соскоб (эпителиальные клетки слизистых оболочек), первая порция утренней мочи (для мужчин), соскоб из ротоглотки (при орофарингеальной гонорее), соскоб из анального канала (при аноректальной гонорее), эякулят, секрет предстательной железы, конъюнктивальный соскоб (при гонобленнорее у новорожденных).
  • Локализация забора материала (в зависимости от пола и клинических проявлений):

• У мужчин:Первая порция утренней мочи (10-20 мл) – неинвазивный метод, чувствительность 90-95%; соскоб из уретры (на глубину 2-4 см, более чувствителен, чем моча, но инвазивен); эякулят (при подозрении на эпидидимит, простатит).
• У женщин:Соскоб из цервикального канала – основной материал; соскоб из уретры (при симптомах уретрита); соскоб из заднего свода влагалища (реже); первая порция мочи (чувствительность 85-90%).
• При орофарингеальной гонорее (у мужчин и женщин):Соскоб из ротоглотки (с задней стенки глотки, с миндалин, с нёбных дужек) – важный материал, так как орофарингеальная гонорея часто протекает бессимптомно, но может быть источником заражения.
• При аноректальной гонорее (у мужчин и женщин):Соскоб из анального канала (на глубину 2-3 см).
• При гонобленнорее (у новорожденных):Соскоб с конъюнктивы нижнего века.
  • Тип пробирки/системы сбора:Специальная пробирка с транспортной средой для ПЦР (содержит консервант, предотвращающий деградацию ДНК и рост бактерий). Используются коммерческие системы: «Инцит-тампон» (Incyte Swab), пробирки с транспортной средой для ПЦР (например, «ДНК-сорб», «АмплиСенс», «Эппендорф»). Для мочи – стерильный пластиковый контейнер с широким горлом (10-20 мл). Важно: Обычные мазки на стекле для ПЦР не пригодны (необходим транспорт для сохранения ДНК).
  • Объем материала:Достаточное количество эпителиальных клеток (для соскоба) или 10-20 мл первой порции утренней мочи. Недостаточное количество клеток – причина ложноотрицательных результатов.
  • Обработка:После взятия материала тампон/зонд тщательно споласкивается в транспортной среде (несколько вращательных движений), затем отжимается о стенки пробирки и удаляется. Пробирка плотно закрывается и маркируется (ФИО пациента, дата, время взятия, локализация). Доставка в лабораторию осуществляется в день взятия (или в течение 12 часов при хранении при +2…+8°C). Замораживание не допускается. Стабильность ДНК в транспортной среде при комнатной температуре – до 21 дня (в зависимости от системы сбора), при +2…+8°C – до 24-48 часов.

 

Как подготовиться к анализу

Подготовка к анализу критически важна для получения достоверного результата (исключение ложноотрицательных результатов и контаминации):

 

Женщины:

• Исследование рекомендуется проводить до менструации или через 2-5 дней после её окончания.
• За 3 днядо взятия материала исключить: половые контакты, вагинальные спринцевания, использование вагинальных свечей, таблеток, кремов, гелей, тампонов.
• За 5-7 днейдо взятия материала прекратить использование антибактериальных препаратов местно (вагинально) и системно (внутрь, инъекционно) – после консультации с врачом (нельзя отменять жизненно важные препараты!).
• В день взятия материала не проводить гигиенические процедуры с использованием антисептиков для подмывания (только чистая вода).

 

Мужчины:

• За 3 днядо взятия материала исключить половые контакты.
• За 5-7 днейдо взятия материала прекратить прием антибактериальных препаратов (после консультации с врачом).
• Для соскоба из уретры:Перед взятием материала не мочиться в течение 3-4 часов.
• Для первой порции утренней мочи:Собирают первую утреннюю порцию мочи (10-20 мл) после ночного сна (за 3-4 часа до сбора мочи не мочиться). Собирают в стерильный пластиковый контейнер.
• Накануне и в день взятия материала не использовать антисептики для туалета половых органов.

 

При орофарингеальной и аноректальной локализациях:

• За 2-3 часа до взятия соскоба из ротоглотки не есть, не пить, не чистить зубы, не использовать ополаскиватели для рта.
• Перед взятием аноректального мазка – очистить анус (без использования антисептиков).

 

Общие требования:

• За 2-4 неделидо исследования исключить прием антибиотиков (системно) – по согласованию с врачом (особенно цефалоспоринов – цефтриаксон, цефиксим; азитромицина; фторхинолонов – ципрофлоксацин, левофлоксацин, офлоксацин; тетрациклинов – доксициклин; спектиномицина). Гонококк очень чувствителен к цефалоспоринам, и даже однократная доза цефтриаксона может привести к ложноотрицательному результату ПЦР в течение нескольких недель.
• Сообщить врачу о наличии острых инфекционных заболеваний (лихорадка, ОРВИ, ангина) – анализ следует отложить на 2-4 недели после выздоровления.
• Исключить употребление алкоголя за 24 часа до исследования.
• В день взятия материала не курить за 1-2 часа (по возможности).

 

Описание данного вещества (Neisseria gonorrhoeae и метод ПЦР)

Neisseria gonorrhoeae (гонококк) – это грамотрицательный, аэробный, неподвижный, неспорообразующий диплококк (клетки располагаются попарно, напоминая «кофейные зерна»), относящийся к семейству Neisseriaceae. Является облигатным патогеном человека (естественный резервуар – только человек, не растет вне организма, во внешней среде быстро погибает – в течение 1-2 часов). Поражает преимущественно слизистые оболочки, выстланные цилиндрическим эпителием (уретра, цервикальный канал, эндометрий, маточные трубы, прямая кишка, конъюнктива, ротоглотка). Не поражает многослойный плоский эпителий (влагалище, наружные половые органы), поэтому у взрослых женщин вагинальная гонорея не встречается (у девочек до puberty – да, так как эпителий влагалища незрелый).

 

Факторы вирулентности N. gonorrhoeae:

• Пили (фимбрии):Обеспечивают прикрепление (адгезию) к эпителиальным клеткам, устойчивость к фагоцитозу.
• Белки наружной мембраны (Por, Opa, Rmp):Участвуют в адгезии, инвазии в клетки, уклонении от иммунного ответа.
• Липоолигосахарид (LOS):Эндотоксин, вызывает воспаление, повреждение тканей.
• IgA-протеаза:Расщепляет секреторный IgA на слизистых, облегчая инвазию.
• Антигенная изменчивость:Пили и белки Opa часто меняют свою структуру, что позволяет гонококку уклоняться от иммунного ответа и вызывает повторные инфекции (иммунитет нестерильный).

 

Клинические проявления гонореи:

 

У мужчин:

• Острый уретрит (наиболее частая форма, 80-90%):Гнойные выделения из уретры (обильные, желто-зеленые), дизурия (жжение, резь при мочеиспускании), отек и гиперемия губок уретры. Инкубационный период 2-7 дней.
• Хронический уретрит (при отсутствии лечения или неадекватной терапии):Скудные слизисто-гнойные выделения, дизурия (слабая), осложнения – эпидидимит (воспаление придатка яичка – боль, отек мошонки, лихорадка), простатит, стриктура уретры, бесплодие.

 

У женщин:

• Цервицит (наиболее частая форма, 50-80%):Гнойные выделения из цервикального канала, контактная кровоточивость (кровь после полового акта, осмотра). Часто бессимптомное течение (у 50-70% женщин).
• Уретрит (у 20-30% женщин):Дизурия, учащенное мочеиспускание.
• Бартолинит (воспаление большой железы преддверия влагалища):Боль, отек в области входа во влагалище, гнойные выделения.
• Восходящая инфекция (10-20%):Эндометрит, сальпингит (воспаление маточных труб), тубоовариальный абсцесс, пельвиоперитонит – боли внизу живота, лихорадка, нарушение менструального цикла. Осложнения – трубное бесплодие (спайки, непроходимость маточных труб), внематочная беременность, хронические тазовые боли.

 

Внеурогенитальные формы:

• Орофарингеальная гонорея (у мужчин и женщин, при орально-генитальных контактах):Часто бессимптомно (80-90%), реже – фарингит, тонзиллит (боль в горле, гиперемия, гнойный налет).
• Аноректальная гонорея (у мужчин и женщин, при анально-генитальных контактах):Часто бессимптомно (50-70%), реже – проктит (боль в анусе, выделения, тенезмы, запоры).
• Гонобленнорея (у новорожденных):Конъюнктивит (отек век, обильное гнойное отделяемое) – при прохождении через инфицированные родовые пути матери. Без лечения – слепота (изъязвление роговицы).
• Диссеминированная гонококковая инфекция (ДГИ, 0,5-3%):Сепсис, артрит (гнойный моноартрит), дерматит (геморрагические, пустулезные высыпания на конечностях), теносиновит (воспаление сухожилий), эндокардит, менингит. Чаще у женщин (особенно во время менструации, беременности).

 

Метод ПЦР (полимеразная цепная реакция):

• Качественная ПЦР:Определяет наличие (обнаружено/не обнаружено) ДНК N. gonorrhoeae в образце. Чувствительность метода – 10-100 копий ДНК в пробе (или 1-10 бактерий). Специфичность – 98-100%. Позволяет выявлять гонококк даже при очень низкой бактериальной нагрузке (хронические, бессимптомные формы).
• Количественная ПЦР (Real-Time PCR):Позволяет не только обнаружить ДНК N. gonorrhoeae, но и определить её количество (КОЕ/мл или геном-эквивалент/мл). Это важно для оценки эффективности лечения (снижение ДНК на фоне антибиотикотерапии), а также для дифференциации активной инфекции (высокое количество) от низкого носительства (редко).
• Мультиплексная ПЦР (сочетанное выявление нескольких возбудителей):Одновременное выявление N. gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, Mycoplasma genitalium, Trichomonas vaginalis, Ureaplasma urealyticum, Mycoplasma hominis. Это наиболее информативный подход, так как гонорея часто сочетается с хламидиозом (30-50% случаев) и другими ИППП.
• ПЦР для выявления мутаций устойчивости:Определение мутаций в генах, связанных с устойчивостью к антибиотикам (пенициллинам, тетрациклинам, фторхинолонам, макролидам, цефалоспоринам). Особенно важно для выявления устойчивости к цефтриаксону (редко, но растет) и азитромицину (растет).
• Специфичность:Очень высокая (98-100%) при использовании специфических праймеров к ДНК N. gonorrhoeae (например, к генам porA, opa, 16S рРНК, cppB – но cppB может давать ложноположительные результаты у других нейссерий). Современные тест-системы используют два независимых гена-мишени (дуплексная ПЦР) для повышения специфичности.
• Чувствительность:Очень высокая (90-98% для урогенитальных образцов; 85-95% для мочи; 80-90% для орофарингеальных и аноректальных мазков).

 

Диагностика заболеваний

Качественное (и количественное) определение ДНК Neisseria gonorrhoeae используется для:

1. Диагностики острой и хронической гонореи у мужчин и женщин:Это основное показание. ПЦР позволяет быстро (4-6 часов) подтвердить диагноз гонореи, даже при бессимптомном течении, при хронических формах, при неэффективности бактериоскопии (особенно у женщин, где чувствительность микроскопии низкая).
2. Скрининга гонореи у групп риска:Сексуально активные молодые люди (до 25-30 лет), лица с несколькими половыми партнерами, практикующие незащищенный секс, пациенты с другими ИППП (хламидиоз, сифилис, ВИЧ, трихомониаз), мужчины, практикующие секс с мужчинами (МСМ), коммерческие секс-работники. Рекомендуется ежегодный скрининг (иногда чаще – каждые 3-6 месяцев для МСМ). Скрининг включает исследование мочи (мужчины) и цервикальных мазков (женщины), а также орофарингеальных и аноректальных мазков (для МСМ).
3. Диагностики внеурогенитальных форм гонореи (орофарингеальная, аноректальная):Это особенно важно для мужчин, практикующих секс с мужчинами (МСМ), у которых орофарингеальная и аноректальная гонорея встречаются часто (30-50%), протекают бессимптомно, но являются источником заражения. ПЦР – метод выбора (бактериоскопия для этих локализаций имеет низкую чувствительность).
4. Диагностики гонобленнореи у новорожденных:ПЦР соскоба с конъюнктивы (быстро, высокочувствительно, позволяет начать лечение до получения посева).
5. Диагностики диссеминированной гонококковой инфекции (ДГИ):ПЦР крови (при сепсисе), синовиальной жидкости (при артрите), ликвора (при менингите), пунктата из кожных элементов.
6. Обследования половых партнеров:При выявлении N. gonorrhoeae у одного из партнеров, все половые партнеры за последние 60 дней должны быть обследованы и пролечены (даже при отсутствии симптомов). ПЦР – метод выбора.
7. Контроля излеченности после лечения:ПЦР (качественная или количественная) через 2-3 недели после окончания курса антибиотиков (более раннее исследование может дать ложноположительный результат – ДНК погибших бактерий). Цель – отрицательный результат. Важно: В отличие от хламидиоза, для гонореи контроль излеченности рекомендуется (особенно при беременности, у МСМ, при сохраняющихся симптомах, при лечении альтернативными схемами, при сомнительной комплаентности пациента).
8. Выявления устойчивости к антибиотикам:ПЦР с детекцией мутаций устойчивости (например, к фторхинолонам – мутации в генах gyrA, parC; к азитромицину – мутации в гене 23S rRNA; к цефтриаксону – мутации в генах penA, ponA, penB, mtrR). Это важно для выбора рациональной терапии, особенно при подозрении на устойчивость (после неэффективного лечения, у пациентов из регионов с высокой резистентностью, у МСМ).

 

Цель исследования

Основные цели качественного (и количественного) определения ДНК Neisseria gonorrhoeae:

1. Лабораторное подтверждение гонореи (урогенитальной, орофарингеальной, аноректальной)у пациентов с клиническими проявлениями (гнойные выделения, дизурия, боли) или при скрининге групп риска.
2. Скрининг гонореиу бессимптомных лиц из групп риска (сексуально активные молодые люди, МСМ, коммерческие секс-работники, пациенты с другими ИППП).
3. Диагностика внеурогенитальных форм(орофарингеальная, аноректальная) – метод выбора.
4. Диагностика гонобленнореи у новорожденных.
5. Диагностика диссеминированной гонококковой инфекции (ДГИ)– ПЦР крови, синовиальной жидкости, ликвора.
6. Обследование половых партнеров(за последние 60 дней).
7. Контроль излеченности после лечения(через 2-3 недели).
8. Выявление устойчивости к антибиотикам(ПЦР мутаций) для выбора рациональной терапии.

 

Что значат полученные результаты

Интерпретация результатов определения ДНК Neisseria gonorrhoeae всегда проводится врачом-дерматовенерологом, урологом, гинекологом, инфекционистом в контексте клинической картины (наличие гнойных выделений, дизурии, болей), а также с учетом анамнеза (половые контакты, рискованное поведение), данных бактериоскопии (при наличии), результатов других тестов (хламидиоз, сифилис, ВИЧ, трихомониаз, микоплазмоз). Референсное значение – «не обнаружено» (для качественной ПЦР) .

 

Референсные значения (качественная ПЦР):

• Отрицательный результат («не обнаружено»):ДНК Neisseria gonorrhoeae в исследуемом образце не обнаружена (или концентрация ниже предела чувствительности метода, обычно < 10-100 копий ДНК). Гонорейная инфекция маловероятна. Однако при отрицательном результате, но наличии клинических симптомов (гнойный уретрит, цервицит) – возможно, возбудитель другой (Chlamydia trachomatis, Mycoplasma genitalium, Trichomonas vaginalis, Ureaplasma urealyticum, другие бактерии). Рекомендуется мультиплексная ПЦР.
• Положительный результат («обнаружено»):ДНК Neisseria gonorrhoeae обнаружена в исследуемом образце. Указывает на наличие активной гонорейной инфекции (облигатный патоген!). В отличие от условно-патогенных микроорганизмов, N. gonorrhoeae не является частью нормальной микрофлоры ни у мужчин, ни у женщин. Обнаружение N. gonorrhoeae ВСЕГДА требует лечения (даже при отсутствии симптомов – бессимптомное носительство).

 

Количественная ПЦР (Real-Time PCR, количество ДНК в КОЕ/мл или геном-эквивалент/мл):

• < 10^2 – 10^3 КОЕ/мл (низкая бактериальная нагрузка):Может соответствовать ранней стадии инфекции (инкубационный период), хроническому течению, бессимптомному носительству (редко), или приему антибиотиков до анализа. Лечение обязательно (N. gonorrhoeae – облигатный патоген).
• 10^3 – 10^5 КОЕ/мл (умеренная бактериальная нагрузка):Характерна для клинически выраженной гонореи (острый уретрит, цервицит). Требует лечения.
• > 10^5 КОЕ/мл (высокая бактериальная нагрузка):Характерна для острого гнойного уретрита/цервицита, гонококковой инфекции верхних отделов половых путей (эндометрит, сальпингит, эпидидимит). Высокий риск осложнений (бесплодие, внематочная беременность). Требует немедленного лечения.
• Динамика (снижение на 2-4 log через 2-3 недели после лечения):Благоприятный прогноз, эффективность терапии.
• Отсутствие снижения или рост через 2-3 недели:Неэффективность лечения, устойчивость к антибиотикам.

 

Интерпретация в зависимости от клинической ситуации:

• Положительный ПЦР + симптомы (гнойные выделения, дизурия, боли):

• Интерпретация:Острая гонорея (уретрит, цервицит, проктит, фарингит). Требует немедленного лечения антибиотиками (цефтриаксон 500-1000 мг внутримышечно однократно + азитромицин 1 г внутрь однократно – по рекомендациям ВОЗ, но с учетом растущей устойчивости к азитромицину; альтернатива – цефтриаксон + доксициклин). Обследование и лечение половых партнеров (за последние 60 дней). Контроль излеченности через 2-3 недели.

 

Положительный ПЦР + отсутствие симптомов (случайная находка при скрининге):

• Интерпретация:Бессимптомная гонорея (носительство). Лечение обязательно (те же схемы), так как бессимптомное носительство приводит к осложнениям (бесплодие, внематочная беременность у женщин, эпидидимит, простатит у мужчин), а также к передаче инфекции половым партнерам.

Положительный ПЦР (орофарингеальный мазок) + отсутствие симптомов:

• Интерпретация:Орофарингеальная гонорея (часто бессимптомная). Лечение обязательно (цефтриаксон 500-1000 мг внутримышечно однократно + азитромицин 1 г внутрь однократно). Орофарингеальная гонорея труднее поддается лечению (требует более высоких доз цефтриаксона, иногда 7-дневный курс). Контроль излеченности через 2-3 недели (обязательно!).

 

Положительный ПЦР (аноректальный мазок) + симптомы (выделения, боль в анусе, тенезмы):

• Интерпретация:Аноректальная гонорея (проктит). Лечение обязательно (те же схемы, что и для урогенитальной).

 

Положительный ПЦР + бесплодие (женское или мужское) или привычное невынашивание беременности:

• Интерпретация:Гонорея может быть этиологической причиной бесплодия (трубное бесплодие, эпидидимит, простатит). Требует лечения обоих партнеров. После лечения – повторное обследование через 2-3 недели (ПЦР отрицательная). Планирование беременности рекомендуется не ранее, чем через 3 месяца после лечения (для восстановления проходимости труб, но трубное бесплодие может быть необратимым).

 

Положительный ПЦР у новорожденного (конъюнктивальный мазок):

• Интерпретация:Гонобленнорея (офтальмия новорожденных). Требует немедленного лечения (цефтриаксон 25-50 мг/кг внутривенно или внутримышечно однократно, промывание глаз физиологическим раствором, местно – мазь с эритромицином или тетрациклином). Обследование матери (и её половых партнеров).

 

Положительный ПЦР (кровь, синовиальная жидкость, ликвор) + лихорадка, артрит, сыпь:

• Интерпретация:Диссеминированная гонококковая инфекция (ДГИ). Требует госпитализации, внутривенного введения цефтриаксона 1 г в сутки 7-14 дней, иногда комбинация с азитромицином или доксициклином.

 

Важные нюансы интерпретации:

• gonorrhoeae – облигатный патоген!В отличие от условно-патогенных микроорганизмов (Gardnerella, Mycoplasma hominis, Ureaplasma), N. gonorrhoeae не является частью нормальной микрофлоры. Обнаружение N. gonorrhoeae (даже в низком титре, даже при отсутствии симптомов) ВСЕГДА требует лечения. Исключений нет.
• Ложноположительный результат:Возможен при контаминации образца (несоблюдение правил асептики, загрязнение реагентов), при использовании неспецифических праймеров (например, к гену cppB, который может быть у других нейссерий – Neisseria cinerea, Neisseria meningitidis). Современные тест-системы используют два независимых гена-мишени для исключения ложноположительных результатов. Частота ложноположительных результатов в хорошо организованных лабораториях составляет менее 0,5-1%.
• Ложноотрицательный результат:Возможен при неправильном взятии материала (недостаточное количество эпителиальных клеток), при длительном хранении образца (деградация ДНК), при подавлении ПЦР (ингибиторы в образце – кровь, слизь, препараты для местного лечения), при очень низкой концентрации N. gonorrhoeae (ниже предела чувствительности), при приеме антибиотиков до анализа (особенно цефтриаксона, азитромицина, ципрофлоксацина).
• Антибиотикорезистентность N. gonorrhoeae – глобальная проблема:Устойчивость к фторхинолонам (ципрофлоксацин) достигает 80-100% во многих регионах (они больше не рекомендуются). Устойчивость к азитромицину (макролидам) растет (10-30% в некоторых регионах). Устойчивость к цефтриаксону (цефалоспоринам последнего поколения) пока редка (менее 1-5%), но растет. ВОЗ рекомендует комбинированную терапию: цефтриаксон 500-1000 мг внутримышечно + азитромицин 1 г внутрь (однократно). В регионах с высокой устойчивостью к азитромицину – цефтриаксон + доксициклин (100 мг 2 раза 7 дней). Лечение должно основываться на региональных данных о резистентности. При неэффективности стандартных схем – посев с определением чувствительности к антибиотикам (антибиотикограмма) или ПЦР мутаций устойчивости.
• Контроль излеченности:Проводится через 2-3 недели после окончания курса антибиотиков (качественная ПЦР). Более раннее исследование (через 1 неделю) может дать ложноположительный результат (ДНК погибших бактерий). Цель лечения – отрицательный результат. При сохраняющейся положительной ПЦР – подозрение на устойчивость к антибиотикам (требуется посев с антибиотикограммой или ПЦР мутаций).
• Сочетанная инфекция с Chlamydia trachomatis:Гонорея в 30-50% случаев сочетается с хламидиозом. Поэтому при положительном ПЦР на N. gonorrhoeae рекомендуется проводить тестирование на C. trachomatis (мультиплексная ПЦР). Лечение должно охватывать оба возбудителя: цефтриаксон (против гонококка) + азитромицин (против хламидий, а также против гонококка).
• Обследование половых партнеров:При выявлении N. gonorrhoeae у пациента, все половые партнеры за последние 60 дней должны быть обследованы и пролечены (даже при отсутствии симптомов). Если последний половой контакт был более 60 дней назад – обследовать последнего партнера. Лечение партнеров проводят одновременно (чтобы избежать повторного заражения – «эффект пинг-понга»). Для партнеров можно использовать эпидемиологическое лечение (без предварительного обследования) – те же схемы, что и для пациента.

 

Факторы, влияющие на результат

На результат определения ДНК Neisseria gonorrhoeae могут влиять различные преаналитические, аналитические и биологические факторы:

 

Преаналитические (до взятия материала):

• Прием антибиотиковза 2-4 недели до анализа – приводит к ложноотрицательным результатам (снижение бактериальной нагрузки, разрушение ДНК). Это самый частый фактор ложноотрицательных результатов. Особенно важны цефалоспорины (цефтриаксон, цефиксим), азитромицин, фторхинолоны (ципрофлоксацин, левофлоксацин, офлоксацин), тетрациклины (доксициклин), спектиномицин.
• Использование вагинальных свечей, кремов, спринцеванийза 3-5 дней до анализа – может смывать эпителиальные клетки и удалять ДНК возбудителя (ложноотрицательный результат).
• Половой акт за 3 дня до анализа– может временно изменять микробиоту урогенитального тракта.
• Менструация– кровь содержит ингибиторы ПЦР, может вызывать ложноотрицательные результаты. Анализ сдают после окончания менструации.
• Недостаточное количество эпителиальных клетокв соскобе – причина ложноотрицательных результатов. Для мужчин – предпочтительнее первая порция утренней мочи (неинвазивно, чувствительность 90-95%).
• Несоблюдение правил асептикипри взятии материала – контаминация образца посторонней ДНК (ложноположительный результат).

 

Аналитические (на этапе лабораторного исследования):

• Контаминация реагентов и лабораторной посудыампликонами (продуктами ПЦР) – ложноположительный результат. Современные лаборатории используют системы с УФ-деконтаминацией и раздельные зоны для выделения ДНК и амплификации.
• Ингибиторы ПЦРв образце (кровь, слизь, препараты для местного лечения) – ложноотрицательный результат. Требуется специальная пробоподготовка (очистка ДНК).
• Нарушение температурного режима хранения транспортной среды(замораживание, перегрев) – деградация ДНК (ложноотрицательный результат).
• Чувствительность тест-системы:Разные коммерческие наборы имеют разную чувствительность (10-100 копий ДНК). Высокочувствительные тесты предпочтительнее для скрининга бессимптомных форм.
• Специфичность праймеров:Использование праймеров к гену cppB может давать ложноположительные результаты у других нейссерий (N. cinerea, N. meningitidis). Современные тест-системы используют два независимых гена-мишени (например, porA + opa, или porA + 16S рРНК) для повышения специфичности.

 

Биологические факторы:

• Бессимптомное носительство: gonorrhoeae может длительно персистировать в урогенитальном тракте без симптомов (особенно у женщин). Тем не менее, обнаружение N. gonorrhoeae требует лечения.
• Беременность– повышает риск диссеминированной инфекции (ДГИ). Скрининг на гонорею рекомендуется всем беременным (в I триместре и повторно в III триместре при сохранении риска).
• ВИЧ-инфекция (иммуносупрессия)– может увеличивать риск диссеминированной инфекции. Скрининг на гонорею рекомендуется ВИЧ-инфицированным (как минимум 1 раз в год, чаще – каждые 3-6 месяцев при активной половой жизни).

Лаборатория Бойченко гарантирует точность и достоверность результатов благодаря современному оборудованию и высоким стандартам качества.

---

Список литературы:

1. Клинические рекомендации Министерства здравоохранения РФ «Гонорея». 2021.
2. Клинические рекомендации Министерства здравоохранения РФ «Инфекции, передаваемые половым путем (ИППП)». 2020.
3. Workowski K.A., Bachmann L.H., Chan P.A. et al. Sexually Transmitted Infections Treatment Guidelines, 2021. MMWR Recommendations and Reports. 2021;70(4):1-187.
4. World Health Organization (WHO). WHO guidelines for the treatment of Neisseria gonorrhoeae.
5. Unemo M., Shafer W.M. Antimicrobial resistance in Neisseria gonorrhoeae in the 21st century: past, evolution, and future. Clinical Microbiology Reviews. 2014;27(3):587-613.